A leukociták citokémiai vizsgálata
Vérvizsgálat
A leukociták citokémiai vizsgálata
A citokémiai vizsgálatok fontos szerepet töltenek be a hemoblastózisok differenciáldiagnózisában. A nagy elméleti jelentőség mellett a leukémia különböző formáinak tisztázása is tagadhatatlan. Az akut leukémia differenciáldiagnózisának és terápiájának hatékony módszerei, különösen a gyermekek akut limfoblasztikus leukémiája csak a klinikai gyakorlatba való bevezetés után vált lehetővé.
A citokémiai vizsgálatokat vérkondicitákban, leuko-koncentrátumokban, csontvelőben végzik. Ezek alapja a különféle kémiai színreakciók alkalmazása különböző anyagok sejtekben való meghatározására. Egy citokémiai vizsgálatban az eredmények szemi-kvantitatív értékelését alkalmazzák, a G. Astaldi-elv (1957) alapján, egy bizonyos fokú intenzitású szín meghatározásával. Attól függően, hogy a vizsgált elemek négy csoportra oszthatók: negatív (-), gyengén pozitív (+), pozitív (++) és élesen pozitív (+++).
Ahhoz, hogy mennyiségileg az eredmények megszámoltuk 100 sejtek bizonyos típusú, és megkülönböztetni őket elve szerint, majd a sejtek száma azonos színintenzitás szorozni a megfelelő számú előnye ennek a csoportnak, ezek összege termékek egyenértékű egység (U). Az enzimek aktivitását hagyományos egységekben vagy egy átlagos citokémiai együttható (SCC) formájában fejezzük ki. Az átlagos citokémiai együtthatót az Astaldi és a Verga módosításában a Keplow képlet szerint számítják ki:
ahol a számok (1, 2, 3, 4) jelzik a szín intenzitását; betűk (a, b, c, d) - a meghatározott intenzitású számozott sejtek száma (citokémiai reakció).
A félig kvantitatív értékelés módszere indikatív, de lehetővé teszi a vizsgált anyagok eloszlását különböző sejtelemekben vagy ugyanazon sejtekben bizonyos kóros körülmények között. Meg kell azonban jegyezni, hogy a citokémiai módszer csak más vizsgálati módszerek kiegészítéseként használható - morfológiai, immunológiai, citogenetikai.
A glikogén miatt elsősorban a sejtek energiaigénye áll rendelkezésre. Különösen a glikogenolízis reakciói miatt kialakul a fagocitózis működéséhez szükséges energia. Helyi glikogén a sejtek citoplazmájában. A glikogén citokémiai kimutatására a leggyakrabban használt PAS-reakció, vagy SHIK-reakció (a reagens neve - Schiff-jódsav neve).
PAS-pozitív reakciót is termel olyan anyagokat, mint például a glükózamino, mukopoliszacharidok, glikoproteinek, mukoprotei HN és munkatársai. A glikogén lehet könnyen más anyagok vagy mintákat a nyállal α-amiláz.
Minta a nyálban. A gyógyszert frissen sózott nyálba helyezzük termosztátban 37 ° C-on 30 percig, majd a fenti eljárással festjük. Amikor a hatóanyagot inkubáljuk, a nyálban lévő a-amiláz lehasítja a glikogént, és a Schiff-reagenssel reagáltatva a rózsaszín szín nem alakul ki glikogén formájában.
Az a-amiláz mintája. A gyógyszert az a-amiláz oldatába helyezzük (1 ml szűrt amilázt feloldunk 40 ml 0,85% -os nátrium-klorid-oldatban) 30 percen keresztül termosztátban 37 ° C-on.
Normál értékek. A kenetet a perifériás vér és a csontvelő levő glikogén citoplazmájában neutrofilek különböző érettségi fokú, de előnyösen az érettebb (a bőséges és diffúz szemcséjűig). A megakaryocyták és a vérlemezkék citoplazmájában a glikogént egyetlen nagy szemcse határozza meg. A vérben az egészséges emberek mennyiségének intenzív színű neutrofilek (+++) tömegaránya 2-12% -a az összes a neutrofilek, az átlagos színintenzitása (++) - belül 72-90%, enyhén színezett (+) - 4 és 18 %. CBFV glikogén neutrofilek egészséges emberek 1,71-2,04 (Kost EA 1975), és aszerint, hogy a VB Letsko (1970) - 2,52. Idős személyek jelentős csökkenést mutatott a glikogén LZC 1,98 (Németország VA Sergeev, TM 1972).
