A tenyészet (bakteriológiai) kutatási módszer - studopediya
Bakteriológiai kutatási módszer (BLMI) - alapuló módszert izolálását tiszta tenyészeteinek baktériumok tenyésztésével táptalajokon és azonosítása a fajok alapján a tanulmány a morfológiai, tenyésztési, biokémiai, genetikai, a szérum, a biológiai, környezeti jellemzők mikroorganizmusok.
Bakteriológiai diagnózis felállítását végezzük standard diagnosztikai rendszer által jóváhagyott, az Egészségügyi Minisztérium.
Pure kultúra - egy típusú baktérium növesztett tápközegben, a tulajdonságait, amelyek a tanulási folyamat.
Strain - azonosított tiszta tenyészetéből egyetlen faj izolált mikroorganizmusok egy adott forrásból származó, hogy egy adott időpontban. Törzsek egy faj lehet kissé eltérő biokémiai, genetikai, szerológiai, biológiai és mások. Tulajdonságok, valamint a hely és az idő elosztása.
1. Nyilatkozat a etiológiai diagnózis: izolálása tiszta mikroorganizmus kultúra és azonosítását is.
2. azonosítása további tulajdonságokat, például érzékenysége a mikroorganizmus az antibiotikum és a bakteriofág.
3. meghatározása mikroorganizmusok száma (fontos a diagnózis okozott fertőzések IMOD).
4. gépelés mikroorganizmusok, azaz a. E. meghatározása Intraspecifikus különbségek alapján a tanulmány a genetikai és epidemiológiai (fagovarov törzsektől és) markereket. Ezt alkalmazzák a járványügyi célra, azaz a. A. Ez lehetővé teszi, hogy hozzon létre közösségi mikroorganizmusok kiosztott különböző betegek és a különböző környezeti tárgyak különböző kórházakban, földrajzi régiók.
BLMI több lépésből, eltérő aerob, fakultatív anaerob és obligát anaerob.
I. szakaszai BLMI elosztása egy tiszta tenyészete aerob és fakultatív anaerob.
A.Zabor, szállítás, tárolás, előkezelés anyag. Néha vetés előtt végezzük szelektíven az anyag kezelési tulajdonságait kibocsátott mikroorganizmus. Például, a vizsgálat előtt a köpet vagy más anyagból kislotustoychivyh jelenlétében Mycobacterium tuberculosis, az anyagot kezeljük oldatok, savak és lúgok.
B. beoltjuk a táptalajt (ha szükséges) .Ego elvégezni, ha az anyagban tartalmazott kis mennyiségű baktériumot, így például, a kiosztási vérben kultúra. Erre a vért venni a magassága a láz nagy térfogatú (8-10 ml felnőttek, 4-5 ml gyermekeknek) oltottuk szerdán 01:10 (leküzdeni baktericid hatását a vér tényezők); beoltás át inkubáltuk 37 0 C-on 18-24 órán át.
B. Mikroszkóp vizsgálati anyag. A vizsgálati anyag elkészítése kenet, megfestened Gram vagy más módszerrel, és a mikroskopiruyut. Értékeljük a jelen mikroflóra, annak mennyiségét. További vizsgálatok során el kell különíteni a mikroorganizmusok jelen az elsődleges kenetben.
A vetés a tápoldatban a izolált telepeket kapjunk. A beoltott anyag hurok vagy spatulával mechanikai disszociáció egy csésze differenciál diagnosztikai vagy szelektív közegben annak érdekében, hogy izolált telepeket kapjunk. Vetés után perevora csésze-Chiva alulról felfelé (elkenődés elkerülése érdekében telepeket cseppecskék kondenzálódó folyadékot) megjelölés és inkubátorba helyezzük 37 0 C-on 18-24 órán át.
Emlékeztetni kell arra, hogy amikor a növények és az újratelepítés mikrobatenyészetek figyelmet kell fordítani a dolgozó aszeptikus szennyeződésének megakadályozása a táptalaj és a fertőzések elkerülése mások és önmegfertőzés!
Abban az esetben, által okozott fertőzések opportunista mikroorganizmusok, amely számolja a számát jelenlévő mikroorganizmusok kórbonctani anyag, kvantitatív Do szemcseképző anyagra, amely előre elkészített sorozat 100-szoros hígítás az anyag (általában 3 hígítások) steril izotóniás nátrium-klorid-oldattal a kémcsövekben. Ezután 50 ul mindegyik hígítást bevonatú táptalajon Petri-csészében.
A tanulmány a morfológiai típusú telepek média, a mikroszkóp segítségével. A nézők csésze és figyelmét az optimális táptalaj, növekedési üteme, a természet a mikroorganizmusok növekedését. Vizsgálni vybirayutizolirovannye telepeket mentén az érintés, közelebb a központhoz. Ha nő többféle telepek - minden vizsgált külön-külön. Becsült aláírja telepeket (táblázat. 7). Ha szükséges posevamiprosmatrivayut csésze egy nagyító vagy mikroszkóp egy kis zoom objektív és szűkült nyíláson. Learn színező tulajdonságok különböző morphotypes telepek ezt a részét a tanulmány kolónia készít kenet, Gram-festés vagy más módszerekkel, és határozza meg a morfológia mikroskopiruyut tisztasági kultury.Pri szükséges, adjon indikatív a RA üveg polivalens szérummal.
