1. Eljárás antigén előállítására a Pullorosa tífusz diagnózisához
F. S. Kirzhayev és T. I. Burmistrova
All-Union Madárbetegségek Tudományos Kutatóintézete (71) A kérelmező (54) A DIAGNOSZTIKUS ANTIGÉN MEGADÁSÁNAK MÓDSZERE
PIRORÓZZA - A BIRDS ÉS A SZÍVTÍPUS
A találmány diagnosztikai készítmények előállítására szolgáló eljárásokra vonatkozik, különösen a puffarózis-tífusz madarakban történő tömeges tri-life diagnosztizálására szolgáló készítmények előállítására. 5
Ismert módszerek előállítására diagnosztikai szerek tartalmazó szelekciós antigénfrakció a mikrobiális sejtek formájában PTP negidradirovannogo degradált poliszacharidot vagy lipopopisaharidnogo 10. Komplelsa majd érzékenyítő ez formalinizirovanpyh eritrociták (11.
Azonban, az antigének előállítható ismert módszerrel, nagy aktivitásúak is csak a szerológiai reakció pretsipita- 15 CIÓ és kevés aktív seropogicheskih a más típusú reakciók, amelyek, különösen, diagnosztizálásához szükséges pulloroza â € „tífusz madarak.
A pupló-tífusz szerológiai diagnózisának napi baromfi-gyakorlata során színes korpusz-bél-antigént használnak a területen.
A színes holografikus aptigén előállításának módja a botorózis - tápanyag kiváltásának növekedése
"Kezdetben a bakteriális tömeget centrifugálással nyerik, a mikrobás sejteket formaldehiddel látják el, majd az anilin festéssel (2j.
Az ilyen módszer végrehajtása során azonban nem lehetséges rendkívül érzékeny és specifikus antigén előállítása. Még a színpompás antigénnel végzett ismételt vizsgálatok nem biztosítanak olyan módszert sem, amellyel a kórokozó-tífusz kórokozó minden madár hordozóját fel lehet ismerni az állományban. Ennek az antigénnek a diagnosztikai értéke különösen alacsony, amikor a madarakat korai korban tanulmányozzák. Ráadásul ennek az antigénnek a vizsgálata gyakran nem akut reakciókat okoz a madarakban. mentes a patogén Pullorase - tífusztól.
Szinte lehetetlen növelni az egész sejtbõl álló pro-antigén érzékenységét. 310 I6) c! I03rreHo Ht.riocToya N-edik és nagyon alacsony szinten madarak agglutinin betegek vérében és llorozom â € "tífusz és in" tensnvnost egyértelműség és látható reakció arg gillOTHHQIIHII HQ STekli a IlerIÅõ × ÎÊËÐTÎ × .dym antigén független T kp A titer "hve" "glutinin. Más típusú tsirkuliruyushih reagáló antitesteket bakteriális sejt, nem okoznak képződését makroskotsicheski látható antigén-antitest komplex (agglutinálódnak), 5
Bel találmány â € „pullornogo Eljárás egy antigén, amely lehetővé teszi, hogy megkapjuk vysokochuvstvitepnyi, egyedi és stabil diagnosztika méter, alkalmas kutatás STRC 10 O field-körülmények között, bármely életkorban.
Ez annak köszönhető, hogy a poliszacharid-polipeptid frakciót izolálják a bakteriális tömegből, és a juhok formalizált eritrocitái szexizltek.
A ram-eritrociták fomalizációját 0,3% -kal fiatalított formaldehidoldattal végezzük 14 órán át 40 ° C-on.
Az eritrociták szenzitizációját 20 egymást követő 45 percig végezzük 80 ° C-on és 2 órán át 40 ° C-on.
Ezzel a módszerrel kapnak. a legtöbb aktív és oldható, specifikus antigén â € „poliszacharid-popileptidnuyu frakció 25 CIÓ ágens .pulloroza â €” tífusz szenzitizáló birka-vörösvérsejtek, amelyek jön makroszkopikusan látható reakciót nem egyféle antitest (például, agglutinineket, különösen tselnokletoch 30 NYM színes pullornym antigén), és az összes tsirkuliruyushimi ellenanyagtiter összességében a vérben a madarak .bolnyh szignifikánsan magasabb titert agglutinin (pl 16-szor), és nem lép reakcióba a vydonespetsificheskimi; antitestekkel (pl, ellenanyagok E.cob).
Megőrzése eritrociták 0,3% -os oldat formapdegida ellentétben nagyobb koncentrációkban (például 1,5-3%) biztonságosan konzervek eritrociták, nem változtatja meg, hogy képesek szorbeáljanak poliszacharid-polipeptid frakciót, és a túlérzékenységet a vörösvértestek A formalinnal kezelt
A 80 ° C erős kapcsolatot biztosít az antigénnek a vörösvértest receptorokkal és antigén telítettségének magas fokával.
Egy példa. 50 000 dózisú antigén bejutása a pompodorosis intravitális diagnózisához - madár tífusz.