Az egészséges emberek limfocitáiban a glikogént kis számú granulátum formájában tartalmazzák a sejtek 10-12% -ában. Megakariocitákban a glikogént granulátum formájában (egytől 30-50-ig) észlelik, amely hasonlít a vérlemezkék csoportjába. A glikogén-pozitív megakariocita sejtek száma a megakariocita sejtek 60% -át teszi ki.
Klinikai jelentőség. Megnövelt glikogenpolozhitelnyh limfotsitov4 (70-80%) jellemző a limfoproliferatív betegségek, különösen a krónikus limfocitás leukémia (glikogén definiált kibbles). A növekedés a glikogéntartalmat neutrofil figyelhető meg a különböző gyulladásos folyamatok, a cukorbetegség, policitémia vera. Csökkent megfigyelhető agranulocitózis, sugárbetegség, a krónikus mielogén leukémia - körülbelül 2-szer, mint a norma, különösen a betegség progresszióját (összesen glikogén által meghatározott biokémiai módszerekkel, akár növekedhetnek leukocytosis). Amikor trombocitopéniás purpura és tüneti thrombocytopenia száma glikogenpolozhitelnyh formák megakariociták jelentősen csökken (lépeltávolítás után visszaáll a normál értékre).
Akut myeloblastikus leukémiában szenvedő leukémiás sejtekben a glikogén egyáltalán nincs jelen, vagy diffúz módon vagy finom szemcsézettség formájában oszlik el; akut limfoblasztikus leukémiában - a mag körül elhelyezkedő citoplazmában található nagy szemcsék formájában; Akut monoblaszt leukémiában a robbanássejtek kis mennyiségű diffúz színű glikogént tartalmaznak; akut erythromyelosis esetén a granulátumok glikogénje megtalálható az erythroblasztokban.
A lipidek lokalizálódnak a sejtek citoplazmájában, elsősorban a szerves sejtek membránjaiban és elsősorban neutrofil granulocitákban találhatók. Fontos szerepet játszanak a membránok áteresztőképességében. A csontvelő és a perifériás vér sejtjei egyszerű lipideket tartalmaznak semleges zsírok, szabad zsírsavak formájában, valamint komplex lipidek - foszfolipidek formájában. A citokémiai vizsgálat a zsírokban oldódó anyagok (Szudán III, Szudán IV, fekete Szudán stb.) Használatán alapul. A semleges zsír azonosítására Szudán III-ot használnak, a zsír narancssárgára színezik. A lipoidokat jobban azonosítják a szudán fekete (fekete festés). A hematológiai vizsgálatokban a kenetek színezését gyakrabban használják a szudáni III.
Lásd a festési technikákat:
Klinikai jelentőség. A lipidek SCC-jének növekedését figyelték meg az időseknél. A neutrofilek lipidtartalmának növekedése az akut myeloblast és monoblast leukémiákban fordul elő krónikus myelogenous leukémia progressziójával. Nem differenciált akut leukémia esetén a robbanássejtek kis mennyiségben tartalmaznak lipideket (2-3%). A terápiás éhezés során megfigyelték a lipidek SCC-jének csökkentését. A neutrofil sejtek lipidtartalmának csökkenése reumás, gyulladásos folyamatokban mutatkozik meg. Akut limfoblasztikus leukémiában a blaszt sejtekben lévő lipideket nem detektálják.
Peroxidáz (myeloperoxidase)
Emberekben, a peroxidáz leukocitákban, vérlemezkék, a tejben, valamint a szövetekben, ahol anyagcsere történik eikozán-ide. A protetikus csoport protogem. A által katalizált reakció peroxidáz, hidrogén-peroxid csökken a ható vegyületek, mint elektrondonor, például aszkorbát, kinonok vagy citokróm C által katalizált reakció peroxidáz komplex és összesen a következőképpen néz ki:
A peroxidáz elsősorban a granulociták citoplazma specifikus granularitásában lokalizálódik, a mieloid természetű sejtek markere. Hiányzik a limfoid sejtekben. Tekintettel a neutrofilek specificitására, az érés korai fázisaiból kiindulva az enzimet myeloperoxidáznak nevezték. A peroxidáz aktivitása nagy ingadozásnak van kitéve.
