A rhesus meghatározásának technikája
Expressz módszer a standard univerzális reagens meghatározására egy kémcsőben melegítés nélkül
Annak vizsgálatára, a lehetséges felhasználása incoagulated friss vér vett egy ujj (vagy vénába) közvetlenül a vizsgálat előtt, konzerv vagy vér előkezelés nélkül, valamint a vérsejteket a cső után a kialakulása egy vérrög és a szérum ülepedés.
A reakció végrehajtására szolgáló eljárás. A vizsgálatot legalább 10 ml térfogatú centrifugacsövekben végzik. A cső aljához egy csepp standard sztenderd reagens, amely 33% dextrán oldattal hígított szérum AB (IV) szérumot jelent. Ezután egy csepp vért (vagy vörösvérsejtet) adnak hozzá. A csövet körkörösen elforgatva a tartalmat a belső felületén elkenik, oly módon, hogy a tartalom a falakon át terjedjen. Ez nagymértékben felgyorsítja az agglutinációt, és nagy kiterjedésűvé teszi. A tesztcső falán történő agglutináció rendszerint az első percben, de legalább 3 percet kell figyelni, hogy stabil antigén-antitest-komplexet képezzen és tiszta agglutinációt biztosítson. Ezután az eritrociták nemspecifikus aggregációjának kizárásához 2-3 ml fiziológiás oldatot adunk a csőhöz, és összekeverjük a cső egy-kétszeres invertálásával (keverés nélkül!).
Az eredmények értelmezése. Az agglutináció (nagy pelyhek a megvilágított folyadék hátterében) jelenléte a vizsgált vér rhesus-pozitív kiegészítőjét jelzi. Az agglutináció hiánya (egy kémcsőben homogén színű rózsaszín folyadék) Rh negatív-negatív vérmintát jelez.
Laboratóriumi módszerek a Rhesus faktor meghatározására
A laboratóriumban a beteg vérének rhesus-affiliációjának meghatározásához négy fő módszert alkalmaznak.
Az agglutináció módja sóoldatban
Különleges anti-rhesus antitesteket tartalmazó szérumokat alkalmaznak. Az izotóniás nátrium-klorid-oldat 2% -os szuszpenzióját tartalmazó eritrocitákat antirészsót tartalmazó csövekben kombinálják. A kémcsöveket 1 órán egy inkubátorban 37? C-on, ami után a eritrocita pelletet alján a cső kezeljük egy nagyítóval, és annak alakját véve az eredmény. Pozitív eredménnyel (Rh +) az üledék jellegzetes mintázata filamentum vagy granularitás formájában. Negatív (Rh-) esetén az üledéket egy egységes rétegbe helyezzük, és helyesen körvonalazott kör alakú.
Az agglutináció módja zselatin jelenlétében
Két vizsgálócsőben 0,02-0,03 ml vizsgálandó eritrociták üledékét helyezzük el. Ezután 2 csepp (0,1 ml) 10% zselatin oldatot és 2 csepp (0,1 ml) anti-rhesus szérumot adunk az első csőbe, 2 csepp (0,1 ml) 10% -os zselatin oldatot a második (kontroll) csőbe és 2 csepp (0,1 ml) sóoldatot.
A tartalmat finoman összekeverjük. A csöveket ezután egy termosztátban 45-48? C-on 30 percig, ami után hozzáadunk 8,5 ml fiziológiás oldatban, és a csöveket megfordítjuk 1-2 alkalommal keverni.
Az eredményeket a csövek szabad szemmel, vagy nagyítóval történő megtekintésével veszik figyelembe. Ha az eritrociták Rh-pozitívak, agglutinációra kerül sor. Az agglutináció hiánya azt jelzi, hogy a tesztvér Rh-negatív. A kontroll csőben az eritrocita agglutináció hiányzik.
Közvetett antiglobulin teszt (Coombs reakció)
Ez a reakció a legérzékenyebb az eritrociták auto- és izoantigénjeinek hiányos antitestek kimutatására. Rendszerint akkor használják fel, ha nehézségekbe ütközik a Rh rhesus tartozék meghatározása, amely más vizsgálati módszerekkel kapott fuzzy eredménnyel jár. A reakció alapja az antiglobulin szérum alkalmazása.
