DNS-vakcinák (polinukleotid vakcina)
Újabb eredmények a géntechnológia és a biotechnológia vezetett a gyors fejlődése teljesen új irányt vakcinológia - a DNS-vakcinák.
DNS-alapú vakcina egy bakteriális plazmid (autonóm, cirkuláris DNS-4-6 ezer. Bázispár), amelyek hatékonyan replikálódik E. coli sejteket a. A plazmidot génsebészeti (restrikciós enzimek segítségével, ligáz, és a t. D.) behelyezett „értelemben” gén immunogén fehérjét kódoló a vírus, amely megvédi a DNS-vakcina. A gyakorlatban, mint egy alkalmas kiindulási plazmidot egy módosított plazmid, amely a eukarióta promotert (amely a magas szintű génexpresszió), citomegalovírus vagy majom vírus 40, vagy a Rous-szarkóma-vírus, és a transzkripciós terminációs szignálok és poliadenilezési, amely lehetővé teszi, hogy készítsen az immunogén vírus-fehérje állati sejtekben. Továbbá, a plazmid egy olyan gént egy antibiotikumra való rezisztencia (például ampicillin) szükséges a kiválasztásra vonatkozó klónozási és növekszik.
Az így kapott rekombináns plazmidot növesztjük (párhuzamos) a szükséges mennyiségben a bakteriális sejtekben E. coli jelenlétében ampicillin és után megfelelő tisztítási használt plazmid állatok immunizálására. Jellemzően, fiziológiás sóoldatot, ahol a szuszpendált állapotban vannak kapott plazmidot (ez eltávolítja a problémát a gyógyszer reaktogenitást).
Az eredmények a laboratóriumi állatokon kimutatták, hogy az összeget a rekombináns plazmidot, szükséges, hogy a vakcinázás által intramuszkuláris beadás között változhat 0,001-10 mg per 1 kg élősúly.
A plazmid DNS-t által abszorbeált állati sejtek egy kis mennyiségű (0,01-1,0%), és nagy része gyorsan degradálódik.
Behatol a sejt DNS-e, hogy ez kiszállításra a sejtmagba, és átíródik (sejt DNS-függő PHK-polimeráz-II) alkotnak mRNS, amely a sejtek citoplazmájában riboszómák biztosítja a szintézisét a teljes immunogén fehérje szer, amely képződését eredményezi a humorális és celluláris immunválasz, és következésképpen, hogy megalakult a stressz mentesség. A plazmid DNS-t működnek sejtek 3-6 hónap.
DNS-vakcinák beadhatók intradermálisan, intramuszkulárisan, szubkután, intravénásán, intranazálisan, orálisan. A legígéretesebb a intradermális és intramuszkuláris módszerek. Figyelemre méltó eredményeket egy úgynevezett ballisztikus bevitel módszer (gén-bombázás), amikor az arany részecskék 1-2 mikron átmérőjű bevont plazmid DNS, egy speciális eszközt juttatnak bőrsejteket. Ahhoz, hogy ugyanazt a hatást szükséges DNS 100-5000-szer kisebb, mint a intramuszkuláris beadás módjától.
A mechanizmus az immunválasz egy DNS-vakcina még nem teljesen világos. Ugyanakkor a rendelkezésre álló adatok arra utalnak, hogy ez a következő. A szintetizált fehérjét hasítunk a sejtekben a plazmában proteaszómák rövid peptidek (8-16 aminosav) reprezentáló egyedi epitópok vagy antigén determinánsok. A peptideket hordozó fehérjék szállítják az endoplazmatikus retikulumba. Ott kötődnek a fehérjéhez molekulák fő hisztokompatibilitási komplex I (MHC I) - membrán glikoproteinek és szállítják a sejtfelszíni, amelyeket amelyeket a citotoxikus T-limfociták. Legutóbbi aktivált, szaporodnak, és a forma egy medence citotoxikus T-limfociták, amelyek képesek a pusztulás a célsejtek, azaz. E. a vírusokkal fertőzött sejtek.
A szintetikus immunogén fehérje a sejtek szállítják ki a sejt az extracelluláris térbe. Ez kötődik antigénprezentáló sejtek (makrofágok) hatol endocitózissal hasadnak rövid fragmensek (10-20 aminosav) fehérjét, amelyek kombinálják molekulák a II osztályú MHC, és szállítják a sejt felületén, amelyekben ezt elismerik a vonatkozó T-helper sejt-klónok és a B sejtekben, a vezető B-sejtek aktiválását, és differenciálódásukhoz plazma sejtek antitesteket kiválasztó. A citotoxikus T-limfociták és a helper T-sejtek által stimulált citokinek termelése - mediátorok a sejt-sejt kölcsönhatások.
Így a plazmid DNS-t a beillesztett gén indukál egy immunogén proteint a vírus állatokban teljes humorális és celluláris immunválasz.
Az immunogenitás fokozása céljából a DNS-vakcinákat együtt plazmidokat behelyezve citokin gének (szabályozók az immunválasz). Ezen túlmenően, DNS beadását vakcinák liposzómákba vagy mikrokapszulákban biztosítja a magas szintű humorális és celluláris immunválasz.
Jelenleg ez épített több mint 20 DNS elleni vakcinák különböző vírusos betegségek állatok és emberek: veszettség, Aujeszky-féle betegség, a Newcastle-betegség, fertőző szarvasmarha rhinotracheitis, vírusos hasmenés vírus, szarvasmarha leukémia, rhinopneumonia lovak szindróma csökkenése tojástermelés, parvovírus fertőzés a kutyák, az AIDS, a herpeszvírus az emberi fertőzések és mások.
DNS-vakcinák a legígéretesebb megelőzésére érzékeny betegségek elhúzódó krónikus lefolyású. Ezek biztonságosságát és hatásosságát inaktivált vakcinák élő. Eddig azonban nincs teljes információ arról, hogy mi van a hatékonyságát DNS vakcinák immunizálás emberekben. Az Egészségügyi Világszervezet (WHO) fejlesztett egységes követelményeket DNS-vakcinák. A hatékonyságot DNS-immunizálás nyilvánvaló, de a technológia fejlődése ezeket a vakcinákat a fejlesztési szakaszban és az intenzív tanulmány. Időbe fog telni, több erőfeszítéseket a gyakorlati megvalósítása az új megközelítés a megelőzés a vírusos megbetegedések állatokban és emberekben.
Megjegyzés. A plazmid DNS-replikáció történik csak bakteriális sejtekben, míg a gén transzkripcióját az immunogén fehérje végzik csak az emlős sejtekben. Állatkísérletek azt mutatták, hogy a plazmid DNS-t nem replikálódik, nincs beágyazva kromoszómák, és nem alakul ki állatokban antitestek.
Oszd meg barátaiddal