Lásd a festési technikákat:
Normál értékek. Az egészséges emberek vérében a peroxidáz aktivitását elsősorban a granulocyta citoplazmában, kisebb mértékben és impermanensen - monocitákon detektálják. Az enzim a promyelocyták és érettebb myeloblastok szakaszaiban jelenik meg a sejtekben. A limfoblasztok nem tartalmaznak peroxidázt. A neutrofilek 3-16% -a pozitívan festett (+++), 60-90% pozitív (++), mások - gyengén pozitív (+) (Cost EA 1975). A peroxidáz SCC az egészséges emberek neutrofiljeiben 2,5 (Lecky VB 1970). Az eozinofileket a peroxidázra gyakorolt hirtelen pozitív reakció jellemzi.
Klinikai jelentőség. Blaszt sejtekben az enzim aktivitása magas az akut myeloblast leukémiában. Krónikus mielogén leukémia esetén, különösen a terminális szakaszban, az SCC 1,6-ra csökken; az enzim gyenge aktivitását észleljük az akut monoblaszt leukémiában és hiányzik az akut lymphoblast leukémiában. A myeloperoxidáz aktivitását a mieloid sorozat markereinek meghatározására használják az akut myeloblast és lymphoblastic leukémia differenciál diagnózisára. Az enzimaktivitás csökkenését miokardiális infarktus, reuma, tuberkulózis és tumorok figyelték meg.
Lúgos foszfatáz
Az alkalikus foszfatáz aktivitást észlel az első alkalommal lépésben metamyelocytes, növekszik, ahogy a szegmentált neutrofil differenciálódás fel, majd a kamrát csökken újra. Az enzimaktivitást specifikus citoplazma granulátumokban határozzuk meg. Alkalikus foszfatáz utal, hogy a csoport a hidrolitikus enzimek hasítják különböző foszforsavak észterek lúgos közegben (pH-optimum 9,6), végez hidrolízis odnozamegtsennyh ortofoszfát észterek. Az enzimaktivitás legáltalánosabb meghatározása az azokapcsolási módszerrel.
Lásd a festési technikákat:
Klinikai jelentőség. Az enzimaktivitás növelése a citoplazmában a neutrofilek megfigyelt polycythaemia vera, krónikus mielofibrózis, aplasztikus anémiák. Megnövekedett aktivitása alkalikus foszfatáz a citoplazmában neutrofilek akut leukémia nelimfoblastnyh - kedvező tulajdonság, mert az ilyen betegek nagyobb valószínűséggel elengedése. Az enzim aktivitásának növekedését az élet első felében, 150-159 egységben észlelték. Az enzim aktivitás növekszik a terhesség ideje alatt számos gyulladásos folyamatok, krónikus májbetegségek, fertőzések, rosszindulatú daganatok, diabéteszes ketoacidózis, figyelembe orális fogamzásgátlók, Down-szindróma, miokardiális infarktus, és mások. A drasztikus aktivitása alkalikus foszfatáz (teljes hiányának) figyelhető meg a krónikus mieloid leukémia. amely alapul szolgálhat a fontos kiegészítője differenciáldiagnózist krónikus myeloid leukémiát és a krónikus mielofibrózis és reakciók leukemoid m heloid típusú. Csökkentése az enzimaktivitás figyelhető meg vírusos betegségek, beleértve a fertőző májgyulladás, sugárbetegség, sarlósejtes vérszegénység, kötőszöveti betegségek.
Savas foszfatáz
A savas foszfatáz aktivitása főként neutrofilekben és vér lymphocytákban fordul elő (legfeljebb neutrofil myelocytákban); a lokalizáció a sejtcytoplazma lizoszómákhoz kapcsolódik. A savas foszfatáz egy hidrolitikus enzim (optimális hatás pH = 5,2). A citokémiai vizsgálatokhoz az azo-kapcsolási módszereket általában használják. A naftil-foszfátokat savas foszfatáz hatására hasítják, hogy szabad naftolt hozzanak létre, amely a diazóniumsóval reagál. Ennek következtében az azo-festék piros színű csapadék válik zöldfelé, az enzim detektált aktivitásának helyén.
