Termesztése vírusok
Termesztése vírusok - növekvő vírusok in vitro állatokat fertőző, sejttenyészetek és a szöveteket. K. in. termelő diagnosztikai célokra (betegkiválasztás és hordozók) a kísérleti munka (vírusok tanulmány) gyártására virális vakcinák és diagnosztikai készletek.
A vírusok reprodukálni csak élő sejtekben, így a felhalmozási vírusok állatokban vagy sejttenyészetekben és a szöveteket. Így tehát egy adaptációja a vírus segítségével a betegtől vagy hordozóval, hogy az új körülmények között. A kevésbé mesterséges rendszer eltér a természetes, annál könnyebben végzik az alkalmazkodás a vírus.
akkor kell használni a legérzékenyebb rendszer az optimális virális replikáció és a fertőzés költések erősen hígítva friss anyagot, mint inaktivált vírus részecskék megakadályozhatják a reprodukciója a fertőző virionok. A rendszer, egy raj-vírus átmegy egy teljes ciklus reprodukciós nevezik permisszív (lehetővé téve). A nem tevő (nem megengedő) rendszer lép fel részleges sokszorosítása ciklusban a vírus, vagy ő nem lehet reprodukálni. Megengedő a vírus rendszer lehet nem felelő mert ha változik a tenyésztési körülmények esetén, például a hőmérséklet-változás.
Állati ápolják azokat okozó vírusok nekik egyértelmű képet a klinikai vagy patológiai (pl. A fejlesztés a bénulás egerekben a vírus a veszettség fertőzés vagy tüdőgyulladás influenza fertőzés). Sok vírus jobban nőnek alacsony differenciált szövetek embriók madarak és emlősök újszülött, mint a felnőtt állatokban.
K. in. használva egerek, patkányok, tengerimalacok, nyulak, szíriai hörcsögök, görények, majmok, csirkék, stb felnőtt egerekben tenyésztettünk influenza vírus, veszettség, sok Togaviridae .; egér-balekok nélkülözhetetlenek növekvő számú vírusok és Coxsackie Togaviridae sorozat arenavírusok - kórokozók vírusos vérzéses lázat.
Standard eredmények használt állatok vírusok, kell genetikailag homogén. Ezt a célt szolgálja az átkelés beltenyésztett laborban. állatok - testvérek vagy szülő-gyermek, és ezáltal egyre nagyobb mértékben homozigozitás.
Ahhoz, hogy sikeresen K .. amellett, hogy a fajok és az állatok életkora, van egy értéke beadási az anyag, mivel a a vírus tropizmusát. Ezért a legtöbb esetben, a szaporodás miatt a vírus a szervezetben az állat meg kell oltani érzékeny szövetet. Csak néhány vírus állat patogén bármely eljárással beoltás (pl. Virus venezuelai ló encephalitis egerekben).
A legtöbb Neurotrop vírusok tenyésztése bevezetésével őket a agyfélteke az állatok. Ezek az egerek a fertőzött különböző Togaviridae, Bunyaviridae és más arbovírusok. Veszettség vírus adjuk be azonos módon egerekbe, nyulak, birkák és kutyák, koriomeningi vírus - egerek és tengerimalacok. Ezzel a vírus tenyésztése a gyermekbénulás, a majmok beoltott vele a gerincvelő vagy thalamus az agyban. Gyakran, amikor neurotrop tenyésztett vírusok azok állatoknak adjuk be a hasüregbe, de ez a módja intracerebrális beadás gyengébb érzékenysége. Légúti vírusok tenyésztése általában orron fertőzés - eltemetni őket Noe altatott állatoknak vagy aeroszol formájában adagoltuk egy speciális kamrában.
Az adenovírusok oltunk szubkután vagy szíriai hörcsögök nyálkahártyán pofazacskója, herpeszvírus majmok - nyulak bőrbe és a himlő vírus - a megkarcolt bőrre (nyúl, borjú, csirke). Pox vírusok és herpeszvírusok lehet tenyészteni scarified nyúl szaruhártya. A bevezetése vírusok izomba, intravénásán, orálisan, és rektálisan ritkán használják. Intravénás fertőzése tengerimalacok, hörcsögök és görények technikailag nehéz, hanem az anyag leggyakrabban injektált az üreg a szív.
K. in. Állat nagyon nehéz a jelenléte a testükben különböző baktériumok, mycoplasma és vírusok, amelyek szennyezhetik a tenyésztett vírust. Előfordul, hogy a vírus a szervezetben az állat teremt immunitás a termesztését a vírus, például az ügynök ectromelia egerek a vírus a vakcina.
