Az embriók embriológiája és minősége

Az IVF program egyik legfontosabb szakasza az embriológiai szakasz. A petesejt minősítésének elvégzésétől függően a műtrágyázási eljárást hajtják végre, és a zigóták és embriók későbbi termesztése az in vitro megtermékenyítés eredményes eredményétől függ.

Az IVF-program embriológiai fázisa legfeljebb 6-7 napig tart. Feltételesen több szakaszra osztható, amelyek leírását az alábbiakban adjuk meg.

"-1" nap - az előkészítő szakasz

Ebben a szakaszban a embryologist előkészíti a szükséges anyagokat az eljárás tüsző szúrás és a trágyázás. Ezen a napon, az összes jelzett és számozott tányérok, Petri-csészéket fektetni a fűtés (, hogy szigorú betartása hőmérsékletű üzemmód) és ekvilibrovku (a pH értékét 7,35-7,45) valamennyi közeg szükséges mosására tüszők és petesejtek és a sperma megtermékenyítés kezelés.

Nap "0" - a tüszõk szúrás (tojásszívás) és a trágyázás

Abban az időben a tüsző szúrás, petesejtek vannak jelen ootsitarno-cumulus komplex (PCC). A follikuláris folyadék során kapott keresztüli szúrcsapolás embriologist check sztereomikroszkóp alatt (vagy a szabad szemmel) jelenlétében PCC, amely úgy tűnik, mint a kékes nyálkahártya vérrögképződés mérete 5-10 mm. Gyorsan kiválasztott PCC elhelyezni a táptalaj, ahol a szakember előzetes becslése a száma, minősége és érettség. Fontos megérteni, hogy a morfológia a komplex nem mindig lehetséges, hogy egy valós értékelésének érettségi foka és a feltétele a tojást.

A lyukasztott oocitában a meiózis első osztását be kell fejezni, majd az első poláris testet elválasztják. A második rész, mint általában, a metafázis szakaszában van. A kromoszómák egy sorozatot alkotnak, és ezáltal egy metafázislapot hoznak létre, amely közvetlenül a poláris test fölött helyezkedik el. Ebben az esetben a tojásban egy meiózis blokk valósul meg, amelyet csak a membránon bejutó spermium távolíthat el.

Az alábbi fotók példákat mutatnak érett és éretlen tojásokra. Az "ideális" paraméterekkel rendelkező humán oociták világos, mérsékelten szemcsés citoplazmával, kis perivitellin térrel, érintetlen első poláris testtel, a pellucida körkörös és színtelen zónájával rendelkeznek. Azonban a szuperovulációs stimulációs ciklusokban nyert összes petesejtnek több mint 50% -a rendelkezik egy vagy több morfológiai rendellenességgel!

A modern ötletek szerint az oocita minősége létfontosságú az embrió kialakulásához és a klinikai terhesség kialakulásához!

Spermatozoon, mielőtt a petesejtbe jutna, ami a petesejt megtermékenyítéséhez vezet, számos akadályt el kell kerülni. Először is, a kumulusz (Cumulus) - mélyebben behatolva, a spermium növeli annak sebességét, bemutatva a hiperaktivitás fázist. Másodszor, a pellucida zónája - itt a spermium kötődik a receptorhoz.

Ezt követően egy reakciót hajtanak végre, amelyben a tojás citoplazmatikus membránja és a spermium membránja kombinálódik. A spermium akroszómájának tartalmát kinyeri, kötődik a pellucida zónához, és a spermium a tojássejt membránon áthatol a tevékenységének elvesztése nélkül.

A tojás héjja és a pellucida zónája között elhelyezkedő helyre a spermium csatlakozik a receptorokhoz a tojáshéjba helyezett receptorokhoz. Ez hozzájárul a cortikális reakció kialakulásához, amely a pellucida zónájában visszafordíthatatlan folyamatokká válik, ami nem teszi hozzáférhetővé más spermatozoák bejutását.

