Módszerek színező mikrobiológiai készítmények - studopediya
A sejtfal baktériumok az ő fontos jellemzője.
A részletesebb vizsgálat sejtstruktúrák baktériumok mikrobiológiai készítmények foltos. Festhető élő bakteriális formában, de ez a szín nem ad teljes képet a szerkezet mikrobiális sejtek. Ebben a tekintetben, előállított rögzített készítmények a mikroorganizmusok. Rögzítő megöli az élő sejtek, és ezzel egyidejűleg rögzíti azokat a felszínen a dia.
Előállítás fix festett kenetben készítmények, azzal jellemezve, előállítására, szárítással, rögzítése és színező.
Előállítása kenet. A sovány alkoholt dia van elhelyezve egy kis csepp csapvízzel, és átvisszük egy kis mennyiségű ő hurok „összenyomódott csepp” az anyag, mind a gyógyszer. A kapott szuszpenziót egyenletesen kenjük hurok területe 1 - 2 cm-es rétegben a lehető legvékonyabb. Kenet legyen olyan vékony, hogy gyorsan szárad főzés után.
Szárítás kenet legegyszerűbben szobahőmérsékleten levegőben. Jól felkészült kenetet nagyon gyorsan szárad. Ha a szárítást lassú, a gyógyszer is enyhén melegítjük meleg légáramlás egy nagy láng égő, miközben a poharat kenetet. Ezt a műveletet kell elvégezni óvatosan, túlmelegedés nélkül a kenet, vagy mikrobiális sejtek deformálódott.
Rögzítése a gyógyszer több célja van: a mikroorganizmusok elpusztítására, vagyis biztonságosan meg a további kezelést; jobb sejtek adhéziója az üveghez; hogy a kenet hajlamosabbak a festés, mint a halott sejtek festésére jobb, mint élő. A leggyakoribb módszer rögzítéséről hőkezelés.
Mert ez a gyógyszer általában három alkalommal a legmelegebb a láng, gazdaság kenet gomb felfelé. Ne hevítsük túl a stroke, hiszen ebben az esetben változások történnek durva sejtstruktúrákat, és néha a sejtek megjelenése, például a zsugorodás. Annak vizsgálatára, finom szerkezetét sejtek igénybe rögzítéséről különféle vegyi anyagok. Rögzítése folyékony öntjük, kenet vagy gyógyszer egy meghatározott ideig meríteni egy üveget egy rögzítő-oldattal.
Színezés. A sejteket festjük mikroorganizmusok elsősorban anilin színezékeket. Megkülönböztetése savas és bázikus színezékek. Ahhoz, hogy tartoznak savas színezékek, amelynek anionja a színező tulajdonságai bázikus színezék kromofor egy kation. Példák a savas színezékek eozinnal. eritrozin, Nigrosine, sav bíbor; aktívan kommunikál a citoplazmatikus sejtalkotók. Bázikus színezékek - metilénkék, bázikus fukszin, genciánibolya, kristályibolya, szafranin - intenzíven kötődnek a nukleáris komponensei sejtek. A magas koncentrációjú DNS-t és RNS-t egy sejtben riboszomális baktériumok teszi érzékenyebbek a bázikus színezékek. Ebben a tekintetben a mikrobiológiai gyakorlat szinte kizárólag az alap festékek.
Megkülönböztetése egyszerű és különböző festési mikroorganizmusok. Az első esetben festeni az egész sejt, úgy, hogy az jól látható, az alakját és méretét. Különböző festési feltárja csak bizonyos sejt struktúrák és helyettesítő anyagokkal is.
Egy egyszerű festés mikrobiális sejtek általában fukszin, genciánibolya, metilénkék. A fix készítményt forgalomba a párhuzamos üvegbotok feküdt a tálca fölött, hogy alkalmazzák a festékoldatot, és állni hagyjuk, ott 1 - 3 perc. Ügyel arra, hogy a festés alatti festékkel kenet nem szárad ki, és ha szükséges, adjunk hozzá egy új tétel festék.