Csökkentése a szennyeződés kockázatát Az idegen tenyésztett vírusok kórokozók egyre állatok felhasználásával felvetett elszigetelten. Ebből a célból az állatok ingyenesen megkapja specifikus faj kórokozókkal - SPF (specifikus kórokozóktól mentes). Anyjuk kell viselnie fertőzések placentán. Pups visszanyert császármetszéssel, hogy bevezetjük a bélben nem patogén baktériumok, például, a tejsav, aminek következtében azok táplált SPF nőstények. A jövőben ezek az állatok szaporodnak a szokásos módon. Tartalmazza azokat zárt területeken, ahol steril levegőt juttatnak, élelmiszer, a víz és így tovább.
Háziállatok, mentes minden kórokozók szereplő speciális dobozok alatt több szigorúan elkülönítve (lásd. Steril állatok).
Az embriókat a madarak a differenciálatlan szövetek alkalmasak termesztésére sok vírus. Az optimális eredmény érték típusa és kora, a embriók fertőzött utat beadott dózis és inkubációs hőmérséklet. Gyakran használják csirke embriókat. Ezek a legérzékenyebbek a 13. napon át inkubáltuk. A beoltott vírusok általában chorio-allantois membrán, sziktömlőjébe, a magzatvíz és az allantois üreget; Az agyban az embriók és intravénásan (kagyló hajók) vírusokat ritkán alkalmazzák. Peteburkában termesztik sok Togaviridae; influenzavírusok és inf. Mumpsz jól művelt a magzatvízben üregében 10 11 napos embriók, az influenzavírus szaporodik nemcsak a sejtek a magzatburok, hanem a légcsövet és a tüdőket az embrió. Pox vírusok stb csoportok. Termesztett chorio-allantois shell fertőzni 10-13 napos embriók természetes útján légzsák, vagy egy lyuk az oldalán a petesejt felszínén való létrehozása után egy mesterséges légzsákot. Fertőzés hatására bármilyen embriókat is megsérült, így a halál az első 24 órában tekinthető specifikus. Az optimális mennyiség a vírus fertőzés során - 1000-1010 000 fertőző adagot. K. in. embriók általában akkor fordul elő t ° 36-37 °. Egyes vírusok, mint például a vaccinia vírus szaporodni a hőmérséklet meghaladja a 40 ° C, míg a kórokozója himlő tenyészthető a hőmérséklet nem magasabb, mint 38,5 ° C. Hőmérséklet-érzékeny mutáns vírusok általában csökkenteni patogenitást, tenyésztett t ° 25-28 °.
A szorzás embriók vírusok okozhatnak haláluk (sok arbovírusok, enkefalomiokardítisz vírus stb), a megjelenése változás a chorio-allantois membrán (variolavírus), vagy a szervezetben az embrió, a felhalmozási magzati folyadékok hemagglutinin (az influenzavírusok, mumpsz) és a komplement-vírus antigént.
A legtöbb ismert vírusok is termeszthető sejttenyészetekben és szövetekben (lásd.). A leggyakrabban használt egyrétegű primer vagy folyamatos sejttenyészet, az üveg, ritkán használt szuszpenziós tenyészetek. Az elsődleges tenyészeteket a sejtek vírusok által adaptált könnyebb, mint az átültetett. humán vírusok nő a legjobban kultúrákban az emberi sejtek és majom vese sejtekben.
Az optimális dózis a vírus a fertőzés során - 50% 0,1-0,001 szöveti citopatikus adag sejtenkénti vírus. A kötet a inokulum, hogy kicsi. A vírus adszorpciót végeztünk 1-2 órán át. t ° 37 °, majd az inokulumot eltávolítottuk, ha sejtekre toxikus. A táptalaj kell egy pH 6,9 - 7,2. Ha-szérumot adtunk hozzá, az utóbbi nem tartalmaz antitesteket vagy nem-specifikus inhibitorok vonatkozásában a termesztett vírus. A legintenzívebb reprodukciója a legtöbb vírus történik t 36-37 °; alacsonyabb hőmérsékleten (33 °) tenyésztett rhinovírusok.
Amikor K .. abból a célból, elszigetelten fertőzött szervek igen hatékonyan, hogy a sejteket a szövet maga után tripszinezéssel (pl. mandula szövet elkülönítésére adenovírus).