Hasonlóképpen, trágyázás végezzük természetes ciklusban a IVF technika (IVF). Súlyos férfi meddőség, valamint egy kis mennyiségű / szerint kapott transzvaginális petesejtnyerés, az eljárás intracitoplazmatikus spermium transzfer közvetlenül a a petesejt citoplazmájába (Intra-citoplazmatikus spermium injekció, rövidítve ICSI vagy ICSI). Első mikroinjekciózása spermiumot a petesejt tartott Yanagimachi Uehara és Japánban 1976-ban. ICSI a leggyakoribb módszer mikromanipulyatsionnoy mesterséges megtermékenyítés, amely jelenleg széles körben használják a humán asszisztált reprodukciót technológiákat. ICSI eljárás előznie oocita denudációs (enzimkészítmények hialuronidáz kezelés, denyudirovanie (a kumulusz sejtek eltávolítása)), spermafeldolgozó (egyszerű centrifugálás, sűrűség gradiens centrifugálással, úsznak fel).

Az "1" nap - a trágyázás értékelése:

Az ICSI után 16-18 órával, vagy 18-20 órával az IVF után a műtrágyázás jeleinek és a zigóták minőségének értékelését vizsgálják. A 2 pronuclei (PN) és 2 poláris test (PB) ovulusban való jelenléte a trágyázási folyamat normális fejlődését jelzi. A pronukleusok a nemi sejtek (spermiumok és tojás) magjai, amelyek mindegyik szülőből a genetikai anyag felét hordozzák.

Ebben a szakaszban nagyon fontos elutasítani az abnormálisan megtermékenyített embriókat: monoploidokat (1 pronukleusz), triploidokat (3) és poliploidokat (4 vagy több).

A 3 magból álló zygoták (pronuclei) a következő eredményekből tevődhetnek fel:

1. Az oocita 2 vagy több spermiummal való fertőtlenítése (leggyakrabban 2 nem megfelelő minőségű spermatozoa impregnált tojás)
2. Az oocita egy kóros spermiummal való megtermékenyítése kettős kromoszómákkal (minden emberi sejt 46 kromoszómával rendelkezik - diploid szett). Az érett tojás és a sperma 23 haploid készletet tartalmaz. A kromoszómák kettős készletével (46) rendelkező spermium kialakulása akkor következik be, amikor az ivarsejtek érési folyamatát zavarják.
3. A 2. poláris test oocitajának nem izolálása. A tojásérés folyamata egy kromoszómális transzformáció, amely egy oocita kialakulásához vezet, haploid kromoszómakészletekkel. A haploiditás a 2 poláris test elosztásával érhető el. Az első a megtermékenyítésre kész tojás alakul ki, a második pedig a megtermékenyítés után, vagyis a megtermékenyítés után. Általában két poláris test látható.

A poliploidok több spermatozoid nem kielégítő petesejtjének megtermékenyítéséből vagy a fenti tényezők kombinációjából adódnak.

Nap "2" - a zúzás kezdete

A spermium és az oocita genetikai anyagának fúzióját követő 2. napon a sejt 2-es vagy 4-es szakaszának zúzódása van. A zúzott embrió sejtjeit blasztomereknek nevezzük.

Ebben a szakaszban, valamint a "3." napon a blasztomerek egységességét, a tájékozódás sorrendjét egymáshoz viszonyítva, és ha lehetséges, a magok számát (az 1-es normában) becsülik.

Nap "3" - zúzás

Egy másik napon az embrió, mint általában, 4, 6 vagy 8 blasztomerből áll. Az embrió genetikai programja a 4-cellás szakaszban indult, a második, a harmadik nap kezdetének kezdetén. Eddig az embrió kizárólag a tojásban felhalmozódott "állományok" rovására fejlődött ki a petefészke növekedése és fejlődése során. A harmadik napon a spermiumok genetikai programja elindul, és ha a "genetikai könyv", amelyben a rendes embriófejlesztés programja kódol hibákat - néhány "hibát" vagy mutációt tartalmaz, akkor az embrió megáll a fejlődésben. Ez természetes folyamat a genetikailag normális embriók kiválasztásában. Ezért 4-8 blasztomeres állapotban van, hogy az embriók legfeljebb 20% -a megáll a fejlődésben (az úgynevezett "fejlesztési blokk").