B. A felhalmozódás nettó kultúra. A felhalmozási tiszta tenyészetben morphotypes összes izolált telepeket tenyésztettük külön csövekben egy ferde agar, vagy bármely más növekedési közeg, és inkubáltuk egy inkubátorban 37 0 C-on (ez a hőmérséklet az optimális a legtöbb mikroorganizmus, de lehet más, például, Campylobacterium spp . - 42 0 C, Candida spp és Yersinia pestis -. +25 0 C).
Mivel a tárolóközeg számára enterobaktériumok általánosan használt Kligler közegben.
A táptalaj összetétele Kligler: IPA, 0,1% glükóz, 1% laktózt reagens a hidrogén-szulfid (vas-szulfát + + nátrium-tioszulfát, nátrium-szulfit), fenolvörös indikátort. Az eredeti szín a közepes málna piros, szerda „ferde” a kémcsövek: oszlop (2/3) és egy ferde felülete (1/3).
Vető szerda Kligler előállított csíkos egész felületén és megszúrja egy oszlopra.
A. számviteli növekedési tárolóközeg, a kultúra tisztaság értékelést egy kenet Gramu.Otmechayut növekedési minta kiválasztott tiszta tenyészet. Vizuálisan tiszta tenyészet jellemzi egységes növekedést. Mikroszkopikus vizsgálata festett kenetek előállíthatjuk egy kultúra, hogy a különböző látómezőben Detect-él és színező morfológiailag egységes sejtek. Azonban, abban az esetben az expresszált pleomorphism rejlő neko torym-típusú baktériumok kenetek tiszta tenyészetek történhet egyidejűleg különböző sejtek morfológiája.
Ha a használt tárolási közegben Kligler jelző közegben, megváltoztatja a színét értékelik az oszlopban, és az összeszűkülő rész, amelyek meghatározzák a biokémiai tulajdonságok: fermentáció glükóz, laktóz és a hidrogén-szulfid termelés. Amikor a bomlása laktóz sárga lejtős része a környezet, bomlásából származó glükóz - sárga sáv. Amikor a kialakítási A CO2 bomlása során képződött cukrok gázbuborékok vagy szünetet oszlopon. Abban az esetben, hidrogén-szulfidot termelnek feketedés megfigyelt az injektálás során az átalakítás során a vas-szulfát a vas-szulfid.
Character Kligler változások (ábra. 23) az magyarázza, egyenlőtlen közepes színintenzitás hasító mikroorganizmusok nitrogéntartalmú anyagok és a kialakulása a lúgos termékek aerob (a kúpos felület), és anaerob (bar-ban) körülmények között.
Aerob körülmények között, a ferdén levágott felülete schelocheobrazovanie intenzívebb, mint az oszlopban a közeg. Ezért, amikor a bomlási glükóz van jelen a tápközegben kis mennyiségben, ami képződik a kúpos felületen gyorsan semlegesített savas. Ugyanakkor a bomlási laktóz a közegben jelen nagy koncentrációban, lúgos kémhatású termékek nem képesek a sav semlegesítése céljából.
Anaerob körülmények között az oszlop alkalikus termék nyomokban kialakul, így detektáljuk a fermentációs glükóz.
Ábra. 23. Indikátor szerda Kligler:
2 - a növekedés a E. coli,
3- növekvő S. paratyphi B,
C4 növekedési S. typhi
E. coli lebomlanak glükóz és laktóz a gázképződés, nem termelnek hidrogén-szulfidot. Ezek okozhat sárgás az oszlopot, és a kúpos részben a különbség a.
S. paratyphi bomlanak glükóz puffadás, laktozootritsatelny. Az általuk okozott sárgás oszlop könnyek, ferde része nem vált színt, és továbbra is vörös. Így S. paratyphi B termék hidrogén-szulfid (a során az injekció megjelenik fekete színt), S. paratyphi A nem termel hidrogén-szulfidot.
S. typhi lebomlanak glükóz gáztermelés nélkül, laktozootritsatelny, hidrogén-szulfid. Az általuk okozott sárgás oszlop törések nélkül, ferdén levágott része nem vált színt, és továbbra is bíbor, a kurzus az injekciós feketének látszik.
Shigella spp. glyukozopozitivny, laktozootritsatelny nem termel hidrogén-szulfidot. Az általuk okozott sárgulás az oszlop (vagy anélkül szünetek őket, attól függően, hogy a szerotípus), ferdén levágott rész nem vált színt, és továbbra is vörös.
B. A végleges azonosítást a tiszta tenyészet (meghatározását a taxonómiai helyzetét az izolált mikroorganizmus faj szintjén, vagy variáns), és meghatározzuk a kiosztott spektrum tenyészet érzékenységét az antibiotikumokkal.
Az azonosításhoz a tiszta tenyészet ebben a szakaszban a tanuló a biokémiai, genetikai, szerológiai és biológiai jellemzői (táblázat. 8.).
A rutin laboratóriumi gyakorlat azonosítása nem szükséges, hogy megtanulják az összes tulajdonságait. Ispolzuyutinformativnye álló, egyszerű vizsgálatokat elegendő meghatározni a fajokat (variáns) szolgáltatja az izolált mikroorganizmus.