Módszertani utasítások a halpszondomonoszások laboratóriumi diagnosztikájára
1. Általános rendelkezések
1.1. A Pseudomonas a meleg víz, a hideg víz és az akváriumi hal fertőző betegsége. a tavakban és az ipari gazdaságokban.
1.2. Az aktivátorok olyan pseudomonosis fertőző baktériumok a Pseudomonas nemzetségbe tartozik. A legáltalánosabb Ps.fluorescens, Ps.putida, Ps.aureofaciens, Ps.cyprinisepticum, Ps.intestinalis, Ps.anguilliseptica, Ps.chlororaphis. Mindegyik faj okozhat betegséget függetlenül társítva egymással vagy más mikroorganizmusok.
1.3. A bakteriológiai kutatások során csak élő beteg halat veszünk. Minden esetben legalább 5 példányt kell vizsgálni a betegség jeleivel.
2. Bakteriológiai vizsgálat
2.1. Az üledékeket aszcitikus folyadékból, májból, vesékből, lépből állítják elő a vérből (külön-külön minden mintából) MPA-hoz (pH 7,2-7,4) rendelkező lemezekre.
2.2. A betegséget szeptikus áramlás jellemzi, ezért vérből és parenchymás szervekből származó növények általában szabályozzák a kórokozó tenyészet bőséges növekedését.
2.3. A vetést elvégezhetjük egy hurok beoltásával, a vizsgált szervbe merülve, néhányszor elfordítva vagy ívelt pofával.
2.4. A növényeket 25-26 ° C hőmérsékleten 48-72 órán át inkubáljuk. Az MPA-n a Psudomonas nemhez tartozó baktériumok színtelen vagy szürkésfehér, áttetsző, kerek konvex kolóniákat képeznek, amelyek egyenletes peremekkel rendelkeznek. A 3.-4. Napon megfigyelhető a sárga-zöld vagy narancssárga-sárga fluoreszkáló pigment képződése. Ps.cyprinisepticum és néhány Ps.fluorescens törzs nyálkahártyát képezhet.
2.5. At érzékelésére agar Növekedés tipikus gyanús kolónia átoltjuk Kligler közepes és 18 óra után a tenyészeteket, amelyek ezt a lúgos reakcióközegben (oszlop, és a hornyolt felületeket színezett magenta színű) vetjük alá a további vizsgálat. Ahhoz, hogy különbséget kórokozók a Pseudomonas nemzetségbe tartozik baktériumok nemzetségek hozzájuk hasonló (táblázat. 1) meghatározza oxidáz aktivitást, képes lebontani glükóz Hugh-Leyfsona közegben (oxidációs-fermentációs vizsgálat).
2.5.1. Annak meghatározására, oxidáz aktivitást egy kis része a kúpos felület tenyésztési reagenseket alkalmazva csepp 1% -os vizes oldatban dimetilparafenilendiamina (hidroklorid vagy oxalátot), és 1% -os oldat (a-naftol és 60 ° lepárolt alkohol. Oksidazopolozhitelnye telepeket megfestjük kék 30-60 másodperc. Oksidazootritsatelnye kultúra nem vizsgáljuk tovább.
2.5.2. Az oxidációs fermentációs teszt során (O / F) a tenyészetet 6 ml Hugh-Leifson táptalajt tartalmazó csőben fenékkel beoltjuk. A növényeket 96 órán át 25-26 ° C-on inkubáljuk. A patogének pszeudomonoszai aerob körülmények között oxidálják a glükózt, így a felső rétegben a tápközeg szalma-sárga lesz, az alsó réteg változatlan marad.
2.5.3. Abban az esetben megkérdőjelezhető eredményeit oxidációs-fermentációs vizsgálatokat végeztünk kiegészítő kutatásokat dekarboxiláz aktivitás izolált kultúrák. Vizsgált kultúrát oltottunk kémcsövekbe a közeggel négy vagy Møller-Birger Krushinskoi, amelyek közül három hozzáadott egyesével aminosavak (arginin, lizin, ornitin), a negyedik - kontroll. Ezután laminálják a a táptalaj felületén steril folyékony paraffinnal (mintegy I ml). A növényeket 4 napig 25-26 ° C-on inkubáljuk. Kórokozók pseudomonosis degidrolazoy-arginin, de nem a lizin és ornitin dekarboxilezése, így a szín a közepes Birger Krushinskii in vitro arginin kék lesz. Színes Meller közeg változik lila, kék-szürke legyengül a reakció során.
2.5.4. A növények fajhoz való kötődésének meghatározásához a Gissa-ban a mannitot, szacharózt, maltózt, laktózt (lásd a 2. táblázatot) végzik.
2.5.5. A kultúra mobilitását a Hugh-Leifson közeg vetőmagvize határozza meg. A mozgatható növények lazán növekszenek, ami a teljes környezet zavarosságát okozza, immobile - szigorúan injekcióval (Ps.fluorescenc Capsulata).
3. Biológiai kutatás
3.1. A biológiai tesztet 6-10 klinikailag egészséges halra helyezzük, amely azonos fajból és kortól származik, amelyből izoláltuk a gazdaságból behozott és a betegségtől mentes kórokozó kultúráját.
3.2. Kétnapos húsleves tenyészetet adunk be 4-6 halat intramuszkulárisan és 4-6 halat intraperitoneálisan 0,3 ml adagban. 150 grammnál nagyobb súlyú halakat injektálunk 0,5 ml tenyészettel. Az akváriumban levő víz hőmérséklete, ahol a fertőzött hal van, 15-25 ° C-on belül kell lennie.
3.3. Ezzel egyidejűleg 6-10 halat állítunk fel, amely ugyanolyan dózisban steril MPB-t ad. A megfigyelési időszak 16 nap.
3.4. A betegség manifesztációja vagy a hal halála esetén bakteriológiai vizsgálatot végeznek.
3.5. A biológiai mintát akkor tekintik pozitívnak, ha minden fertőzött hal betegessé válik, és legalább 50% -uk elpusztul a pszeudomonizmussal, és a vérből és a belső szervekből újra izolálja az eredeti kultúrát.
3.6. A pszeudomonoszis laboratóriumi diagnózisa akkor tekinthető megalapozottnak, ha a tenyészet izolálására a betegség kórokozóira jellemző és patogén kísérleti halakra jellemző tulajdonságokkal rendelkeznek.
Ezen iránymutatások jóváhagyásával a Szövetségi Állami Agráripari Bizottság GUV-je által 1986. június 12-én jóváhagyott "Halak pszeudomonoszásának laboratóriumi diagnosztikájára vonatkozó módszertani iránymutatások" érvénytelenek.
1. melléklet
1. táblázat A Pseudomonas nemzetség baktériumok differenciálása a hasonló nemű baktériumokból