Végére a készítmény a színes vízzel mossuk mindaddig, amíg az áramló víz színtelen. A készítményt ezután szárítjuk, levegővel vagy óvatosan blottoljuk szűrőpapírral, helyezünk a festett kenetben csepp immerziós olaj, és megtekinthető a 100X objektívvel. Ahhoz, hogy több tiszta készítményei, színezék felvisszük egy kenet, borított szűrőpapír. festési eljárással a kék a módosítás helyett lehet használni a festék oldatot előre átitatott szűrőpapír nekik. Egy megfelelően festett és jól mosott előkészítése terén fényes és tiszta, festett sejtek csak.
Fix és festett is termékek- „nyomat”. Rögzített, festett készítmények tárolható hosszú ideig.
Az alakja sejtek és azok elrendezése (láncok, foglalatok, csomagok, tetrád, stb) felfedi, mint általában, készítmények „összenyomódott csepp”, amikor a fény-pólusú vagy fázis-kontraszt mikroszkóppal. Annak megállapításához, a forma a kis pálca alakú baktériumok sejtek, például Serratia marcescens. előállítunk egy készítményt fixált sejtek és egyszerű festés használt. A sejteket kis rendelkező baktériumok kiemelkedések - prostheca (... Caulobacter nemzetségek Labrüsz Prosthecomicrobium Stella és mások), hasznos, hogy vizsgálja meg fáziskontraszt vagy sötét mezőben. Természetes elrendezése sejtek kolónia mikroorganizmusok és spórák és spóratartók Actinomycetes és fonalas gombák tanulmány a gyógyszer „ujjlenyomat”.
Nem szabad elfelejteni, hogy a kor a táptalaj kompozíció és tenyésztési körülmények jelentősen befolyásolják, és a morfológiai citológia mikroorganizmusok.
Gram-festés (komplex festés mikroorganizmusok), és annak alkalmazása differenciáló baktériumok különböző sejtfal szerkezeteket.
Ez a komplex (egynél több hatóanyag) festési módszert először javasolta 1884-ben. Dán tudós H. Gram (Ch.Gram) festés és később elterjedt a színezés a prokarióták és nevezték el a fejlesztő.
Fontossága Gram festéshez a mikrobiológia állapítjuk meg, hogy az eredmények a festődő baktériumok közvetlenül kapcsolódnak a szerkezeti jellemzői a sejtfalak. Ennek magyarázata vannak jelölve különbségek a szerkezet a sejtfalak a Gram-pozitív (módszer szerint a festés lila) igramotritsatelnyh (módszer szerint a festés vörös színű) baktériumok. Az első ilyen kellően vastag murein (y eubaktériumok) vagy psevdomureina (y archaebaktériumokból), amely a visszatartó protoplaszt komplex „kristályibolya jód +”, és megakadályozza kilúgozási ki a cellából az ezt követő eljárásban az alkohol.
Az viszont Gram-negatív baktériumok, mint heteropoliszacharidok nem alkotnak, vagy tartalmazhat kis mennyiségű nem elegendő, hogy megakadályozza a kitermelés a festék komplex jóddal a protoplaszt feldolgozás során az alkohol. A fenti megmagyarázza, hogy miért, annak ellenére, hogy a látszólagos egyszerűség az eljárás Gram, ő volt az, aki megkapta a legnagyobb elosztó fontos taxonómiai szempontból a vizsgálat, amelynek eredményei jól korrelálnak sok más tulajdonságait prokarióták.
Az eljárás kivitelezésére, hogy előállítanak egy speciális festék - Carboline oldatot genciániboíyával vagy kristályibolya: 1 g színezéket eldörzsöljük mozsárban, 2 g kristályos karbolsavat az összhang a zabkását, hozzáadunk kis részletekben 10 ml 96% -os alkohol, végül meghígítottuk 100 ml desztillált vizet öntünk palack, az állandó és leszűrjük a következő napon. A második fő komponense a gramm folt Lugol oldat. 10 ml desztillált vízben feloldunk 2 g kálium-jodidot és 1 g kristályos jódot, az elegyet jól lezárjuk és egy napig, majd 300 ml desztillált vizet.
