Módszer elegáns-reakció glikogén - az eredmények értékelése

Módszer PAS-reakció glikogén - az eredmények értékelése

Citokémiai módszerek folytatni azonosítását kémiai és enzimes szereknek sejtekhez a színreakció. Citokémiai készítmények megtartják a cellás szerkezet, amely lehetővé teszi a sejtek azonosítására és intracelluláris lokalizációját issleduvmogo kompozit. Ezért a hematológia inkább nem biokémiai, időigényes, és elpusztítja a sejt szerkezete tartozó igen változatos sejt populáció, és citokémiai módszerekkel.

Sejtkémiai bebizonyította, hogy jelentős a kémiai és enzimatikus közötti különbségek morfológiailag azonos sejteket.

Glikogén (PAS reakció) (PAS) - eljárás Gochkiss - Mack Kevesebb

Az elv a PAS-reakció. Poliszacharidok azonosítjuk reakció, oxidáló alkoholt csoportok alakítjuk aldehidcsoportok, továbbá azonosítjuk azokat az utolsó színreakció Schiff reagenssel.

Reagensek Schick reakcióban. 1. A fixáló keveréket alkohol-formalin: 9 rész abszolút etil-alkohol 1 rész 40% -os formalin; tárolja + 4 °.

2. perjódsav, 1% -os vizes oldat. Az oldat színtelen nem lesz. Tárolja egy barna üvegben, sötétben, szobahőmérsékleten. Megsárgult alkalmazható megoldás.

3. Schiff-reagens. Oldjunk fel 1 g bázikus fukszin 200 ml desztillált vízben a forrás hőmérsékletén. Chatelő 5 perc, lehűtjük 50 °, szűrjük, és adjunk hozzá 20 ml normál sósavat. Lehűtjük 25 °, adjunk hozzá 2 g nátrium-vagy kálium-metabiszulfit, amelyek úgy rendelkeznek, teljesen feloldódik. Az oldatot meg kell állni egy nap egy sötét és hideg (+ 4 ° C). Ezután adjunk hozzá 2 g aktív szenet, chat 1 percig. és szűrjük.
A kapott szűrlet tiszta és színtelen. Lehet enyhén sárgás árnyalatot; ha az oldat színe rózsaszín, egyre használhatatlan. Tároljuk + 4 ° zárt barna üvegben.

4. Élénkzöld -1% -os vizes oldat.

5. diastasis: nerazzhizhennaya humán nyál vagy 0,1% -os oldat-diasztatikus amilolitikus enzim fiziológiás sóoldatban.

Technika a PAS-reakció

1) 10-perces időt biztosító kenetek formalin-alkohol elegy; desztillált vízzel mossuk;
2) oxidációja egy 1% perjódsav oldat, 10 perc.; desztillált vízzel mossuk;
3) színező reagenst Schiff borított tartályba, a sötét és hideg körülmények között, 2 óra hosszat; mosás folyó vízzel;
4) 1% színező kontrasztos zöld fény 1 percig; mosás folyóvízzel.

Referencia rögzített kenet inkubálás alá diasztáz, 60 min. szobahőmérsékleten, hogy szelektíven eltávolítani glikogén. Mosás után desztillált vízzel kezeljük hagyományos eljárással.

Értékelése PAS-reakció eredménye

A glikogén. RED színezetű bíbor színű, megjelenik a szemcsék formájában vagy szórt. érett granulociták kenet ellenőrzésére használják a reakciót. Emellett glikogén Schick ad pozitív reakciót, és egyéb anyagok a szénhidrát jellegű, mint például a mucin, mukoproteinek, cerebrozidok, fibrin. A differenciálás glikogén ezeket a rendszerelemeket úgy érjük el, előkezelésére diasztáz-, ami után a glikogén nem színezett.

A granulociták glikogén tárolt diszpergált formában szakaszában promielociták és növekedni kezd a érését. Normális körülmények között a limfociták vagy negatív 20% -uk lehet néhány finom szemcsék glikogén. A monociták negatív, vagy egy finom szemcseméretű.

A szín intenzitása határozza szemikvantitatív. A limfociták Schick reakciót tükröződik a glikogén formájában index, vagy az átlagos reakció (Astaldi). Normál glikogén index értéke 0,10-0,30. Általában csak a kóros limfociták megfigyelhető terhelési szintje több mint 3.

Ezért a módszer Schick reakciót.
a) kialakításánál differenciáldiagnózisában egyes citológiai típusú akut leukémia:
- myeloblastok és promielouity Schick-negatív vagy legyengül diffúz szín. Auer test ad pozitív választ, ami csökkenti az emésztés után a nyál.
- limfoblasztok az akut leukémiában és limfoszarkóma ad éles, a PAS-pozitív reakciót a szemcsék formájában, vagy glikogén nagy blokkokat.
- erythroblastok a eritremii és akut eritroleukémiában így élesen pozitív, diffúz vagy granulált reakció, szemben a normál eritroblasztok hogy Schick-negatív;
- monocita b-ig átmeneti gyengén pozitív, finom csiszolópapírral.

b) céljából a diagnózis és ellenőrzés a kezelés hatásosságát a krónikus limfatikus leukémia: túlértékelt sebesség a glikogén jelzi egy súlyos formája a betegség, és a prognózis súlyos.
A abnormális limfociták növekedését, a glikogén nem jellemző a leukémia jelenség növekedése miatt a metabolikus aktivitás semmilyen formában limfoid proliferációját.

c) Annak érdekében, hogy különbséget más Gaucher sejtek makrofág akkumuláció.