A bakteriológiai kutatási technika alapjai (p.
A felaprított agart előkészítjük a tesztcsöveket 3-4 ml-es olvasztott hús agar agarral, amíg teljesen le nem kerekítettük. A 25-30 ° -os dőlésszöget a kémcsőállványok alá helyezzük.
Petri-csészék agaros elkészítéséhez a lombik nyakát az olvasztott hús-agar agaron égessük fel, és az olvasztott agart steril Petri-csészékbe öntjük. Az agarréteg vastagsága 0,5-0,7 cm.
Amikor a tenyészet folyékony és sűrű tápközegbe kerül, sterilitást kell betartani. A bal kéz-Mitte Mi választjuk ki a csöveket (a növekedés a kultúra és táptalaja), helyezzük őket 2 ujját a bal kezét polugorizontalnom a bomlás és tartsa a hüvelykujját, hogy minden manipulációt végezni irányítása alatt a szem. Tűzje ki a hurokot az égő lángján, mielőtt bevenné a kultúrát. Ezután a jobb kezével három ujjával (mint egy tollal) vegyen egy bakteriológiai hurkot, és a kis ujjával a láng felett vegye ki a dugókat a kémcsövekből.
1. Amikor a kultúrát levágja az agar tesztcsőre a közeggel, tartsa a lejtős felületet felfelé a kézben. Sterilizált és hűtött hurok használatával vegye be a vetőmagot (ebben az esetben a staphylococcus tenyészetet), és finoman illessze be a hurokot a lejtős agar kondenzációs folyadékába. Ezután csúsztatva mozogjon a közeg ferde felületén, a cső egyik faláról a másikra ütközésig alulról felfelé; vetés után süt egy csomót.
2. A tenyészetet agar oszlopban (prick) vetőmagba sűrű közegben (MPA) vetjük le bakterio-logikai hurok alkalmazásával. Ehhez egy kalcinált és hűtött hurkot meg kell érinteni a mikroba tenyészetéhez, és táptalajjal ellátott kémcsőbe kell vezetni. A vetést injektálással végezzük egy közepes oszlopban a kémcső alján.
3 A baktériumok tenyészete folyékony táptalajra történő vetésénél a következőket kell figyelembe venni: ne engedje, hogy a folyékony közeg kifolyjon és nedvesítse meg a dugót a cső félhorizontális helyzetében.
Bakteriológiai vizsgálati módszer
Ez a legfontosabb módszer a fertőző betegségek laboratóriumi diagnosztikájában. A bakteriológiai vizsgálati módszer lényege a beteg patológiás anyagának vetése és a kórokozó tiszta tenyészete izolálása, majd morfológiai meghatározása. kulturális, tinctorial, biokémiai és antigén díjak.
A mikrobiológiai kutatások legfontosabb módszere a tiszta kultúrák elkülönítésének módja, amely lehetővé teszi egyes mikrobiális fajok természetes vagy természetes élőhelyeinek izolálását. Az első, amely a tiszta tenyészet izolálására szolgáló módszert javasol, L. Pasteur volt.
A folyékony tápközegek használatán alapuló Pasteur-módszer tiszta tenyészet izolálását eredményezte, főként olyan anyagból, amely egyfajta mikrobát tartalmazott (például vérszeptikémia stb.). Kevésbé volt hatásos olyan esetekben, amikor az egyes mikroorganizmus-típusok izolálásához szükséges volt. Időközben természetes körülmények között a bakteriológiai kutatás anyaga (köpet, genny, talaj, víz stb.) Gyakran különböző mikroorganizmusok keverékét tartalmazza.
Sikeres szekrécióját bakteriális keverékeire vagy izolált NOE vizsgálat az egyes fajok tette lehetővé az ODR-vershenstvovaniyu eljárás izolálására tiszta tenyészetek Robert Koch (R. Kosht) használva erre a célra egy sor-WIDE tápközeg 1881 évben, amely kezeli forgalmazás során vetés részvény anyagot oly módon, hogy az egyes mikrobiális sejtek egymástól elkülönítve helyezkedjenek el. Megfelelő körülmények között (tápközeg, optimális hőmérséklet) az izolált sejtek sokszorozódása ugyanazon faj utódait, azaz az ilyen típusú mikrobák tiszta kultúráját adja.
