4. téma fehérje hidrolízis
Hidrolízis - felbomlása komplex anyagoknak egyszerűbb alkatrészek kapcsolódó víz hozzáadásával, hogy a szakítás kapcsolatok. Attól függően, hogy a használt katalizátort megkülönböztetni savas, lúgos és enzimes hidrolízis. Amikor egyszerű hidrolízissel végtermékek fehérje az egyetlen aminosav. A test fehérje hidrolízis során állandó, mint az emésztés, és az életfunkciók hatására proteolitikus enzimek sejtek.
A savas hidrolízis fehérje elpusztulnak, egyes aminosavak: triptofán van kitéve teljes pusztulás, és a szerin, treonin, cisztein, tirozin, fenil-alanin - részleges. Azonban, a százalékos pusztítás ezen aminosavak alacsony. Amikor a lúgos hidrolízisével fehérjék feltüntetett erősebb leépülése aminosavak. fehérje-hidrolizátumok hasznos gyógyászati készítmények.
Lab №9 savas hidrolizáló fehérje
A savas hidrolízis fehérjék szünet először a nagy molekulatömegű peptidek, majd kis molekulatömegű peptidek, dipeptidek, és végül aminosavaknak.
Teljes fehérje hidrolízis következik be sok órán keresztül visszafolyató hűtő alatt egy oldatot egy gömblombikban hidegebb levegőt jelenlétében sósav vagy kénsav.
Reagensek és eszközök:
1) tojás fehérje-oldatot; 2) HCl, konc.; 3) NaOH, 10%; 4) H2 SO4. 1%; 5) gömblombikban léghűtő; 6) elektromos hálózat burkolólap azbeszt; 7) állvány.
1. savas hidrolízise egyszerű fehérje. A hidrolízis adagolunk 20 ml oldatot tojásfehérje egy gömbölyű fenekű lombikba, és 5 ml tömény sósavat, a lombikot lezárjuk, hosszú üvegcső és rögzített, hogy az állvány az azbeszttel mesh. Tartalom melegítjük (fülke alatt) 45-90 min.
2. megnyitása a közbenső termékek a fehérje lebontás a hidrolizátumban a biuret reakció. Az adagolás befejezése után a forró cső öntsünk 5 csepp fehérje hidrolizátum, és semlegesítjük 10% -os lúgoldatot a vörös Lakmusz (darab lakmusz csökkentette a csőbe, majd keverjük egy üvegbottal). Semlegesítés után a hidrolizátumot (a kékülési lakmusz) biuret reakciót úgy hajtottuk végre, hogy 2 csepp CuSO 4.
Intermedierek fehérje lebontás - pepton - során biuret reakció így egy rózsaszín vagy vörös szín, és a fehérjék - a kék-ibolya.
A teljes fehérje hidrolízis (akár 2,5 óra biuret reakció aminosavak a fehérje hidrolizátum negatív.
Végére a hidrolízis a hidrolizátum használt laboratóriumi munka №10.
Laboratóriumi munka №10 formolovoe titrálással (a Serensenu)
Amikor a protein hidrolízise miatt törés a peptidkötések benne növekszik mindkét karboxil és amin-csoportok ekvivalens mennyiségben. Ahhoz, hogy meghatározzuk a karboxilcsoportok száma használunk Sorensen módszer.
Aminosavak vizes oldatokban intramolekuláris sók, azonban közvetlenül titrált karboxilcsoportjai aminosavak alkáli lehetetlen anélkül, hogy először blokkoló az aminocsoportokat formaldehiddel. A reakció során formaldehiddel, amino-csoport, elveszíti alapvető tulajdonságait.
A kapott metilén-vegyületet (metilenaminokislota) könnyen titráljuk lúggal.
Meghatározása a karboxilcsoportok száma titrálással, ugyanabban az időben akkor lehet megítélni a aminocsoport-tartalma, mint a számos titrálható karboxilcsoportok ekvivalens száma amin csoportokat formaldehiddel. formolovogo titrálási módszer lehetővé teszi, hogy az előrehaladás figyelemmel kísérése fehérjehidrolízishez és tanulmányozza az intézkedés a fehérjebontó enzimek.
Vége fehérje hidrolízis egybeesik a pillanatot, amikor az összeg a amin- és karboxil-csoportok a hidrolizátumban megszűnik növekedni, és van egy negatív reakciót biuret.
Reagensek és eszközök:
1) állati szén, finom eloszlású; 2) CH 3 COOH, 1%; 3) semleges formalin, 20%; 4) fenolftalein; 5) NaOH, 0,005 N.; 6) sósavval vagy CH3COOH, 1%; 7) kúpos lombikban 50 ml; 8) pipettázás 1 ml és 2; 9) microburet; 10) a mérőhengert 25 ml.
1. titrálása a karboxil csoportok a fehérje oldatban hidrolízissel. Bemérjük a lombikba 1 ml tojásfehérje oldatot öntünk 5 csepp 20% -os semleges formalin-oldatot és 3 csepp 0,5% fenolftalein-oldatot adunk. Titráljuk 0,005 N microburet. NaOH-oldatot, hogy a stabil halvány rózsaszín színezőanyag.
2. titrálása karboxilcsoportok hidrolízise után a fehérje (azaz a hidrolizátumot). Miután 45 vagy 90 perc múlva a hidrolízis megszakad, a lombikot és öntsük (csipet) faszénnel színtelenítő barnás oldatot keverjük, és 5 percig forraljuk. A hidrolizátumot ezután lehűtjük, vízbe öntjük egy henger, a folyadék térfogatát 25 ml-re desztillált vízzel, és szűrjük.
Bemérjük a lombikba 1,25 ml hidrolizátum oldatához hozzáadtunk 3 csepp fenolftalein-oldatot adunk, és semlegesítjük 10% -os nátriumhidroxid oldatot makrobyuretki enyhén rózsaszín elszíneződés. Amennyiben a semlegesítést elszíneződés élénkpiros, majd cseppenként hozzáadtuk a fehérítő oldat 1% -os ecetsavval, amelynek feleslegét semlegesítjük 1% nátrium-hidroxid-oldatot, hogy világos rózsaszín elszíneződés. Ezután öntsünk 5 csepp 20% -os semleges formalin-oldatot, és színtelenítjük oldatot titráljuk 0,005 N. NaOH-oldatot, amíg a halvány rózsaszín színű, és vegye figyelembe, pontosan annyi töltött lúg.
3. kiszámítása amino-nitrogén termelt száma töltött maró alapján annak normalitás.
Töltse ki a táblázat 5.