Az Rh faktor meghatározására szolgáló módszerek
AZ ERŐFORRÁS FAKTOR MEGHATÁROZÁSÁNAK MÓDSZEREI
Az Rh-faktor meghatározására szolgáló összes módszert a klinikán alkalmazott módszerekre osztják: a felvétel feltételei között, a műtőben, a betegágy közelében lévő osztályon, stb., amelyek nem igényelnek speciális laboratóriumi berendezéseket és laboratóriumi módszereket.
- A RH-FAKTOR MEGHATÁROZÁSÁNAK MÓDSZEREI A KLINIKÁBAN
Két úgynevezett expressz módszert alkalmaznak:
- Express módszer egy standard univerzális reagenssel egy kémcsőben melegítés nélkül.
- Express módszer a síkban fűtés nélkül.
a) Rap-módszer az Rh-faktor meghatározására normál univerzális reagenssel egy kémcsőben melegítés nélkül
Annak vizsgálatára, friss incoagulated vett vér egy ujj (vénába) is használható közvetlenül a vizsgálat előtt vagy tárolt vér előkezelés nélkül, valamint a vérsejteket a cső után a kialakulása egy vérrög és a szérum ülepedés.
A reakció végrehajtására szolgáló eljárás
A vizsgálatot legalább 10 ml térfogatú centrifugacsövekben végzik. A kémcső alján egy csepp szabványos univerzális reagenst, amely a csoport antirezus savója AB (IV), amely 33% poliglicin-oldatot tartalmaz. Ezután egy csepp vért (vagy vörösvérsejtet) adnak hozzá. A csövet körkörösen elforgatva, a tartalmat a belső felületén elkenik, oly módon, hogy a tartalom a falakon át terjedjen. Ez nagymértékben felgyorsítja az agglutinációt, és nagy kiterjedésűvé teszi. Az agglutináció a cső falán előfordul, általában az első percen belül, de ahhoz, hogy stabil komplex „antigén - antitest” és világosan agglutinációs kell betartani legalább 3 perc. Ezután, hogy kizárják a nem-specifikus aggregáció eritrociták egy kémcsőben hozzáadunk 3,2 ml fiziológiás oldatban, és összekeverjük, hogy megfordítjuk a csöveket odnodvukratnogo (keverés nélkül!).
Az eredmények értékelése
Az agglutináció (nagy pelyhek a megvilágított folyadék csontjának hátterében) jelenléte a vizsgált vér rhesus-pozitív kiegészítőjét jelzi. Az agglutináció hiánya (egy kémcsőben homogén színű rózsaszín folyadék) Rh negatív-negatív vérmintát jelez.
b) Expressz módszer az Rh-faktor meghatározására melegítés nélküli síkban
A reakció végrehajtására szolgáló eljárás
A fehér lapon nedvesíthető felületen írja be annak a személynek a nevét és kezdőbetűit, akiknek a vérét vizsgálják. A lemez bal szélén írja be a "szérum - antiresus" feliratot, a jobb oldali kontroll szérumban. Ez utóbbi az AB (IV) albuminban hígított szérum, amely nem tartalmaz anti-rhesus antitesteket. Ennek megfelelően a lemezen lévő feliratokat 1-2 cseppre (0,05-0,1 ml) helyezzük az antiresóznak és a kontroll szérumnak. Mindkét csepphez hozzáadjuk a vizsgált eritrocitákat. A vért egy száraz üvegrúddal összekeverjük a reagenssel, majd a lemezre szélesztjük, amíg egy 1,5 cm átmérőjű csepp alakul ki, és a lemezt kissé megrázzuk. 3-4 perc elteltével az esetleges nemspecifikus agglutináció eltávolítására minden csepphez 5-6 csepp fiziológiás sóoldatot adunk. Ezután a lemezt 5 percig megrázzák.
Az eredmények értékelése
Az eredményt az agglutináció jelenléte vagy hiánya határozza meg szabad szemmel.
A jól kimutatott agglutináció jelenléte a bal oldalon lévő cseppekben a vizsgált vér rhesus-pozitív affinitását jelzi. Az agglutináció hiánya ebben a cseppben (homogén színezés) a tesztvér (Rh-) Rh-negatív jelenlétére utal. Az eredmény csak akkor igaz, ha a jobb (kontroll) cseppben nincs agglutináció jele.
