Izolálása tiszta tenyészetek baktérium egyetlen sejtből - agroarhiv mezőgazdasági anyagok

Izolálása tiszta tenyészeteinek fitopatogén baktériumok egyetlen sejtből nagyon fontos a tanulmány a telepképződés, reprodukciós folyamatok, változékonyság és öröklődés hatása bakteriális kórokozók a növények különböző fertőtlenítőszerek, antibiotikumok, stb Sok izolálási eljárásait egyedülálló sejtek az irodalomban javasolt. Itt bemutatunk egy leírást néhány közülük.

Tört módszer Pasteur
Ezt a módszert már nagyon ritkán, és nagy történelmi jelentőségű. Ez áll a következő.
Egy kis mennyiségű anyagot vezetünk be egy injekciós üvegek számát a steril tápközegben vagy más folyékony tápközegben olyan módon, hogy az utolsó csőben maradt körülbelül egy sejt, ahol a reprodukció a tiszta tenyészet kapunk. Ezt úgy valósítjuk a következőképpen: egy csepp a vizsgálati anyagot tartalmazó feltételesen 1000000 bakteriális sejteket vezetünk be egy kémcsőbe 10 ml táptalaj és alaposan összekeverjük. Ezután ez a cső 1 ml vittünk át egy másik (például 10 ml táptalaj), majd ismét alaposan összerázzuk. Ez a folyamat a szekvenciát addig ismételjük öt-hat alkalommal. Az utolsó csövet kap egy bakteriális sejtben, amelyből akkor alakul ki tiszta tenyészet.

hígítási módszerrel, majd szélesztés szilárd táptalajon
Től 1 ml baktériumszuszpenziót tartalmazó 30 millió mikrobiális szervezetek (fotometriás módszer), a szabályok betartása mellett a sterilitás termelnek tízszeres hígításokban 10c-8.
Így, az utolsó előtti csőben (hígítási 10c-7) kell lennie körülbelül három mikrobiális sejtek. Ezután 1 ml mindegyikének az utolsó három hígításban visszük át egy spatulával, és egyenletesen terítjük szét a Petri-csészébe szárított burgonya-agar lemezeken vagy más szilárd tenyésztési tápközeg. A lemezeket inkubátorba helyezzük egy napig, majd szobahőmérsékleten tároljuk. A harmadik napon, egyedi telepeket termesztett csésze. Ha ezt a technikát, akkor feltételezhetjük, hogy az egyes nőtt telep egyetlen sejtből.
További szitálással felszíni hígított kiindulási anyag használható a szűrővizsgálati módszer mélysége szilárd táptalajon P. Koch. Az eljárás jelentős hátrányai vannak - kolónia közepes vastagságú lassan növekszik, a morfológiai jellemzők nem tipikus, eltávolítja az ilyen telepekből nehéz. Ezért szükséges, hogy használjon olyan módszereket, feltételeket teremteni izolálására a tiszta tenyészet egy ismert bakteriális sejtek. Ez úgy történik, irányítása alatt a mikroszkóp segítségével mikromanipuláció eszközök.

mikrotelepek módszer
Összehasonlítva a módszerrel plansifters bakteriális mikrotelepek szuszpenziót a módszernek az az előnye, hogy ha azt rávisszük készül egy közvetlen kiválasztása egyetlen sejttenyészet.
A módszer abból áll, hogy a mikroorganizmus sejteket, hogy tenyésztési, előkészítése erősen hígított szuszpenzió 0,5% agar vagy zselatin, amely egy vékony réteg felületén steril üveg. Üveg felett van rögzítve nedves kamrába formájában üveglapon vagy mélyedések vyshlifovannymi gyűrűt.
A gyógyszer jelölt a mikroszkóp alatt szabályozzák az egyes sejtek inkubátorba helyezzük, amíg a telepképződést. Ezután, egy pipettával vagy hurok telepeket átvisszük külön kémcsövekbe.
mikrotelepek módszer lehetővé teszi, hogy használja a nagy nagyítású mikroszkóp és mikrotelepek viszonylag megbízhatóan védi a kiszáradástól és a szennyeződés kívülről.
Technikailag a módszer is rendelkezésre áll, és megbízható, mint az átutalás a táptalaj sejtek nőtt kolóniát és nyers kizárt és megbízhatatlan transzfer a kezében egyedi kis sejtek.

Módszer agar blokkok Erskova
A mikroorganizmus-szuszpenziót viszünk rétegenként Agapa 2- 3 mm vastagságú, és elhelyeztük egy steril üveg, majd külön a agar négyzetek folyadékokat steril üveg fedőlemezeken kereszt-bélelt, amely zárva van a felületet steril fedőlemezzel. Mikroszkóp alatt egy száraz vagy egy merülő rendszer és a matt világítás, jelölje meg az négyzetének agar, amelyek egyetlen sejt. A poharakat inkubátorba helyezzük. Szeletek agar kinőtt telepek ott a redukciót platina tű át a tápközeghez.
A fő hátránya ennek a módszernek - a szennyeződés lehetőségét a környező levegő.

Hort módszer perforált lemezek
A felszínen a steril mikroszkóp tárgylemez egy vékony réteg agar öntjük, amely megszilárdulása után alkalmazzuk erősen hígított baktérium szuszpenziót. Bírságot szabhat az agar lemezen, és a celluloid perforáló a felső borítja steril fedőlemez. A mikroszkóp alatt, jegyezze fel a sejt, amely egy cellát. Kinőtt telepeket ezekben a sejtekben carry „szigony” tápoldatban.

"Mercury pajzs" módszer Topley, Bernard és Wilson
Ez a módszer a következő: kis mennyiségű hat órás tenyészetet a teszt baktériumok vezetünk be egy 10% -os zselatin-pepton víz és azokat 37 ° C-on 2 órán át. Kis csepp zselatin hurok alkalmazott steril mikroszkóp tárgylemez és fedett steril fedőlemez kvarcból vagy selinita. A folyadékot kell elosztani vékonyra, és nem tartalmazhatnak légbuborékokat. A mikroszkóp alatt egyetlen sejten. A kvarcüveg a sejt egy vékony vas huzal bevont higany csepp. A készítményt ezután besugározzuk ultraibolya fénnyel kvarc lámpa (1 percig a parttól 7,5 cm-re a lámpák). Ennek eredményeként az összes baktériumot, kivéve védett higany meghal. Nap után a túlélő sejtek fejlődnek telepeket, amelyek passzáltuk folyékony közegben.