Tápanyag-adathordozók és a fitopatogén kórokozók megőrzése
A gombák tenyészeteinek - fakultatív szaprofitáknak és fakultatív parazitáknak a megszerzéséhez, életképességük fenntartásához további vizsgálatok céljából különféle tápközegeket használnak. Ezek a környezetek szilárd és folyékony halmazállapotúak, ismert és ismeretlen kémiai összetétellel, természetes és mesterségesen előállítva. A tápanyag szubsztrátum e vagy az adott típusának megválasztása a gombás organizmus szükségleteitől és az elvégzendő kutatás céljától függ. Például a növények immunitásának tanulmányozása során a gazdasejt ellenállóképességének a kórokozó anyag mérgező anyagaira gyakorolt rezisztenciájának és a kórokozó formák növekedésének hatására gyakorolt hatásának vizsgálata során bőséges sporulációra van szükség.
A kísérleti munkák során specifikus médiát választanak ki. A gomba egyidejűleg a Petri-csészék közepén különböző táptalajokra vetődik (három példányban), és az optimális hőmérsékleten tartja fenn fejlődését. A megfigyelést 12-15 napra végezzük a gomba növekedése és fejlődése (növekedési energia, a sporuláció eredete és jellege, a micélium sűrűsége stb.), Ennek következtében válasszuk ki a legmegfelelőbb közeget. Normál szintetikus táptalaj használatakor összetételük változtatható a különböző kémiai komponensek hozzáadásával és megszüntetésével.
Gyakran szükség van arra, hogy olyan környezeteket találjon, amelyeken a gomba nőtt és fejlődött jobban, mint a természetben. Ezt úgy lehet elérni annak a ténynek köszönhető, hogy a sterilizálás után az egymással versengő mikroorganizmusok elpusztítása és az ezt alkotó anyagok mennek mélyreható biokémiai változásokat, amelyek hozzájárulnak az asszimiláció egyes gombák. Általában az agar táptalaj a csalikat vagy az infúziókat (kivonatokat) a fogadó növényből vagy az édes lóhere szárából. Tehát 1 g víz 100 g friss vagy 50 g szárított szervet tartalmaz, amely a gombaültetvényeket táplálja. A masszát zúzott, elegyét egy óra csökkentette a folyadék kiindulási térfogata, szűrjük, majd hozzáadunk 2-2,5% agar-agart feloldunk és sterilizáljuk (MK Khokhryakov, 1969).
Mikikevics olyan természetes tápanyagokat használt fel, amelyeket egy ilyen recept alapján készítettek, amikor a fás növényeken parazitálják a gombákat. Finomra vágott szálak meghatározott gerendák (200 g) öntjük, vízzel (1 liter) és idősebb 12 órán át 80 ° C-on, majd szűrjük, és infúziós agart adunk hozzá (2,5%). A táptalajt ezután két órán át sterilizáltuk a Koch berendezésben folyó gőzzel. A speciális vizsgálatokat állítottunk elő különböző fajta kivonatok, amelyek egymással egy vonalban vannak a koncentrációt (1% száraz alap) sorozatos hígítással. Lehetséges az ilyen természetes média nagyobb koncentrációban való felhasználása.
A kórokozó gombák bizonyos szisztematikus csoportjainál sok kutató kiválasztott természetes tápanyag-szubsztrátumokat és azonosította az ismert kémiai összetételt. Így azt a tapasztalat alapján állapították meg, hogy a Fusarium nemhez tartozó fajták jól termesztik a főtt rizsmagokat; a Piricularia nemhez tartozó gombák kifejlődnek bőséges sporulációval az agar táptalajon búzaszemcsék vagy gyökér sárgarépa kivágásával. Az egyes fajokra és gombacsoportokra vonatkozó szilárd tápközegek összetételét a 20. táblázatban adjuk meg.
A környezet előkészítése során figyelembe kell venni a következő körülményeket:
- a gombák általában jobbak a szénhidrátokban gazdag tápközegben, de az ilyen médiumokon való növekedés hosszú ideig csökkentheti a sporulációt;
- a legtöbb gombák enyhén savas reakciót (pH 6,0-6,5) és a baktériumot semleges (pH = 7,0) vagy kissé lúgos;
- a szénhidrátok és a fehérjék savas és lúgos oldatokban történő melegítésével megsemmisülnek, ezért mérsékelten sterilizáltak vagy külön adhatók hozzá;
- Az agart a vízmennyiség felében oldjuk 1-2 órán keresztül, és a tápanyagokat a fennmaradó vízben, majd az összetevőket összekeverjük;
- Az agar nem nagyon megszilárdul nagyon savas vagy lúgos közegben;
- a pepton nagyrészt kizárható a gombákra szánt táptalaj összetételéből;
- A főzött vizet előnyben kell részesíteni a desztillált vízzel, mivel az első hasznos nyomelemeket tartalmaz; A Phytophthora nemhez tartozó gombák esetében jobb desztillált vizet használni;
- a növényi anyagot tartalmazó táptalaj esetében előzetesen alacsony (burgonyagar) vagy magas (burgonya-dextróz agar) hőmérsékleten húzódik.
