A mikroorganizmusok színezése
A mikroorganizmusok színezése - a mikrobiológia legáltalánosabb, a mikroorganizmusok mikroszkóp segítségével történő kimutatására és azonosítására használt módszerek és technikák halmaza. A natív (természetes) állapotban a baktériumok ugyanolyan törésmutatóval rendelkeznek, mint az üveg, így mikroszkopikusan vizsgálva láthatatlanok. A mikroorganizmusok színezése lehetővé teszi a mikrobák morfológiai jellemzőinek tanulmányozását, és néha pontosan meghatározzák megjelenésüket, például néhány mikrobák - ugyanaz a morfológia - különböző színűek, ugyanolyan komplex színezési módszerekkel. A mikroorganizmusok színezése egy fizikai-kémiai folyamat, amely a sejt kémiai összetevőit festékkel kombinálja. Számos esetben a mikrobiális sejtek (sejtmag, citoplazma) különféle részei szelektíven festenek különféle színezékekkel. A mikroorganizmusok színezésére a legalkalmasabbak az anilin festékek, elsősorban az alap- és semlegesek, a savas festékek kevésbé alkalmasak.
A színes készítmény előállítása számos lépést foglal magában: 1) kenet készítése; 2) a kenet megszáradása; 3) a kenet rögzítése; 4) színezés; 5) szárítás.
A kenetet tiszta diákon készítik, amelynek közepén egy kis csepp vizet alkalmaznak, és bakteriológiai hurok segítségével egy vizsgálati anyagot helyeznek bele. Az anyagot egy egyenletes vékony rétegre tesszük az üvegre, a kenet mérete -1-2 cm2.
Az előállítást általában szobahőmérsékleten levegőn szárítjuk. A szárítás felgyorsítása érdekében megengedhető, hogy a kenetet meleg égő áramban felmelegedjen az égő lángja fölé.
A szárított kenet rögzítésen megy keresztül, amelyben a kenet az üveghez van rögzítve (rögzítve), és a mikrobák egyre hajlamosabbak a színezésre. Rengeteg rögzítési módszer létezik. A legegyszerűbb és legegyszerűbb - az égő lángján hőmelegítéssel történő rögzítés (az előkészítést többször végezzük az égő lángjának legforróbb részében). Bizonyos esetekben folyadékok rögzítésére (etil vagy metil-alkohol, aceton, egyenlő mennyiségű alkohol és éter keveréke - Nikiforov szerint). A rögzítés után a kenet foltos. A készítményre alkalmazott festékmennyiségnek olyannak kell lennie, hogy lefedi a kenet teljes felületét. A festés időtartama (2-5 perc) után a festéket leöblítjük, és a készítményt vízzel mossuk.
A mikrobák festésére egyszerű, összetett és differenciális módszerek léteznek. Egyszerű színezésnél általában egy festéket használnak, leggyakrabban piros - bíborvörös vagy kék - metilénkék. Fuchsin színek gyorsabban (1-2 perc), metilénkék - lassabban (3-5 perc). A Fuchsin koncentrált karbolos oldat (fuchsin Tsilya) formájában készül, nagyon ellenálló és sok hónapig színezhető. A metilén kék előzetesen egy telített alkoholos oldatban készül, amely stabil és hosszú ideig tárolható.
A festés komplex módszerei, amelyekben két vagy több festéket használnak, értékes módszerek a fertőző betegségek mikrobiológiai diagnózisában.
A leginkább praktikus érték a Gram festés (lásd Groma színező módszere) és a Tsilya szerinti színezés.
A Tsilyu szerint a színezés módja a savas gyors baktériumok színezésének fő tényezője. Két festéket használnak itt: karbolikus fuchsin Tsilya és metilénkék. A saválló baktériumok vörös színűek, minden nem savas, gyors formában - kék.
A Benignti módszer a flagella színezésének egyik módja. Stain és színező egyik színezék oldat belül ex tempore (adott esetben): I - Cink-szulfát - 1 g, tannin - 10 gramm, desztillált víz - 100 ml-es és II - telített alkohol genciániboíyával oldatot. Keverjünk össze 5 ml I. oldatot és 3 ml oldat II, viszünk fel a hatóanyag, addig melegítjük, amíg a gőz vízzel mossuk, szárítjuk, és a kezelt.
A többi komplex módszer közül az úgynevezett negatív Burri-módszert alkalmazzák, a Hins-módszer a kapszulák kimutatására (lásd a Hins-módszert) és sok másat. Lásd még Bakteriológiai tanulmány.
A mikroorganizmusok színezete a mikroorganizmusok szerkezetének és morfológiájának tanulmányozására alkalmas módszerek komplexei a tiszta kultúrákból vagy a vizsgált anyagból készült készítmények mikroszkópiájában. A mikroorganizmusok színezése fontos diagnosztikai eljárás, amely lehetővé teszi a mikrobák morfológiai jellemzőinek megállapítását, valamint a morfológiailag azonos mikroorganizmusok megkülönböztetését, amelyek ugyanolyan színezési módszerekkel különböző színűek.