Bizonyos idő eltelte után (általában egy nap alatt) a mo perces sűrű táptalaj, ami kiderült, hogy egy izolált-en-képző sejtek megsokszorozódik a lakosság, a mikro-CWA - az úgynevezett kolónia látható szabad GLA zoom. Nem jelentenek a kaotikus felhalmozódása mikro-CWA, amint lehet megítélni, hogy többféle típusú mikro-robov telepek jellegzetes szerkezetét, és ezért meg lehet határozni mintegy flórájának anyagot, és válassza ki azokat a telepeket, amelyekre a további vizsgálat. Peresev ilyen telepeket a megfelelő tápanyagon, és képviseli a tiszta kultúra elosztását.
A tiszta kultúrák elkülönítése és későbbi azonosítása kiemelkedő fontosságú a fertőző betegségek diagnózisában, biztosítva gyors felismerését, ideiglenes kezelését és megelőzését. Nem kevésbé fontos a mikroflóra meghatározása a külső környezet (levegő, víz, talaj stb.) Egészségügyi és higiéniai állapotának tanulmányozásában, valamint a tudományos kutatások elvégzésében.
Jelenleg számos módszer létezik tiszta kultúrák izolálására. Néhányat korlátozottan használnak, mások széles körben használatosak. A legegyetlenebbek a tiszta baktériumtenyészetek (Drigalsky-módszer) izolálására szolgáló alábbi módszerek. Míg más mikroorganizmusok - a spiroketák, a protozoák - speciális izolációs módszereket igényelnek, vagy egyáltalán nem különböztethetők meg a mesterséges táptalajokon (néhány protozoa, rickettsia, vírusok).
A tiszta kultúrák mikrobiális keverékekből történő izolálására szolgáló módszerek általában két fő csoportra oszthatók: a mikrobák mechanikai szétválasztásának elvén alapuló módszerek táplálékközegben és a mikrobák biológiai tulajdonságainak felhasználásával. Az első csoport az egyes sejtek izolálási módjait tartalmazza: 1) a tápközeg mélységében; 2) a közeg felületén és 3) a szem szabályozása alatt. A második csoport a mikrobák ilyen tulajdonságait használja mobilitásukra, hőmérsékletükhöz, oxigénükhöz és patogén tulajdonságaikhoz viszonyítva.
Vetési és újraültetési technikák
A mikrobiológiai gyakorlatban végzett vetés a mikroorganizmusok kimutatására szolgáló bármely vizsgált anyag steril táptalajába való bevezetését jelenti.
Peresev a növekvő mikroorganizmusok steril környezetbe történő átvitele. A növények és a mikrobák a mikrobiológiai gyakorlat egyik leggyakoribb technikája.
A transzplantátumokat úgy állítják elő, hogy idegen mikroorganizmusok ne lépjenek be a tápközegbe a levegőből vagy a környező tárgyak felületéről. Ehhez szigorúan be kell tartani a következő módszereket:
1) a növényeket közvetlenül egy égő égő közelében állítják elő, amelynek lángjai sterilizált hurkok, csipeszek, pamutdugók, csövek élei;
2) a bal kezében vegyen egy csövet az átadandó kultúrával, a másik (steril táptalajjal) a hüvelyk és a mutatóujj között ferde helyzetben tartsa;
3) a hurkot álló helyzetben tartja az égő lángja felett, és fémrészét előmelegítik, majd vízszintesen billentik és sterilizálják a huroktartóval;
4) vegye le a pamut dugókat, és tartsa azokat a gyűrűsujjával és a jobb kezű kis ujjával; Az asztalra vagy bármely tárgyra vonatkozó dugók nem javasoltak;
5) mindkét cső éleit égesse;
6) bevezetett egy hurok egy kémcsőbe tenyészetet átoltjuk gondosan érintése nélkül a falakat a Capture csepp Yid-csont vagy egy kis mennyiségű plakk a szilárd tápközegben, és átvittük, vigyázva, hogy ne érintse meg a falakat a második cső obesplozhennoy táptalajon;
7) a hurok eltávolítása, a kémcsövek élei és a dugók belső végei lőttek. Ha a gyapottámpa kigyullad, akkor a kémcsövet lezárja, és a külső végét kézzel vagy csipeszekkel leállítja;
8) a hurok ismét lánggal éget, a kémcsövön megfelelő felirat szerepel: a kultúra neve és a vetés dátuma.