Egyes esetekben (a tanulmány e. Mérgező váladékok kórokozók, enzimek, stb) használnak, folyékony táptalajon. Például, a toxikus hatásai váladék Deuterophomatracheiphila vizsgálták közegben készített, macerációs namelchennyh hajtások a növényi gazdaszervezet (200 g hajtások 100 cm3 víz). A gombák esetében a javasolt tápközeg összetétele a következő: 0,03 g K2S04; 0,01 g NH4N03; 10,0 g dextróz (vagy maltóz); 0,01 g CaCl2; 0,01 g Mg (P04) 2 -4H2O-t és 100 cm3 vizet tartalmaz.
A gombák biológiájára és a növényi ellenállásra vonatkozó különféle vizsgálatok elvégzéséhez szükség van a tiszta kultúrák hosszú távú tárolására. A tárolás után azonban számos kórokozó gombák morfológiai és kulturális jellemzőket válthatnak át, és néha kórokozó tulajdonságokat veszítenek el. Ezért, mielőtt a tenyésztés során hosszú távú tárolás után vett gombákkal végzett kísérleteket elvégeznénk, a patogenitás helyreállítását vezetés útján vissza kell állítani. keresztül a gazdanövényen keresztül.
A tápközeg összetétele a fitopatogén gombák termesztésére
A táptalaj neve
Az összetevők összetétele 1 liter vízre, pl
A gombák tenyészeteinek fenntartása széles körben elterjedt módszer a friss tápközegekre való időszakos újratermelésre. A legtöbb kultúrát évente 2-3 alkalommal átültetik. Az újraenyésztés során elsősorban a spórákat átruházzák, de a gyarmat marginális zónáján a micélium nem spórázó formáiban.
A transzplantációkat két ismétléssel végezzük, és az egyes gombatenyészetekből 3 példányt hagyunk az előző periódus tárolására, számolására és újratelepítésére. Az egyik új kereszteződés csak a jövőbeni újbóli belépéshez, a másik pedig a kísérleti munkák során történő lemorzsolódáshoz használható.
A gombák hosszú távú tárolása érdekében jobb, ha keményítőszegény és cellulóz-táptalajt használnak, amelyek gyengék a cukrokban. Számos semisaprofytikus gomba jól megőrzött a steril természeti anyagon (pl. A Cytospora nemzetség gombája a fogadó növény ágaiban); a legmegfelelőbb hőmérséklet 4-5 ° C. A mély hűtés (kb. -20 ° C) kielégítően megőrzi a gombák életképességét egy nagyon hosszú ideig.
A gombatenyészetek ásványi olajként történő megőrzése, liofilizálás (csökkentett nyomáson történő fagyasztva szárítás) és folyékony nitrogén mellett, ampullákban. Ha a gombák képesek ellenállni a teljes kezelésnek, akkor legalább 10 évig életképesek lesznek. Azonban ezeknek a módszereknek a használata nehézkes és drága eszközöket igényel.
Normális körülmények között a gombák összegyűjtését legjobb kísérleti csövekben kell tartani egy ferde táptalajon, gyapotrúddal lezárva. Az atkák (Tyroglyphus és Tarsonemus genera) által okozott károkat azonban óvatosnak kell lenni, különösen a déli régiókban és nyáron a mérsékelt éghajlaton. A kémcsőbe, a lombikokba és a Petri-csészékbe belekerülve betakolnak, megfertőzik őket baktériumokkal és szennyezik.
Számos módja van ezeknek az atkáknak a kezelésére. De először meg kell figyelni az általános higiéniát, intézkedéseket kell hozni annak biztosítására, hogy a laboratórium ne repüljen rovarokat, legyen óvatos, ha szerves anyaggal és talajjal dolgozik. A felvétel minden új anyagát gondosan ellenőrizni kell. Ha lehetséges, külön helyiségeket kell biztosítani a tiszta és piszkos anyag számára.
A meglehetősen sűrű vattacsatlakozók általában az atkák számára áthatolhatatlanok, és a kultúra levegőellátása nem zavart. Nagyobb garanciát nyújtva a dugókat olyan mérgekkel lehet kezelni, amelyek csupán az atkák számára pusztítóak. Szöveti papír használata is ajánlott. Ebből a célból, miután a elzáródás RIM .vatnoy csövet égetett a láng és bevonva ragacsos meleg zselatin réz-szulfát (réz-szulfát - 20% zselatin - 20% víz - 60%). Ezután rögzítse ezt a bevonatot a cső végére szövetpapírral. Szárítás után a felesleges papír ég. Az ilyen nagyon vékony pórusú papír megakadályozza az atkák behatolását, így biztosítva a levegőt. Ugyanígy lehetőség van arra, eltömődés a lombik, de a gumicső el kell távolítani, és a tissue-papír a felhasználás előtt sterilizáljuk.
Szintén hasznos, ha minden papírt, csészét és kémcsövet szennyezett anyaggal lezár.
Minden kultúrában kell számozni és rögzített speciális kártyákat, amelyek rögzítik az azonosító száma és neve a kultúra, hogy hol és hogyan osztják, a dátum az allokációs, elosztási módszer, a neve a média, alkalmazott átjárók, észrevételeit a növekedés a kórokozó tiszta kultúrában és jelölt jellemzői.