Sokszorosítása legtöbb vírus kíséri sejtkárosító változásokat. A maximális mennyiségű vírus általában a tenyészetet során megfigyelt degenerálódása 75% a sejtek. A vírusok szaporítása, a nem-citopátiás aktivitást, állítható be gemadsorbtsii reakció (és sok mikso- Togaviridae), immunfluoreszcens, vizsgálatával táptalaj jelenlétére hemagglutinin (pl. Miksovirusy) vagy komplement-vírus antigén, és a kísérletek állatokon (vírus veszettség). Egyes vírusok lehet azonosítani, hogy képesek gátolni a sejtkárosító vírus szaporodásához, azaz a. E. A jelenség az interferencia (pl. Tenyészetében csibeembrió fertőzött sejtek madár leukózis vírus, nem szaporodik Rous szarkóma vírus). Egyes vírusok zárvány sejtekben.
A legtöbb vírus szaporítása utáni a sejtekben ki a táptalajba, számos más maradványok cellákkal társított (himlő-vírus, adenovírus), néhány herpeszvírusok el kell ültetni intakt sejtekkel, mert a pusztítás azok inaktivált sejtek. Előfordul, hogy a vírus és a sejt kölcsönhatás alakul cron fertőzés. Pl. fertőzött koriomeningi átültetett emberi sejt képes a inf. a vírus során több generáció.
A növekedés a humán koronavírusok és néhány mások szövettenyészetek, t. E. Termesztett a testen kívül szövet töredékek. Gyakran használják nyúl hörgőszöveteket. A szaporodás a vírus ebben az esetben a bíró, hogy hagyja abba a mozgást, a csillók szövettenyészetben.
Meg kell figyelembe venni a lehetséges jelenléte a tenyészetekben a sejtek és szövetek különböző vírusok és MYCO-plazmák. Ezeket lehet a sejtekkei együtt, ha az utóbbi vesznek a fertőzött szervezet kap tripszin, vagy használják a tápláló szérum közegben összetevő.
Adaptálása a vírust a mesterséges tenyésztési körülmények szükségessé néhány passzázs gyorsan követik egymást egy kis adag a vírusfertőzést. Jellemzően, az intenzitás a reprodukció a vírus egyidejűleg jelentős mértékben megnő. Előfordul, hogy a vírus kiigazítás után a rendszer lekéri a szaporodási képességük más rendszerekben. Frissen izolált vírusok több műanyag, mint a hosszú termesztett bármelyike beállítást. K. in. a mesterséges körülmények között gyakran vezet, hogy csökken a saját patogenitási természetes gazdaszervezetekben, mint előállításához használt vakcina törzsek. Kedvezőtlen tenyésztési körülmények (alacsony érzékenységű rendszerrel, vagy, ha a fertőzés túl magas dózis) képezhetnek hibás vírus részecskéket tartalmazó genomot, vagy csak egy része nem rendelkező nukleinsav-te. Egyes vírusok általában nem tenyészthető in vitro vagy reprodukció leáll után néhány részeket.
Tartsuk vírusok több napig lehet t ° 4 ° környezetben pH kb. 7.0. Stabilitás közülük növeli, miközben eltávolítja sejt fragmentumok és a szérum hozzáadásával (10%), glicerin (50%), vagy fölözött tej (50%). Minden vírusok jól megőrzött t ° -70 °, és az alábbiakban a hermetikusan zárt edényekben; Sok életképesek maradnak hónapokig vagy akár évekig. A himlő vírusok és enterovírusok jól konzervált t ° -20 °. Fagyasztás a vírus kell gyorsan végbemehet. Ahhoz, hogy növeli a stabilitást a vírust hozzáadjuk, hogy a környezet, savófehérje, csirke tojássárgája, peptont, szacharóz vagy glükóz. Stabilizátorok hatása a különböző vírusok egyenlőtlenül. A vírusok életképesek maradnak sokáig, és liofilizálás után. Ahogy stabilizátorok használható pepton (10%), a tej (50%), szacharózt, zselatint, vagy csirke tojássárgája (10%). A liofilizált vírust alatt kell tartani, vákuumban vagy semleges gáz (pl. Nitrogén) t ° 4 ° vagy -15 °.
Irodalom: Laboratóriumi diagnosztika vírusos és Rickettsia-betegségek, ed. Lennet E. és H. Schmidt, Trans. az angol. M. 1974 A körülbelül egy liter körülbelül MI C, és n és p u AA és Remezov PI virológiai és szerológiai vizsgálatok a vírusos fertőzések, L. 1972 Starke, et al., Virology Gyakorlati, transz. vele. M. 1970 refs.; Összehasonlító diagnózisa vírusos betegségek, ed. E. Kurstak a. C. Kurstak, v. 1-2, N. Y. egy. o. 1977.