Kalluszképzés kultúrájában növényi sejtek és szövetek
Kallusz szövetet - egy olyan típusú sejt differenciálódás következik be a szervezetlen proliferációja dedifferenciálódott növényi sejtek szervek. A növények a természetben kalluszszövetet történik rendkívüli körülmények (pl trauma) és működteti egy rövid ideig. Ez a szövet védi a hely sebesülés, felhalmozódhat tápanyagok anatómiai regenerációját vagy hasznosítása az elveszett szerv.
Kallusz-képződés nem mindig jár együtt a traumatikus hatását. A kalluszt is előfordulhat eredményeként a belső szövet-explantátum proliferáció, tekintet nélkül a vágási felület, mert a hormonális egyensúly. A növekvő kalluszokat fátyolréteg szünetek és fejleszti a felületen. helyezni egy mesterséges közeget tartalmazó auxinok, csövek, palackok, Petri-csészébe (in vitro) a gyökerek, levelek, szárak, portokból, embriók (explantátumokat) - A fragmenseit különféle szervek szöveteiben a magasabb rendű növények tenyésztett kallusz sejtek.
Az egyik fő hormonok használni, amikor in vitro tenyészthetjük, amelyek auxinok, amelyek aktiválják a sejtosztódást és a nyúlást. Behatol sejtekbe, IAA specifikus receptorokhoz kötődik, ami befolyásolja a funkcionális aktivitását membránok, riboszómák és működtetése egy nukleáris eszközt. Az itt használt auxinok 2,4-diklór-fenoxi-ecetsav (2,4-D), naftil-ecetsav (NAA), indol-vajsav (IBA), indolecetsav (IAA) koncentrációban 0,5-10 mg / l, attól függően, típusú explantátum.
A folyamatot megelőzi a kialakulását kallusz szövet-explantátum dedifferenciálódása. Ha dedifferenciációja szöveti elveszíti szerkezetét jellemző betöltött sajátos növény, és visszatért az állam az osztódó sejtek. Ha explantátum előállításához használt kallusz, szerv fragmenst, hogy áll a epidermális sejtek, a kambium sejtek az érrendszer, a mag és a primer kortikális parenchima. Előnyösen, a sejtek szaporodnak a kambium, kéreg parenchyma mag.
Sejtek tenyészetben létezhetnek két formában: szuszpenzióban folyékony közegben, és a felületen szilárd táptalajon alkotnak kallusz. Felületi tenyésztést végezzük szilárd agar táptalajon.
Kalluszt termesztik a felület folyamat amorf tömege vékonyfalú parenchyma sejtek nem rendelkező jól meghatározott anatómiai felépítése. A szín a tömeg lehet fehér, sárga, zöld, piros. Attól függően, hogy a származási és a termesztési feltételek kallusz szövetekben:
- morzsalékos, sokkal hidratálás, könnyen bonthatók sejtek;
- közepes sűrűségű, jól meghatározott merisztéma központok;
- sűrű, zónák csökkentett kambium és érrendszeri. Általános szabály, hogy a hosszú távú kulturális közegekben auxinokkal, kallusztenyészetbe elveszíti a pigmentáció és meglazulnak.
A ciklus növekvő kallusz szövet sejtjei után egy sor osztályok növekedni kezd a feszültség, mint egy érett differenciált kallusz szövetet és lebomlik. Annak érdekében, hogy ne történjen öregedés, hogy csökkenne a képesség, hogy osztódnak és a további növekedés, valamint a elsorvadása kallusz sejtek, elsődleges kalluszt friss táptalajra 28. után - 30 nap, azaz, kiad passzálás és szubkultúra kallusz szövetet.
A előfordulása fiziológiai és strukturális különbségek a sejtek és szövetek a növények, miatt funkcionális specializáció nevezzük differenciálódási folyamatot. A koncepció a „differenciálás” tükrözi az átalakulás embrionális sejtek merisztéma szakosodott. Merisztémasejt, az azonos típusú szerkezete és funkciója, fejlődni kezd különböző módon, ami a különböző szervek szöveteiben.
Szuszpenziós tenyészetek - egyszeres sejtek, a kis, közepes és nagy aggregátumok (sejtcsoport), termesztett folyékony tápközegben állandó levegőztetés (oxigén ellátás) aszeptikus körülmények között. A kapott szuszpenziókat a bőrkeményedés. A megindítását szuszpenziós tenyészet kell lennie 2-3 g friss tömeg, töredező kallusz sejtek 60-100 ml folyékony közegben. Primer kultúrában tenyésztett szuszpenziós lombikokban folyékony tápközeggel forgó rázógépen sebessége körülbelül 100-120. / Min.
Szuszpenziós tenyészeteket széles körben használják, mint modell rendszerekben tanulmányozására másodlagos anyagcsereutak, enzimek és a génexpresszió indukálására, lebomlását külföldi vegyületek, citológiai vizsgálatok, és mások.
