Salting out - stadopedia
A fehérjék eltávolítása az oldatból
Mivel a fehérjék oldhatósága függ a töltés és a hidratált héj jelenlététől. akkor az egyik vagy mindkét tényező eltűnése a fehérje kicsapódásához és funkcióinak elvesztéséhez vezet. Néhány módszer a szedimentáció lehetővé teszi később visszaállítani a natív tulajdonságait és a munkaképesség a fehérjék.
A proteincsapadék reverzíbilitása a fehérje primer szerkezetének megőrzésével magyarázható. A fehérje fizikai-kémiai és biológiai tulajdonságainak helyreállítását renaturációnak (renaturáció) nevezik. Néha elég csak eltávolítani a károsító anyagot az újraaktiváláshoz.
A denaturálás - irreverzíbilis fehérjekicsapássai miatt törés kötvények, amelyek stabilizálják az kvaterner, tercier, szekunder fehérje szerkezetét, kíséri változása oldhatósága, a viszkozitása, a kémiai aktivitás, csökken vagy teljes elvesztését a biológiai funkció.
Ennek oka a hőmérsékletnövekedés, az ultraibolya sugárzás és a mikrohullámú sugárzás, a mechanikai hatások, a töltés részecskék általi ionizáció.
A denaturáló reagens természetétől függ:
- a savak és lúgok hidrogénkötéseket alkotnak peptidcsoportokkal,
- a szerves oldószerek hidrogénkötéseket alkotnak és dehidratálást okoznak,
- az alkaloidák poláris csoportokkal kötődnek, és megtörik a hidrogén és az ionos kötések rendszerét,
- a nehézfémek kölcsönhatásba lépnek a töltött radikálisokkal, semlegesítik a negatív töltéseket, és elszakítják a hidrogén és az ionos kötések rendszereit.
A sózás a semleges sók hozzáadása a fehérjeoldathoz (Na2S04 (NH4) 2SO4). kisózási mechanizmus tartalmaz reagens anionokat (SO4 2-) és a kationok (Na + NH4 +.) fehérje díjak (csoport NH4 + és COO -). Ennek eredményeképpen a töltés eltűnik, és ennek megfelelően a molekulák kölcsönös repulziója eltűnik. Ugyanakkor a hidrát héja hirtelen csökken. Mindez a molekulák és a csapadék "összeragasztásához" vezet.
Mivel a vér plazmaproteinek különböznek méret, töltés, szerkezet, lehetőség van, hogy vegye fel az ilyen mennyiségű sót, amelynek hatására csapadék kevésbé stabil fehérjék, míg mások még megszűnik.
Például a vérplazma albumin / globulin arányát korábban hasonló módon határozták meg. Albumin, kevésbé poláris molekulák maradnak oldatban 50% telítettség oldat semleges sók, mivel a globulinok ilyen körülmények között kicsapódott. Általában az albumin / globulin arány a vérplazmában 1,2-1,8.