Lásd a festési technikákat:
Normál értékek. A vérsejtekben az érett granulociták 12% -ában és a limfocitákban az enzimaktivitást detektálják. Az egészséges emberek perifériás vérének neutrofiljeiben az enzim aktivitása 11-72 egységen belül ingadozik. azaz az SCC értéke 0,386; a limfocitákban - 25,0-28,8 egység. azaz az SCC 0,286. Gyermekeknél a savas foszfatáz aktivitása neutrofilekben magasabb, mint a felnőtteknél.
Klinikai jelentőség. A savanyú foszfatáz aktivitás fokozódik akut leukémia - myeloid monoblastic és, különösen az akut promielocitás leukémia (diffúz formában), akut limfoblasztos leukémia (szemcsés formában). Az enzimaktivitás növelése figyelhető meg neutrofil gyulladásos folyamatok során (akut tüdőgyulladás), a tuberkulózis, a miokardiális infarktus, az akut sebészeti fertőzések, rosszindulatú daganatok. A limfocitákban az enzimaktivitás növekedését krónikus mandulagyulladásban, különböző allergiás betegségekben figyelték meg, immunizálás után.
Nemspecifikus észterázok
A nem specifikus észterázok alacsony specifitású enzimek (hidrolázok) csoportja, rövid szénláncú karbonsavak hasítási észterei. Lokalizálódik a sejtek citoplazmájába, elsősorban a lizosokba. Ezen enzimek aktivitását többé-kevésbé kimutatták minden típusú leukocitában (maximálisan éretlen granulocitákban és monocitákban). A legnagyobb aktivitást a vér monocitáin találták. Különféle szubsztrátokat (a-naftil-acetát, naftol-AS-acetát, naftol-AS-D-klór-acetát stb.) Alkalmazunk az enzimaktivitás meghatározására. A nem specifikus észterázok hatására szabad szubsztrátból szabad naftolt szabadítanak fel, amely színezéket ad a diazóniumsókkal.
dehidrogenáz
A dehidrogenázok olyan enzimek, amelyek katalizálja az oxidációs redukciós reakciókat, amely két szubsztrátot tartalmaz. Számos közülük közvetlenül részt vesz a biológiai oxidáció folyamatában, elvégezve a protonok átvitelét a szubsztrátumtól, amely oxidáción keresztül egy másik szubsztrátumra kerül. A redukciót katalizáló dehidrogenázok mind a hidrogén-donor, mind az akceptor specifikusak. A dehidrogenázok sokféle sejtben és szövetben megtalálhatók. Ezek lokalizáltak a citoplazmában és a mitokondriumok, ki lehet mutatni egy olyan cellára cytochemically expozíciós megfelelő szubsztráttal, amelyre az ACT-dehidrogenáz jelenlétében tetrazólium vegyületek, amelyek, amely protonokat fogad oldhatatlan színes vegyületek.
Normál értékek. Az egészséges emberek, a LDH és α-GPDH kimutatható granulátum formájában a kék neutrofilek, limfociták, vérlemezkék és a perifériás vér mieloblasztokra, granulociták, megakariociták, eritro- és normoblasts csontvelő.
A limfociták SDG-jének SDC értéke 1,10 ± 0,05; α-GDDH-0,80 ± 0,08. Gyermekeknél az LDH aktivitását a limfociták 46% -ában detektálják. Felnőtteknél, csontvelő punctata 88% a differenciálatlan sejtek enzimaktivitás (+), valamennyi sejtmaggal eritroid sejtek és granulociták aktív (+) vagy (++).
Klinikai jelentőség. Az SDG és a-GDDH aktivitásának növekedése granulocitákban malignus daganatokban szenvedő betegeknél volt megfigyelhető. A lymphocytákban kimutatták a csökkent aktivitást a krónikus lymphocytás leukémiában, a granulocytákban - a krónikus myelogenous leukémia kialakulásában.