A. Poliszacharid-polipeptid előállítása. a kórokozó th frakciója, a pullorosis - tífusz.
Az S. pMi és Um-aImFute bakteriális tömegét, amelyet szokásos táptalajon növesztünk, centrifugálással kicsapjuk
5000 fordulat / perc sebességgel és kétszer fiziológiás oldattal mossuk ugyanazon centrifugáló rendszer alatt. A mosott baktériumtömeg csapadékát 0,1 N-ben szuszpendáljuk. jégecetes oldatot adunk hozzá 45 milliárd mikrobiális sejt
1 ml-t az optikai zavarossági standard szerint és u-t kivonunk 00-92; C for
60 perc. A hidropisát centrifugálással baktériumsejtekből szabadul fel
6000 fordulat / perc 45 percig, a csapvíz ellen pH-értéken tartva
5,0-5,5. Popipeptidnuyu-poliszacharid frakciót kicsapjuk a hidrolizátumból a 8-10 térfogat etanolt, centrifugálással összegyűjtöttük 4000 LIS / perc 20 percig, és desztillált vízben oldjuk (pH = 8,5-9,0) 10 g száraz szilárd anyag 1 liter vizet.
Csökkenti a cukrot a 300-315. Glükóz tekintetében
Összes nitrogén 7 5-80
A maradék nitrogén 55-60. Fehérje nitrogén 20-25
B. A ram erythrocyták kialakulása.
1. A juh vért egyenlő térfogatú Opsever oldatából centrifugáljuk
10 térfogatrész pufferoldatot.
C. Senslbil, a kórformalinizált eritrocita, a kórokozó okozta ágens tífusz poliszacharid-fullpeptid frakciójával.
1 liter 0% -os formalinizált eritrociták szuszpenzióját foszfáttal pufferolt oldat (pH = 7,0-7,2) 250-300 mp
1% -os vizes szer polisaharidnopolipeptidnoy frakció puploroza â € „tífusz tshatelno keverjük és melegítjük vízfürdőben 80 ° C-on 45 percig, és azután átvisszük egy termosztát 2 órán át 40 C-on
Összeállította: L. Murai
Javító P. Makarievics
Order 770/30 Circulation 567 Előfizetés
11NIIPI a Szövetség Miniszterek Tanácsa Állami Bizottságának a találmányokról és felfedezésekről
113035, Moszkva, Zh-35, Raushskaya Nab. d. 4/5
Branch PPP Szabadalom r. Unghorod, sz. Tervezés, 4
A szenzitizált és mosott vörösvérsejtek csapadékát pufferoldatban szuszpendáljuk 10% -os koncentráció eléréséig. Merthiolate 1: 10000.
Pullour antigén, főtt
5 ugyanúgy javasolt, az év során megtartja az aktivitást és a specifitást
A kísérleti eredmények azt mutatják, hogy pullorny származó antigént ni sposooom javasolt érzékenységet jobb az ismert antigén kémcsőben reakciók 15-30 alkalommal, és a baromfi gazdaságok körülmények között feltárja, 3-6-szor hosszabb beteg madarak és nem reagál antitestekkel vidonespetsificheskimi .
A kapott antigén magas érzékenysége és specifitása lehetővé teszi a tífuszos lárvák madárra vonatkozó vizsgálatát minden korban, a 30 napos időszak kezdetétől kezdve, ami nagyon fontos a modern ipari baromfitenyésztésben; 2-3 alkalommal, hogy lerövidüljön a tífuszpestis gazdaságok helyreállításának időszaka; növeli a csirkék biztonságát
ZO napos kora 1-2io, és élesen csökkenti a baromfitenyésztés terápiás és profilaktikus céljával használt gyógyszerek költségeit.
A madarak tanulmányozása nem változik az ismert antigénhez képest.
1, Eljárás egy antigén diagnosztikai pulloroza - láz madarak, amely eljárás során előállítjuk a bakteriális patogén tömeg pulloroza â € „tífusz, -m az L és H és W és W DC I, hogy annak érdekében, hogy növelje a érzékenységét és specifitását az antigént a bakteriális tömeg nQluchennoy aolisaharidno izolált polipeptid-frakciót és érzékenyített vörösvértestek ez formalinnal Oarai.
2.Sposobpop. 1. ábra, azzal jellemezve, hogy az eritrociták formalinizálását 0,3% -os formaldehid oldattal 14 órán át 40 ° C-on végezzük.
3, Módszer szerint. 1. és 2. ábrán látható, hogy a hurok formalizált eritrociták szenzibilizálását 80 ° C-on
45 percig és 40 ° C-on 2 órán át.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a poliszacharid-polipeptid frakciót 0,1 N bakteriális tömegű hidrolízissel izoláljuk. az ecetsav 90-92 ° C-on 60 percen át, majd a hidrolizátumból 8-10 térfogat etanollal kicsapjuk.
A vizsgálat során figyelembe vett információk forrásai;
1. Cabot E. Meyer, M. Experimental Immunochemistry, M. "Medicine, 1966, 124-128, 550-554.
2. Kovalenko Ya P. P. Biológiai és kemoterápiás szerek használata a vetevnnarinban, J. Celkoeizdat, 1951, p. 63.