Tápanyag az orvosi mikrobiológiához - dokumentum - oldal
A közönséges tápközeg bioméretének sokaságának (zsír, béltartalom stb.) Történő szállítása gyakran komoly hiba, mert gyorsan elszaporodnak a kevésbé igényes szaprofit mikroorganizmusok. Az e célból gyakran használt sóoldat nem biztosít stabil redoxpotenciált és pH-értéket, ami viszont jelentősen korlátozza számos patogén baktérium életképességét.
Jelenleg a klinika különböző összetételű készítményeket használ különböző tápértékkel, mint hordozóanyag (tartósítószer). Az egyik vagy másik felhasználását megfelelő utasítások, módszertani ajánlások és utasítások határozzák meg, beleértve azokat, amelyeket az Orosz Föderáció Egészségügyi Minisztériuma hagy jóvá.
Ez lehet tartalmazó puffer oldatokat csak az ásványi sók - normál sóoldatban vagy foszfát-pufferolt sóoldat, és a tartósítószerek, a szerves anyagokat tartalmazó - puffer glicerin-sóoldat, glicerin tartósítószert, 0,15% -lle pepton víz, puffer egy kazein-élesztő közeg.
Ezen készítmények összetétele a következő:
0,45 g kálium-dihidrogén-foszfátot
Dinátrium-hidrofoszfát 5,34 g
Desztillált víz 1000 ml
Pufferelt glicerin-sóoldat
Nátrium-klorid 4,2 g
Dikálium-hidrogén-foszfát 3.1 g
Kálium-dihidrogén-foszfát 1,0 g
Glicerin semleges 300 ml
Desztillált víz 700 ml
Nátrium-klorid 0,85% -os oldatát 1000 ml-re
Glicerin semleges 500 ml
Dinátrium-hidrofoszfát 20% -os oldat 150 ml
Desztillált víz 100 ml
0,1 g bakteriológiai pepton
0,5 g nátrium-kloridot
Kálium-nitrát 0,1 g
0,2 g nátrium-bikarbonátot
Kazein-hidrolizátum 2,0 g
Sütő élesztőkivonat 5,0 ml
Foszfát pufferoldat 1000 ml-ig
Így szállítására enterobaktériumok, mint tartósítószereket ajánlott sóoldatot, glicerint és foszfát puffer oldatok. a laboratóriumi diagnózisa campylobacteriosis útmutató alkalmazását biztosítja erre a célra, kivéve, sóoldat, 0,1% pepton-víz -os (3 és 48 óra közötti.), vagy tioglikolsav közeg sterilitási kontrollra (legfeljebb 3 napig).
Meg kell jegyezni, hogy a hűtés a 4 ° C-on jelentősen meghosszabbítja az időt a szállítás minták ezekben a környezetekben: sóoldat - 24 órán keresztül 0,1% pepton víz - legfeljebb 72 órán át, és tioglikolsav közeg sterilitási kontrollra - a 5 - 7 nap. Az Yersinium glicerin tartósítószerek jelenlétének tanulmányozása nem megfelelő. Ebben az esetben a vizsgált anyagot 4-8 ° C-on 7-15 napig tárolják foszfáttal pufferolt oldatban vagy puffer-kazein-élesztő közegben.
Több tucatnyi hordozó van, amelyek potenciálisan közlekedésre is felhasználhatók. Azonban a legtöbb közülük nem felel meg a két kötelező követelmények, amelyek előírják, alkalmasságát a közép- és pontosan transportnoy.Transportnaya környezet egyrészt biztosítania kell a megőrzése a életképességét egy mikroorganizmus, ahol legalább 8-12 órán át szobahőmérsékleten, majd ugyanabban az időben meg kell akadályozni vagy jelentős mértékben korlátozni kell a mikroorganizmusok szaporodását.
Ez utóbbi különösen fontos. Meg kell őrizni a életképességét, hogy része a kórokozó mikroflóra, amely gazda hamar elpusztul, különösen, ha a verseny mikroorganizmusok növekedését kevésbé igényes. Mint már említettük, ez a helyzet nagyon gyakori, ha vizsgált seb mentesítés, béltartalom, köpet, garat tamponok és néhány más biológiai felületeken. Obligát anaerob baktériumok, pneumococcus, a Haemophilus baktérium, Neisseria és más mikroorganizmusok sok nehéz elkülöníteni a biológiai anyagok, ha van egy folyamat intenzív párhuzamos szaporítása szaprofita baktériumok, vagy több életképes kórokozók. Ezen túlmenően, a halál igényes baktériumok létrehozásával határoztuk meg a kedvezőtlen körülmények számukra, mint például a kedvezőtlen pH, redox potenciál, jelenlétét vagy hiányát a szabad oxigén, és a hatás antimikrobiális anyagcseretermékek, hogy bizonyos körülmények között, képezhetnek aktinometsety, Pseudomonas, Escherichia és mások foglalt minta mikroorganizmusok.