Szuszpenziós növekedési görbe modell S-alakú, és tartalmaz: egy lag-fázis, exponenciális, stacioner fázisú és a degradáció. Az űrlap a valódi növekedési görbék különböző fázisaiban tartó. Ez függ a populáció genetika, a mennyisége inokulum és növesztő táptalaj összetételét. A növekedés mértéke a biomassza változik 15-70 nap.
A szuszpenziók használt fontos kémiai anyagok, szerves savak, enzimek, alkaloidok, pigmentek, proteinek, aminosavak, a gyógyszergyártásban használt, kozmetikumok, élelmiszer és kémiai iparban és a mezőgazdaságban.
Szuszpenziós tenyészetek nagy jelentőséggel bírnak a genetika és a molekuláris biológia, különösen: a szuszpenzió sejtek protoplasztokat szükséges szomatikus hibridizáció, géntechnológia, valamint a tanulmány a sejtek anyagcseréjét.
Tenyésztést növényi sejteket folyékony tápközegben végzett állandó keverés közben hiányzik sok hátrányát rejlő termesztése kallusz sejtek agar szilárd táptalajon. Folyamatos mozgása növényi sejtek egy folyékony közegben elősegíti a gázcserét, tápanyag gradiens megoldja a problémákat, és polaritása a sejtnövekedés. A legtöbb szuszpenziós tenyészetek állíthatók elő átvitelével kallusz darabokat laza kevert folyékony közegben ugyanolyan összetételű, mint a közepes, amelyen a kalluszt termesztett. Minden egyes sorban a szuszpenziós tenyészet sejtjeit van egy minimális mennyiségű inokulum (cellák száma passzált), egy kisebb mennyiségű, amely nem növekszik szuszpenziós tenyészet sejtjeit. Csökkenésével inokulum mérete növekszik a hossza a lag fázis. Szuszpenziós tenyészet növényi sejtek széles körben használják, mint modell rendszerekben tanulmányozására másodlagos anyagcsereutak, enzimek és a génexpresszió indukálására, valamint a kiindulási anyag izolálására enzimek. Fontos előnye a elosztását enzimek vagy másodlagos anyagcseretermékek a hiánya a legtöbb szuszpenziós tenyészet sejtjeit a klorofill és a karotinoid pigmentek. Annak a ténynek köszönhetően, hogy a szuszpenziós tenyészet sejteket elsősorban áll egy viszonylag homogén sejtpopuláció, amely gyorsan feldolgozni hozzáadott vegyi anyagok táptalajt, ezek nagyon hasznosak a biokémiai kísérletek a tanulmány az anyagcsere uvodimyh anyagok, valamint a izolálása és jellemzése mutánsok.
Mikroszaporítás cső növények alkalmazásával végezzük terjedését. Ez a reprodukciós alapul elnyomása apikális dominancia és a hónalji merisztémákat aktiválást eltávolításával a hajtás csúcsa. Axilláris bimbók képződnek hajtások táptalajon. Növények, hogy kialakult 5-6 levelek, aszeptikusan eltávolítjuk a csövekből, és vágjuk részek (szár vágni a levél és a hónalji bud). Dugványokat ültetett mélységben hézagok a tenyészközegben nélkül hormonokat, vagy azzal a kiegészítéssel, auxin.
A magoncok tenyésztettük ugyanolyan körülmények között, mint a merisztéma hőmérsékleten 24-25 C nappali és 19-20 ° C éjszakai világítás KLX 5-6 és 16 órán át megvilágítási periódusban.
A növekedés a szár és a gyökerek kezdenek 3-4 nappal az ültetés után a tápközegben, és a növény teljesen kialakult a 12-15 nap.
Az ezt követő dugványok végezzük 14-20 nap. Egyetlen növény kaphat 5-8 dugvány, és 2-3 hónap múlva - 3-5000 dugványok ..
Az alsó rész a növény használt ELISA. Növények fertőzött a vírusok, a házasságot, és ad okot egészséges meriklonam (merisztéma klón).
Gyökerező növények által alkotott mikrocherenkovanii, akkor kell ültetni egy új táptalajt. Dugvány és hajtások könnyen gyökeret tartalmazó táptalajon ásványi sókat kimerített készítmény (Fehér közepes Murashige-Skoog tápközegben kétszer hígítottuk), vagy média kiegészített auxinok: IAA, NAA, IBA.
Hajtásokat kialakítva a csövekben a média lehet tekinteni, mint gyökeres kis növények kell igazítani, hogy a hagyományos termesztési feltételek. Az ilyen növényeket a legjobban átültetett a földre, amikor teljesen kialakult 5-6 levelek és a gyökerek nőni fog kellőképpen. Azonban a különböző kultúrák különböző módon alkalmazkodni a változó környezeti feltételek között. Minden növénynek van szükség egy speciálisan kiválasztott tenyésztési körülmények a talajban, ami be van állítva kísérletileg.