Gram-festés eljárás kezdődik a feldolgozás a rögzített bakteriális sejtek festődnek kristályibolya, majd ezt követően a sejteket egy jódoldatot. Ezt a két komponenst együtt krupnomolekulyarnyh komplex nem oldódik vízben, és oldódik. Éppen ezért, ha egy alkohol, a sejteket differenciált: a mosás benne „Gram-pozitív” sejtek megtartják a komplex „kristályibolya jód +”, és továbbra kék, és a „Gram-negatív” elszíneződött. Ugyanezen, hogy láthatóvá tegyük őket, a mintákat tovább festettük néhány kontrasztos vörös festékkel - általában magenta.
A sok javasolt a jelen kiviteli alaknál, Gram-festés (GP Kalina Atkins et al.) Kellően elterjedt modifikatsiyapo AI Blue. hogy végre egy korábban elkészített szűrőpapír csíkokat oldattal impregnáljuk a kristályibolya és szárítjuk.
Eljárás összetett festés mikroorganizmusok:
1) a kenetet dia előállítására bakteriális tenyészet, amely rögzítve van az égő lángja;
2) a-tampont helyezünk egy darab szűrőpapírra oldatával impregnálják kristályibolya, amelyek alkalmazása 2-3 csepp vizet, és hagyjuk állni 2 percen át;
3) távolítsa el a szűrőpapír;
! 4) mosás nélkül vízzel () alkalmazzák a kábítószer-2-3 csepp Lugol-oldattal és 1 percig inkubáltuk;
5) kondenzált Lugol-oldat;
6) leeresztjük egy üveg mikroszkóp tárgylemezre 95% -os alkohollal, ahol a hatóanyag alaposan leöblítjük 0,5-1 percig, amíg már nem színezék indulnak;
7) preparátumot alaposan mossuk vízzel;
8) visszük fel a tárgylemez és vizes fukszin festék alatt a hatóanyag 0,5-1 percig;
9) A festék leszívatjuk, vízzel alaposan mossuk előállítására, levegőn szárítjuk és mikroskopiruyut.
Úgy gondoljuk, hogy a legtöbb esetben az eredmények értelmezését kenet Gram-festés nem nehéz, de néhány Gram-pozitív mikroorganizmusok, különösen tagjai a Bacillus nemzetség. Lehet, hogy egy gramm folt. Éppen ellenkezőleg, egyes törzsei Gram-negatív nemzetségek Acinetobacter és Moraxella inkább nem színezi el az alkohol, úgy néz Gram-pozitív.
Annak tisztázása ilyen „Gram-kétes” különleges reakció eljárásokat javasolt. Japánban, a javasolt módszer a „vezeték”, amely lehetővé teszi, hogy különbséget KOH teszt a Gram-negatív mikroorganizmusok. A módszer KOH az a képesség, a sejtfal a Gram-pozitív baktériumok, hogy megőrizze integritását, amikor ki vannak téve a kálium-hidroxid, mivel a sejtfal a Gram-negatív mikroorganizmusok mellett megsemmisítik a jelzett expozíció.
Alkalmazott egy üveg csepp 3% -os vizes KOH-oldattal. Hurok, hogy a napi agar kultúra a baktériumok tanult és alaposan emuigeáljuk. Amikor a pozitív választ, ha egy csepp szuszpenzió viszkózussá válik, nyálka menet hurok ráhúzzuk 0,5 - 2,0 cm, és még tovább, ez - Gram - ha nem, Gram-pozitív baktériumok ellen. A figyelembe ezt a tárgyalás sokkal kényelmesebb a fekete háttér.
Oktatási nyálkahártya konzisztencia feldolgozás után gramm KOH miatt kilépő sejt DNS-ének viszkózus komponensről.