A közlekedési tápanyag-adathordozó létrehozásának és használatának tapasztalata nagyszerű, és nómenklatúrája hivatalosan nagy. De valójában a világ következetesen csak két közlekedési eszközökön, hogy hívják a nevét az alkotók: Ames szerdán és szerda Cary-Blair, és amelyek a leginkább egyetemes közlekedési eszközökön tárolni a legtöbb baktériumfaj. Az Ames környezetet számos baktérium, a Keri-Blair táptalaj a bél mikroorganizmusok számára tervezték.
Szerda Keri-Blair-t felajánlották a fejlesztőknek 1954-ben. Az elmúlt hosszú időtartam alatt a megfogalmazása valójában nem változott. Nem okozott eltéréseket és a környezet célját - eredetileg úgy értelmezték, mint a mikroorganizmusok szállítás közben történő megőrzését, különös tekintettel a bél mikroorganizmusaira.
5,0 g nátrium-kloridot
Dinátrium-hidrofoszfát 1,1 g
Kálcium-klorid 0,1 g
Nátrium-tioglikolát 1,5 g
Desztillált víz 1000 ml-ig
A bél mikroorganizmusai sokfélék, magukban foglalják a rezidens és a tranziens mikroflóra képviselőit. Az utóbbi viszont számos baktériumot és gombát tartalmazhat, beleértve. szaprofita. Ugyanakkor, a gyakorlatban a klinikai mikrobiológia szolgáltató intézmények összpontosított elosztása egy bizonyos tartományban mikroorganizmusok kishchnika, különösen képviselői az Enterobacteriaceae család (Shigella, Salmonella), legalább az úgynevezett nem fermentáló gram-negatív baktériumok, bélkúpok és élesztőszerű gombák.
Közlekedési eszköz Cary Blair figyelmeztet a mikrobák sejtjeinek halálára, megőrzi életképességüket, ugyanakkor megakadályozza a reprodukciót. A táptalaj ilyen tulajdonságait komponens összetétele adja. Alacsony tápértéke és mindenekelőtt a nitrogén- és szénforrások hiánya, mint a népesség fejlődésének kulcsfontosságú elemei, korlátozza a mikroorganizmusok növekedését és reprodukcióját.
A közeg használatának módja a következő: egy Cary Blair olvasztott közeget 6-9 ml steril csövekbe öntünk. A vizsgálati csövek közegének térfogatát a beoltás technikája határozza meg. A tampon tartón lévő tollal levett kenettel történő vetéskor elegendő egy kis 6 ml-es oszlop. A bioméret közvetlen tamponálásával (tampon nélkül) a tesztcsőben lévő közeg térfogata nő. Ebben a formában a táptalajt hosszú ideig tárolhatjuk 2-8 ° C hőmérsékleten.
A biológiai anyag a közeg oszlopába merül, oly módon, hogy nem marad a felületén. Ezután a vizsgált csövet a magozott tápközeggel egy tartályba helyezzük és laboratóriumba továbbítjuk.
A Cary-Blair tápközeg körülbelül egy napig megőrzi az igényes baktériumok életképességét, majd a fokozatos sejtpusztulást észlelik. Ezért, miután átvitték a szállítóközegről a dúsított, differenciáldiagnosztikai vagy más tápanyag-adathordozókra, a lehető leghamarabb le kell folytatni. Ugyanakkor bizonyíték van arra, hogy a szalmonella ebben a környezetben több hónapig is életképes marad.
Az Ames környezetet széles körű biológiai szubsztrátok mikroorganizmusok (pus, seb eltávolítható, köpet, CSF stb.) Szállítására használják, kivéve az ürüléket. Ames környezete szénnel és anélkül lehet:
Nátrium-klorid 3,0 g
Dinátrium-hidrogén-foszfát 1,05 g
Kálium-dihidrogén-foszfát 0,2 g
Kálium-klorid 0,2 g
Kálcium-klorid 0,1 g
Magnézium-klorid 0,1 g
1,0 g nátrium-tioglikolátot
(opcionális komponensként) 10,0 g
Desztillált víz 1000 ml-ig
Szén hozzáadása az Ames környezetbe a mikrobiális metabolitok szorpciójához, amelyek hátrányosan befolyásolják a rendkívül érzékeny kórokozókat. Ez a körülmény különösen fontos a gonokokok életképességének fenntartása szempontjából.
Az Ames környéki vetés technikája megegyezik a Cary Blair közegével.
