A mikroorganizmusok színezésének módszerei
A mikroorganizmusok színezése - a mikroorganizmusok morfológiai tulajdonságainak tanulmányozására alkalmazott módszerek és technikák készlete. A natív (természetes) állapotban a baktériumok ugyanolyan törésmutatóval rendelkeznek, mint az üveg, így mikroszkóppal láthatatlanok. Az O. M.-t morfollal tanulmányozhatjuk. A bakteriológiai kutatás elvégzéséhez szükséges tulajdonságok. A baktériumok festését a bakterioszkópos diagnosztika során vizsgált anyagban való kimutatásukra és azonosításukra a baktériummal vizsgált anyag tiszta tenyészete izolálása után végzik el. tanulmány.
A színes készítmény előállítása a következő lépésekből áll: a kenet elkészítése, szárítása, rögzítése és színezése. A kenet elkészítéséhez egy kis csepp vizet helyeznek a tiszta csúcs közepére, és a vizsgálati anyagot bakteriális hurokba helyezzük. Az anyag egyenletesen oszlik el az üvegen oly módon, hogy 1-2 cm2 méretű, kör alakú vagy ovális alakú vékony csomót képezzenek. Ezután a készítményt szobahőmérsékleten levegőn vagy meleg égő sugárban szárítjuk, magasan az égő lángja fölött. A szárított kenetet rögzítésnek vetik alá, aminek következtében az üveghez rögzített (rögzített), a mikrobák inaktiválódnak és biztonságossá válnak, a színezékre való hajlamuk növekszik. Különféle rögzítési módszereket alkalmaznak. A legegyszerűbb és legelterjedtebb módszer az égő lángján hővel történő rögzítés (az előkészítést többször végezzük az égő lángjának legforróbb részében). Bizonyos esetekben a gyógyszert etil vagy metil-alkohol, aceton, azonos térfogatú etil-alkohol és éter keverékével (Nikiforov szerint) rögzítik. A rögzítés után a kenet színét állítjuk elő. A mikrobák festésére a legalkalmasabb az alap és a semleges anilin színezékek. A színes készítményt vízzel mossuk és megszárítjuk. A szárított keneten egy csepp merülőolajat alkalmaznak és mikroszkópiát alkalmaznak a mikroszkóp merítési rendszerének felhasználásával.
A mikrobák festésének egyszerű és összetett módjai vannak. Egy egyszerű színnel, a paradicsom segítségével gyorsan tanulmányozhatja a morfolt. különösen mikrobák jellemzően csak egy festéket, gyakran vörös - bíbor (színező készül 1-2 percen belül) vagy kék - metilénkék (festék kenet feldolgozási idő 3-5 perc). Bonyolult színmódszerekben két vagy több kontrasztos színezéket, mordant, differenciáló anyagot stb. Használnak. A komplex színmódszerek közül a differenciál módszerek és módszerek úgy vannak kialakítva, hogy azonosítsák az egyes sejtszerkezeteket. A differenciálódási módszerek közé tartoznak a Gram és Tsilya-Nelsen módszerei, amelyek lehetővé teszik a morfológiában hasonló mikroorganizmusok megkülönböztetését. tulajdonságait.
A Gram festési módszer a leggyakoribb színező módszer. A baktériumok, attól függően, hogy ki van téve, hogy színezés ezzel a módszerrel, akár nem, két csoportra oszthatók, Gram-pozitív (Gram festés) és Gram-negatív (színezőanyagot nem) a színkülönbség miatt a különböző sejtfal szerkezetét a Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumok.
Technika Gram festés van rögzítve kenet soros feldolgozás: genciániboíyával színes szűrőpapírral (1-2 perc), p-beállított feldolgozási Lugol (1 perc), fehérítés alkoholt (1 / 2-1 perc - egy kisülési ibolya színezékkel fúvókák) vízzel mosható, fchsin festéssel (1-2 perc). A módszer lényege az, hogy a Gram-pozitív baktériumok megtartják komplex színezékkel - jód nem színeződik el az alkohol Gram nem rendelkezik ezzel a tulajdonsággal, azaz, színtelenítjük alkohollal (differenciáló szer) és dokrashivayutsya fukszin ... Ennek eredményeképpen a gram-pozitív baktériumok lila színt kapnak, a gram-negatív baktériumokat - piros.
A Tsilya-Nelsen-módszert úgy tervezték meg, hogy megkülönböztesse a savtartalmú baktériumokat (a tuberkulózis és a lepra kórokozóit) a nem savmentes baktériumoktól. Ha ezt a módszert alkalmazzuk, karbolikus fuchsin Tsilya, kénes c-tu (differenciálószer) és metilénkék. Saválló baktériumok vörösre festett Ziehl-oldat és nem színeződött-egy saválló elvesztik színű feldolgozása során egy és dokrashivayutsya metilénkék.
Számos komplex módszert alkalmaznak a mikrobiális sejtek szerkezetének tanulmányozására. Tehát a baktériumok kapszulájának kimutatására a Hins-eljárást alkalmazzuk, a bakteriális spórák kimutatására - az Aujeszky-módszerrel, a mérgezést Neisser módszerrel festhetjük. A flagella azonosítása "túl festék" módszerekkel, amelyekben a sejtek és egyedi szerkezeteik mérete növekszik és fénymikroszkóp alatt láthatóvá válnak. A "túlfestés" módszerei közé tartozik különösen a Morozov ezüstözési módja. Használható spiroheteinek és még a legnagyobb vírusok - himlővírusok megfigyelésére is.
A homogenitás univerzális módszere a Romanovsky-Giemsa szín (azura, eozin és metilénkék keveréke). Amikor a festés a legegyszerűbb a citoplazma válik kék, és a mag - piros-ibolya. Ezt a módszert alkalmazzák rickettsia, chlamydia, spirochaete, vér alakult elemeinek tanulmányozására is.