A folyékony közegben történő vetést pasztőrrel vagy átmérőjű pipettával lehet végezni. Ha égetett csipeszekkel ellátott pasztö pipettát használ, a lezárt véget meg kell szakítani, és az egész pipetta enyhén éget. A tenyészettel ellátott csövet balra helyezzük, és a pipettát a hüvelyk és a középső ujj közé helyezzük jobbra, a felső lyukat a mutatóujjával tartva.
A gyapotrögzítőt a kémcsőből húzza ki, az éleket pedig utoljára égetik. Óvatosan engedje le a pipettát a kémcsőbe és távolítsa el a mutatóujját. Ezután zárja le a pipetta felső lyukat a mutatóujjával, és távolítsa el a kémcsőből. A cork dugó és a cső élei, mielőtt azok bezárulnak, elégetésre kerülnek. A vizsgált anyagot folyékony közegbe helyezzük. Vetés után a pipettákat fertőtlenítő oldatba helyezzük.
Vetés sűrű környezetben. A ferde agaron végzett vetéskor egyenes vagy cikcakk löketet kell alkalmazni. Ehhez a hurok a beoltott anyaggal be kell vezetni a csőbe, amíg a kondenzvíz fel nem gyűlik az alján, és a löketet óvatosan alkalmazzák anélkül, hogy fellazítják az agart. A folyamatos vetést úgy kapjuk meg, hogy az inokulumot a ferde agar teljes felületére terítjük.
Petri-csészében lévő sűrű táptalajon a terményt a következő módon állítjuk elő. A kémcsövek tápközegét forrásban lévő vízfürdőben megolvasztjuk, 48-50 ° C-ra hűtjük, és egy steril edénybe öntjük 3-5 mm magasságú steril edénybe. A fagyasztott közeget 20-30 percig zárt csészékben inkubátorban szárítjuk. A nyitott csészéket fejjel lefelé helyezzük a termo híd polcaira, steril papírral borítva. A kupakok közelében fedjük le a fedőt. Ha a tápközeg felszínéről és a csésze belső felületéről szárad, a kondenzvíz elpárolog. A vetést hurok hajtja végre párhuzamos lökések vagy üvegspatula formájában.
A mikrobák típusának és az anaerobok termesztésének meghatározásakor egy agar vagy zselatinban levő vetőmagot állítunk elő. Ehhez a csövet fejjel lefelé fordítják, és egy hosszú, egyenes tűvel ellátott tű tűzi át a középső oszlopot felülről lefelé és alulról. Ezután a tűt óvatosan eltávolítjuk, és a csövet lezárjuk egy égő pamut dugóval. Ha különleges óvintézkedésekre van szükség a fertőzéssel szemben, a növényeket egy különleges kabinetbe ültetik tiszta kultúrák átadásához. A vetőmagcsöveket és a Petri-edényeket egy termosztátba helyezzük a termesztéshez.
A tápközegben vagy a felszínen belül található mikroorganizmusok és spórák nem mozoghatnak, hanem olyan helyen maradnak, ahol a megszilárdulás idején voltak. Minden sejt vagy spóra kezd szaporodni, és 2-3 nap alatt kolóniát alkot - hatalmas számú azonos fajtájú sejt. Ha a telepet egy sejtből alakították ki, az a mikroorganizmus tiszta kultúrája lenne, amelyből nőtt.
A felnõtt telepeket elõször szabad szemmel nézik, majd nagyítóval vagy mikroszkóppal. Meg kell jegyezni, hogy a telepek megjelenése, színe, szerkezete stb.