A mikroorganizmusok színezése egy komplex fiziko-kémiai folyamat, amelynek mechanizmusát nem vizsgálták részletesen. A mikroorganizmusok színe az egyedi bakteriális struktúrák és a festék kölcsönhatásán alapul. Következésképpen a mikroorganizmusok színezésének eredménye a mikrobák kémiai és fizikai szerkezetétől, a festék tulajdonságaitól, a készítmény előállítási módjától és a mikroba kezelésének módjától függ. A mikroorganizmusok színezéséhez alapvető, savas és semleges színezékeket használjunk. Alapszínekben a színezőanyag kation, és az anion színtelen; a savas, ellenkezőleg, a színező rész a molekula egy anion. Az alapszínek disszociációjakor keletkező kationokat savas tulajdonságokkal rendelkező bakteriális szerkezetekkel kombinálják; a savas színezékek felszabadított anionjait az alapvető tulajdonságokkal rendelkező mikroorganizmus szerkezetei kombinálják.
A közönséges médiumokban a baktériumok negatív felületi töltéssel rendelkeznek, citoplazmájukban és magjukban savas természetű vegyületek vannak. Ezért a fő színezékek, amelyekben a molekula színező része pozitív töltésű, nagyobb affinitással rendelkeznek a baktérium számára, és gyakrabban használják mikrobiológiában, mint a készítmény hátterének ellentéteihez szokásos savas színezékek. Semleges színezékekben kationok és anionok (Romanovsky-Giemsa festéke) színeznek.
Rögzített baktériumokat festett jobban élnek, mert a sejtfal és a sejtmembrán egy élő sejt korlátozására behatolását festék bele. A vitális festési mikroorganizmusok (élő mikroorganizmusok színezés) használt festékeket nagy hígításokban (1:10 000 és 1: 100.000), annak érdekében, hogy elkerüljék leletek megjelenő eredményeként A toxikus hatás következtében a festék az élő szervezetekre. Leggyakrabban vitális festéssel mikroorganizmusok metilén sipim, semleges vörös és mások. A készítményeket mikroszkópiai zúzott csepp. (lásd) vagy egy lógó cseppet (lásd).
A mikroorganizmusok színezésének leggyakoribb módszerei fix készítményekben. Ezek a módszerek egyszerű és összetettek. Amikor egy egyszerű módszert alkalmazzuk egy színezéket (például metilén-kék színezés, bíbor Pfeiffer és munkatársai.). A komplex módszerek több színezékek és kutatás magában foglalja több szakaszban a fizikai és kémiai feldolgozási a gyógyszer (lásd Gram festéshez, a színező Ziehl - Nelsenu - lásd a tuberkulózis; ... színező Romanovsky - Giemsa - lásd Blood és mtsai ..). A mikroorganizmusok festésének komplex módszereit mikrobiológiai diagnosztikában alkalmazzák mikroorganizmusok szerkezetének és funkcióinak tanulmányozására. Például, ha a Gram-festéssel a Gram-pozitív mikrobák differenciálódó Gram hogy nagy jelentőséggel bír, hogy azonosítani gonococcusok, meningokokkusz, bélbaktériumok, stb Ziehl - Nelsen .; a tuberkulózis és a lepra diagnosztizálására a Neneser-diftéria módszer alkalmazásával.
Példaként a színező a Mikroorganizmusok tanulmányozza a szerkezete és funkciója mikroorganizmusok lehet jegyezni a jód használata kimutatási keményítő, Victoria kék - a szelektív festés a sejtfal és tsitoplazmatiicheskoy membrán baktériumok, ozmiumsav - .. festésére zsírt, stb Ezek a módszerek alapulnak különbségek a mikrobák egyedi morfológiai szerkezeteinek kémiai szerkezetében szelektíven festett különböző színezékekkel.
Egyéb festési eljárások egyedi szerkezetek mikroorganizmusok alapján képes e struktúrák, hogy rögzítse a különböző festékek, hogy érzékeli a következő feldolgozási a hatóanyag alkohol, sav, aceton és munkatársai. És kontrasztfestést kontraszt festék. Így a kimutatására spórák felhasználásával a tulajdon szilárdan rögzíteni a festéket nem elszíneződött az azt követő savas kezelés. Amikor festettük baktériumok Gram bázikus színezékek (. Genciánibolya, stb), majd jóddal kezeljük, néhány mikroorganizmusok (gramm) színezék szilárdan rögzítve van és nem kezeléssel eltávolítjuk alkohol vagy aceton; A Gram-negatív baktériumok könnyen elszíneződnek. A baktériumok nukleoidjának azonosítása céljából a Feilgen-eljárást alkalmazzuk. Elszíneződésének a megfelelő értelemben kell megkülönböztetni impregnálás fémsókkal, így például impregnálással ezüst sók festésre Levaditi spirocheták módszerével (lásd. Szifilisz).
A pozitív színezési módokon kívül (a festék közvetlenül a festendő szubsztráton működik), negatív módszereket alkalmaznak mikrobiológiában - a készítmény hátterét festjük. Ezeket akkor használják, ha a mikrobák vagy az egyes szerkezetek gyengén színeznek. A negatív színezés klasszikus példája a Burrie módszer (lásd). Azokban az esetekben, amikor a mikroorganizmusból a kapszulát és mikrobiális mikroorganizmust kell azonosítani, negatív és pozitív módszerek kombinálódnak (lásd Hins módszer).
A szín hatékonyságának javítására több lehetőség is van. Némelyikük biztosítja a feltételeket a penetráció a festék a tárgy festett (például, amikor a festett spóra preparátumokat előkezeltük sósavval). Más módszerek használatával összefüggő a pácok, növekedéséhez vezet a tárgy [például, a használata csersav sók festés csillók baktériumokban (lásd módszer Beninetti.) Paschen sejtek - a módszer Morozova és sejtfal - az eljárás Neyzi].
Lásd még Bakteriológiai technika, bakteriológiai tanulmány.