- LABORATÓRIUMI MÓDSZEREK AZ ERŐFORRÁS FAKTOR MEGHATÁROZÁSÁRA
A laboratóriumban a beteg vérének rhesus-affiliációjának meghatározásához négy fő módszert alkalmaznak.
a) Az agglutináció módszere sóoldatban
Különleges anti-rhesus antitesteket tartalmazó szérumokat alkalmaznak. Az izotóniás nátrium-klorid-oldat 2% -os szuszpenziójában lévő eritrocitákat kombinálják anti-rhesus szérummal. A kémcsöveket 1 órán keresztül egy termosztáttal 37 ° C-on, ami után a eritrocita pelletet alján a cső kezeljük egy nagyítóval, és annak alakját véve az eredmény. Pozitív eredménnyel (Rh +) az üledék jellegzetes mintázata filamentum vagy granularitás formájában. Negatív (Rh-) esetén az üledéket egy egységes rétegbe helyezzük, és helyesen körvonalazott kör alakú.
b) Koagulációs eljárás zselatinnal
A csőben egyenlő mennyiségű vizsgált vörösvérsejtet, anti-rhesus szérumot és 10% zselatinoldatot kell elhelyezni. A csöveket 45-48 ° C hőmérsékleten inkubáljuk, majd tízszeres térfogat fiziológiás oldatot adunk hozzá. A csövek 2-3 alkalommal fordulnak el, és figyelembe veszik a szabad szemmel látható agglutináció jelenlétét.
c) Közvetett antiglobulin teszt (Coombs reakció)
Ez a reakció a legérzékenyebb az eritrociták auto- és iso-antigénjeinek hiányos antitestek kimutatására. Számára rendszerint az Rh-hez kapcsolódó vér meghatározásában nehézségekbe ütközött, és más vizsgálati módszerekkel kapott fuzzy eredményekhez kapcsolódott. A reakció alapja az antiglobulin szérum (ACS) alkalmazása.
A kezelés Rh-pozitív eritrociták inkomplett antitestek anti-Rh jön burkolja őket (szenzibilizáló) kapcsolatban az ACS, és amely agglutinálja eritrociták érzékenyített mint antitest globulinok.
A kémcsőben az antirezus szérumot és a mosott vörösvérsejteket adjuk hozzá; 1 órán keresztül 37 ° C hőmérsékletű termosztátban tartjuk, majd az eritrocitákat alaposan mossuk. A következő reakciós lépést egy síkban végezzük. Egy csepp vörösvértesteket egyenlő mennyiségű antiglobulin szérummal keverünk össze, és az eredményt figyelembe veszik. Az agglutináció jelenléte azt jelzi, hogy a vizsgált vérminták Rh-pozitívak. Ha nincs agglutináció, a tesztvér Rh-negatív.
d) Reagálás anti-B-monoklonális antitestekkel
Egy nagy csepp (0,1 ml) anti-B monoklonális antitestet (MCA) és egy kis cseppet (0,01 ml) a vizsgált vérből a lemezen összekeverünk.
A reakciót 2,5 percig figyeltük meg. Ha az anti-D-MKA-t az Rh-pozitív vörösvérsejtek mintáival keverjük össze, a gyors szalag-agglutinációt figyeltük meg. Ha a vér Rh-negatív, nincs agglutináció.
LEHETSÉGES HIBA
*
Leggyakrabban a hibák a módszertani hibák eredményei a vizsgálat során, különösen a konglutinálási módszerek alkalmazása esetén. Hamis eredmények okozhat a rossz közötti kapcsolat a szérum és a vörösvértestek, idő előtti az eredmények értékelése, az eredmények értékelése A szárítási cseppecske, meghatározzuk a Rh faktor a hemolizált és hosszú tárolt vérminta, és a használata a nyugvó fertőzött és rothadt sera a sera lejárt .
A hiba okát lehet biológiai jellemzői a vér teszt: csökkentése agglyutinabelnosti Rh antigén bizonyos betegségek, a máj, a vese és a vér-rendszer és a nem specifikus a vörösvérsejt agglutinációs teszt. Kétséges eredmények esetén a vizsgálatot megismételjük aktívabb anti-verejtémiás szérumok alkalmazásával.