Ellentmondó véleményeket az alkalmasságát Ames közeg szállítására biológiai szubsztrátok obligát anaerob baktériumok. Természetesen, a jelenléte alacsony redox potenciál, amely el van látva tioglikolát nátrium-és oszlop félfolyékony agar, amely belemerül bioanyag határérték érintkező mikroorganizmusok a légköri oxigénnel és a szállítás, hogy a közeg, oldható formában, ami segíthet életképességének fenntartására számos fajta obligát anaerob baktériumok (e tekintetben a legmegfelelőbb a klostridia). Azonban, a környezet nem biztosít hosszú távú megőrzését az obligát anaerobok, amelyek rendkívül érzékeny az oxigén (például, bizonyos típusú Bacteroides).
A fentiek mellett számos típusú mikroorganizmus szállítására számos hordozóanyag van. A legszigorúbb követelményeket a bakteriológiai vizsgálat tárgyát képező anyag szállítására kell alkalmazni a nem spórát képező anaerob mikroorganizmusok jelenlétére. Ezek a baktériumok gyorsan elpusztulnak a levegő oxigénjével való érintkezés során, ami szükségessé teszi az inert gázzal töltött edényeket az anyag szállítására. Például egy közismert folyékony dúsított tápközeg inerm gázban heminnel és K-vitaminnal a vér és a folyékony bioszubsztrátum közvetlen beoltásához jól ismert. Egyidejűleg szolgál szállítási közegként és környezetként anaerob baktériumok termesztésére, beleértve a súlyos anaerobokat is
Számos célzott szállítóközeg tartalmaz antimikrobiális szereket (szelektív komponens). Ezek az anyagok elnyomják az egyidejű mikroflóra növekedését, de nem járnak a kívánt mikrobán. A tápközeg fennmaradó komponensei életképességét biztosítják. Ilyen például a Listeria környezete, amely szintén "éhes", és szelektív hatású anyagokat tartalmaz (literenként):
Nátrium-glicerofoszfát 10,0 g
1,0 g nátrium-tioglikolátot
Kálcium-klorid 0,1 g
Nalidixikus sav 0,04 g
Sokkal "gazdag" a campylobacteriumok (úgynevezett Campi THIO környezet) szállítására szolgáló környezet, amely öt antimikrobiális hatóanyagból áll (literenként):
A kazein hasnyálmirigy-emésztése 20,0 g
Nátrium-klorid 2,5 g
Dipália-hidrofoszfát 1,5 g
0,5 g nátrium-tioglikolátot
Nátrium-kénsav 0,2 g
Cephalothin 0,02 g
Vancomycin 0,02 g
Amfotericin B 0,002 g
Trimetoprim 0,002 g
Polymyxin B 3000 U
Az említett felirat nem különbözik a campylobaktériumok más táptalajok összetételétől (lásd az utolsó fejezetet). Nyilvánvaló, hogy ezek között a fejlesztők középpontjában elsősorban a hatását az antibiotikumok selektsioniruyuschem, visszatartás, általában a közeg összetételének elegendő életképességét fenntartani számos mikroorganizmus.
Ugyanezt az elvet alkalmazzák a klamidia szállítási környezetében. Ezenkívül figyelembe veszi az ozmotikus faktor kiválasztási lehetőségét is (literenként).
Dikálium-hidrogén-foszfát 2,1 g
Kálium-dihidrogén-foszfát 1,1 g
Széna nagy
szarvasmarha 50,0 ml
Vancomycin 0,1 g
Streptomicin 0,05 g
Nystatin 25.000 egység
Az antibiotikumokat és a szérumot aszeptikusan injekciózzák egy steril tápközegbe, mielőtt injekciós üvegeket és kémcsöveket adnak.
Számos közlekedési adathordozó van, amelyek összetett összetételűek a neisseria, a mikoplazmák és ezek kombinációi számára, főleg a genito-húgyúti traktusból nyert bioszubrátumokban. Néhány változatot általánosan igényes baktériumoknak, de különösen a Neisseria számára szállítási környezetnek tartanak. Egyikük egy példánya, amely az úgynevezett nagy csoporthoz tartozott. A transzgrow közepes, az alábbiakban van megadva (literenként).
Hemoglobin 10,0 g
A kazein hasnyálmirigy-emésztése 7,5 g
5,0 g nátrium-kloridot
Kukoricakeményítő 1,5 g
Dikálium-hidrogén-foszfát 4,0 g
Kálium-dihidrogén-foszfát 1,0 g
B12-vitamin 0,001 g
Thiamin-pirofoszfát 0,001 g
P-aminobenzoesav 0,0002 g
Antibiotikum kiegészítő 10,0 ml
Az antibiotikum-kiegészítés számos olyan antibiotikumot tartalmaz, amelyeket a közepes szelektív tulajdonságok biztosítására terveztek. Számos olyan javaslat létezik, amelyek közül egyik sem, a legteljesebb mértékben, természetesen biztosítja az egymást követő mikroorganizmusok növekedésének garantált visszaszorítását. Különböző forrásokban a leggyakrabban a következő összetételt említik (10 ml antibiotikum oldatot adagolunk literenként).