A kezelés Rh-pozitív eritrociták inkomplett antitestek anti-Rh jön borítékolás őket, kapcsolatban érzékenyítés antiglobulin szérumot, amely agglutinálja eritrociták érzékenyített mint antitest globulinok.
A kémcsőben az antirezus szérumot és a kimosott vörösvérsejteket fiziológiás oldattal mossák egy tesztcsőbe egy órán keresztül 37 ° C-os termosztátban, majd a vörösvérsejteket alaposan mossák. A következő reakciós lépést egy síkban végezzük. Egy csepp vörösvértesteket egyenlő mennyiségű antiglobulin szérummal keverünk össze, és az eredményt figyelembe veszik. Az agglutináció jelenléte azt mutatja, hogy a vizsgált vérminták Rh-pozitívak. Ha nincs agglutináció, akkor a tesztvér Rh-negatív.
Reagálás anti-D-monoklonális antitestekkel
Egy nagy csepp (0,1 ml) anti-D-monoklonális antitestet és egy kis cseppet (0,01 ml) a vizsgált vérből a lemezen összekeverünk.
A reakciót 3 percen át figyeltük. Az anti-D-MKA és az Rh-pozitív vörösvérsejt minták keverésénél gyorsan előrehaladó sziromagglutináció figyelhető meg. Ha a vér rhesusotritsatelnaya, az agglutináció hiányzik.
48. Kompatibilis teszt Rh-faktorra.
Berendezés: donor vér, recipiens szérum, 33% poliglukin oldat, centrifugacső, fiziológiás nátrium-klorid oldat, pipetták.
a) A recipiens vénájától 3-5 ml vért veszünk, centrifugáljuk.
b) alján a centrifugacső pipetták alkalmazni a különböző 2 csepp beteg szérum, 1 csepp vér és 1 csepp 33% poliglyukina oldatot.
c) Keverje fel a tartalmat úgy, hogy a csövet szinte vízszintes helyzetbe billentse és lassan forogjon a tengely körül, és egyenletesen elosztja a tartalmat a falak mentén.
d) Folytassa az eljárást 5 percig.
e) 5 perc elteltével adjunk hozzá 3-4 ml fiziológiás nátrium-klorid-oldatot.
e) Keverje fel a tartalmat a vízszintes sík 2-3-szoros vízszintes síkjának megdöntésével (ne rázza!).
Az agglutináció hiánya, a cső egységes festése azt jelzi, hogy az donor és a recipiens vérének rhesus kompatibilitása van; az agglutináció jelenléte - a véradó és a recipiens Rh-faktorral való összeférhetetlensége
Az első vizsgálat elvégzése után Rh-kompatibilitásra van szükség. Ehhez kétféle módszer létezik: reakció a szérum közegben és zselatinban.
Első módszer: a Petri-csészében alkalmazott 1-2 csepp beteg szérum és egy kis csepp vér, ami után azt állították, 10 percig vízfürdőben (46
+48 ° C). Az agglutináció jelenléte inkompatibilitást jelez.
A második módszer: a cső alján egy kis csepp donorvért helyezünk, 2 csepp 10% -os zselatinos oldatot és 2 csepp páciens vérszérumot adunk hozzá. 10 percig tartó inkubálás után vízfürdőn kb. hőmérséklet + 46- + 48 ° C, adjunk hozzá 5 ml melegített izotóniás nátrium-klorid-oldatot a csőbe. Az agglutináció jelenléte bizonyítja a donor és a recipiens vérének összeférhetetlenségét.
Meg kell jegyeznünk, hogy az isoimmun antitestek és más rendszerek antitestjei azonos módszerekkel mutathatók ki, mint az anti-Rh antitestek, és néhány - az ABO-rendszer ellenanyagaként. Ezért ezekből az ellenanyagokból származó donorvér összeférhetetlensége kimutatható, ha ezeket a vizsgálatokat kompatibilitás céljából végezzük.