Bakteriális telepek vizsgálata
A Petri-csészében agaron termesztett telepet szabad szemmel vizsgáljuk az átvilágított fényben. Megemlítik a növekedés általános jellegét és a telepek számát (kicsi, sok, kiszámíthatatlan összeg stb.), Miközben kiemelik a különálló telepeket vagy ceruzákat (a csésze aljától) egymástól különböző telepeket.
Vegye figyelembe a kolónia méretét (nagy, kicsi, hegyes), szemmérő mikrométerrel mérve és milliméterre történő átszámításra: szaggatott kolóniák - 1 mm-nél kisebb átmérőjű, egyszerű szemmel látható; kicsi - 1-2 mm, közepes - 2-4 mm, nagy - 4-6 mm vagy nagyobb átmérőjű.
A kolóniának szabályos kerek alakja lehet; nem helyes - amóba, rozetta, rizóma vagy rizóma. A telepek jelentősen emelkedhetnek a környezet felett - domború vagy lapos, lapos konvex; kupola alakú, emelt középen vagy benyomással a közepén. Jelölje meg a felület természetét: matt vagy fényes, sima vagy durva.
A telepek lehetnek éles szélekkel; hullámos (nem mély sekély mélyedésekkel), lobata - mélyen levágott, kerek fogású kis sekély fogékkal; erózió, szabálytalan éles fogakkal, vékony, gyakran ívelt résekkel; "fürtök" formájában.
A szerkezet a vizsgált telepek nagyító alatt vagy mikroszkóp gyenge növekedés száraz rendszer egy szűkített nyílással vagy leeresztett több kondenzátor, a csésze helyiségek schayut az asztalon fejjel lefelé, és mozgatva, mark telepek különböző szerkezetek.
A kolónia színe nagyon változatos lehet. Gyakran előfordulnak teljesen színtelen, néha fehér, tejszerű-felhős, kékes, sárga, arany, aranysárga, narancssárga, citromsárga, lila, vörös és fekete. Néha kis kolóniák alakulnak ki a gyarmati kolóniában, gömbölyű vagy szabálytalan formájú (lányos kolóniák). Ezek különböznek a fő kolóniától, és különleges fénytörési képességgel rendelkeznek. A lánytelepek kialakulásának mechanizmusa nem világos, azonban megjegyezzük, hogy ahogy növekednek, a szülői kolóniát lizáltuk.
A kolónia konzisztenciáját úgy határozzák meg, hogy egy hurokkal megérintik.
A telepek szerkezete és formája, valamint egyéb jellemzői változhatnak. Jól tanulmányozta az S- és R-formákat. S alakú, sima, domború, egyenletes élű, fényes felület. A durva R-kolóniák szabálytalan alakúak, fogazott élek és durva felületek.
Az aerob baktériumok tiszta tenyészetének izolálása
A baktériumok tiszta tenyészete az egyetlen sejtbõl származó mikrobák típusának látható növekedése.
A tiszta kultúra elszigetelése a bakteriológiai munka alapja, hiszen a gyakorlati tevékenység során a bakteriológusnak mikrobák keverékét (gumi, ürülék stb.) Tartalmazó anyaggal kell kezelnie. A faj azonosítása csak akkor lehetséges, ha a baktériumokat tiszta, kódolt formában kapják.
A tiszta kultúra izolálása a bakteriológiai kutatások - a fertőző betegségek laboratóriumi diagnosztikájának legfontosabb módszere.
A cél az, hogy elkülönítsük a kultúrát és azonosítsuk azt, ami lehetővé teszi a fertőző betegség pontos diagnosztizálását.
A tiszta kultúra elkülönítésének fő feladata az egyéni telepek termelése, vagyis egy faj mikrobák felhalmozódása egy sejt szaporodásának eredményeképpen. A legegyszerűbb módszer a szétválasztása baktériumok szekvenciális eldörzsölve az anyag üveg spatulával vagy pipetta bakteriális felszíni sima agaron petri csészében.
A hallgató önálló munkája
gyakorlati leckében
A cselekvések sorrendje (szakaszok)