Polymyxin B 0,0075 g
Vankomicin 0,0035 g
Trimethoprim 0,0035 g
Nystatin 12500 U
8. FEJEZET A FORGALMAZÁSI KÖRNYEZETEK AZ IDENTIFIKÁCIÓ ÉS AZ ENTEROBACTERIA AZONOSÍTÁSA
Az emberi megbetegedések kórokozói közül az enterobaktériumok a viszonylag kevéssé igényes mikroorganizmusok közé tartoznak. Mikrobiológiai vizsgálatok során különböző alapanyag-táptalajokon képesek termelni növekedést. Az Enterobacteriaceae család azonban meglehetősen kiterjedt; különböző tulajdonságokkal rendelkezik a baktériumokban. Emellett az emberi test azon területei, amelyekben a család számos tagja a természetes élőhely vagy parazitizmus tárgya, bőven laknak egy rezidens mikroflórán. Ezért az enterobaktériumok kezelésében alkalmazott tápközegek elsősorban a szelektív izoláció és a bakteriológiai diagnosztika problémáját oldják meg. Ez a hazai és a külföldi gyakorlatra jellemző.
Sokak szerint a hazai iránymutatások és utasítások, beleértve az Egészségügyi Minisztérium jóváhagyta előírtak szerint bakdiagnostike enterobaktériumokban javasolt használni táptalajt a közeget szelektív izolálására és differenciálására. A listát a táblázat tartalmazza. Azokat a környezeteket nevezik meg, amelyeket a hazai gyártók elsajátítanak, valamint azokat, akiknek a mikrobiológiai gyakorlatba való bevezetése ígéretes.
A belföldi ajánlások elvben kevéssé különböznek a tápanyag-adathordozók külföldi használatának napjától. Az enterobaktériumok tápanyag-adatait úgy tervezték meg, hogy az egyes nemzetségek és fajok növekedési jellemzőit és azok egy vagy másik szubsztrátum átalakulási képességét alkalmazzák. A következő 7. táblázat szelektíven foglalja össze azokat az enterobaktériumok tulajdonságait, amelyeket figyelembe vettek és sikeresen alkalmaztak tápközegben a család mikroorganizmusainak differenciálódására.
közlekedési környezet - Ames vagy Keri-Blair vagy Stewart;
alapanyag - vér agar, agar szójabab-emésztéssel (tripszikus szója agar);
szelektív és differenciál diagnosztikai közepes - acetát agar, pepton-víz reagenssel Andred, Kligler közepes MacConkey-agar, a folyékony közeg és meghatározza a ureáz indol, közegben dezoxikolát és a citrát, SS-agar (alternatív közegben deoxikolát), citrát Simmons agar. Ahhoz, hogy ez a csoport a tápközeg tartalmazhat sorolható elemzi lista brolacin agar, jobban ismert Oroszországban, mint CLED-agar, a rendelkezésre álló NPO „Nutrient-táptalajra” Makhachkala (közepes tartalmazó cisztin, a laktóz és a jelzés és dózisa elektrolit összetétel) . Bár szigorúan véve ez a tápközeg nemcsak az enterobaktériumok izolálására szolgál.
Egy másik külföldi tapasztalat megérdemli említést.
Az amerikai mikrobiológusok gyakorlatában az enterobaktériumok béltartalmú elosztásában való felhasználása során a következő táptalajcsoportokat javasolják.
Közlekedési eszközként Cary Blair.
Differenciál diagnózis. MacConkey agar és EMB agar (eozinnal és metilénkékkel).
Közepesen szelektív. gektoen entero-agar, SS-Agar (Salmonella-Shigella Agar), XLD-agar (a xilóz, lizin és dezoxikolát).
Nagyon szelektív táptalaj: agar, ragyogó zöld és bizmut-szulfit agar.
Természetesen a fentiek mindegyike nem zárja ki az alapvető tápközegek, elsősorban a tápanyag agar használatát a bárányvörösvértestek hozzáadásával.
A közlekedési környezet célja nyilvánvaló. A média második csoportja lehetővé teszi a laktóz laktóz-negatívokból fermentáló kultúrák differenciálását. A következő (mérsékelten szelektív tápközeg) a szalmonella és a shigella növekedését eredményezi, míg más enterobaktériumok növekedését részben vagy teljesen elnyomja. Ez utóbbi csoportot úgy tervezték, hogy elkülönítse a szalmonellát, de a shigella növekedése nem garantált számukra.