Az embriók gyenge minőségének oka lehet gyenge spermiumminőség vagy rossz minőségű tojás. Úgy gondolják, hogy ha az embrió kezdettől fogva rosszul növekszik, akkor a probléma a tojásban van, és ha az első két nap fejlődése jól megy, majd a problémák elkezdődnek, akkor az ügy a rossz minőségű sperma.

4. nap - morula

A 4. napon a fejlődés a humán embrió egy tagja, általában 10-16 sejtek, sejt-sejt kapcsolatok fokozatosan tömörítjük és simított felületre embrió (tömörítési eljárás) - kezdődik morula állapotú (a latin morulae -. Mulberry). Az e szakaszban in vivo (az anya), az embrió mozog a petevezetékben a méhbe. Végére a 4 nap fejlesztési üregben fokozatosan szedercsíra - kavitáció folyamat kezdődik.

M 4 (A): az embrió teljesen tömörítve. A sejtmembránok nem jól láthatóak, de a magok megkülönböztethetők.

M 3 (B): a blasztomerek több mint 75% -át tömörítik. Az embrió gömb alakú és sima felületet tartalmaz.

M 2 (C): részleges tömörítés (kb. 50% blasztomer), abnormális morfológia az embrióban.

M 1 (D): a blasztomerek kevesebb mint 50% -ának tömörítése. A különbségek a denuclearizált fragmentumok és a nem kompakt blasztomerek.

Példa rekord - (M3) - Morula a blasztomerek több mint 75% -ának tömörítésével.

5. nap - blasztociszt

Mivel a morula belsejében lévő üreg eléri a térfogata több mint 50% -át, az embriót blasztocisztának nevezik.

Normális esetben, a kialakulását a blasztociszta lehet végén a 4, hogy a közepén a 6. napon a fejlődés, gyakran előfordul, az 5. napon. A blasztociszta áll két sejtpopuláció - trophoblast (trophectoderm (TE), egy egyrétegű hám körülvevő üreget) és a belső sejttömeg (ICM (ICM), a sűrű sejtek facsoport). Trophoblast felelős beültetése - bevezetése az embrió a méh epitélium (endometrium). trofoblaszt sejtek ad okot az összes további extraembrionális membránok a fejlődő magzat, és az összes a szöveteket és szerveket a gyermek jön létre a belső sejttömeg. A nagyobb üreg a blasztociszta és a jobb kifejlesztett belső sejttömegéből és trophoblast - a nagyobb a lehetősége az embrió beültetése. Amikor elérte a blasztociszta ürege jelentős méretű, van vékonyítva nyújtással zona pellucida (ZP) megtört, és kezdődik a folyamat a keltetés (Hatch) embrió fényes héj. Csak miután ez a folyamat képes a beültetendő blasztocita (mellékelt) a endometriumra. Az implantáció általában akkor fordul elő napján 5-7 embrió fejlődését.

1 fok - korai blasztociszt, a blastociszták ürege kevesebb, mint az embrió térfogatának fele.

2 fok - a blastocisztus ürege több mint a fele az embrió térfogatának.

3 fok - teljes blastociszt. Az üreg teljesen elfoglalja az embrió térfogatát.

4 fok - nagyított blastociszt. A blastocisztus ürege megnagyobbodik, és elkezdi vékonyítani a ZP-t.

5 fok - a trophectoderma nem lép be a ZP-n keresztül.

6 fokos - egy kirakott blasztociszta, amely elhagyta a ZP-t.

Intracelluláris tömeg (ECM):

A - sűrűn van csomagolva nagy számú sejt.

B - az átlagos számú sejtek szabad csoportosítása.

C - kis számú sejt

A - sok sejt, amely a trophektoderm.

B - néhány sejt.

A C jelentéktelen számú nagy sejt.

Példa egy rekordra (4AA) - nagyított blasztociszt, VKM - szorosan tele van nagyszámú sejtekkel, sok sejt, amely trophektodermot alkot.

Kiegészítő keltetés

Annak ellenére, hogy a reproduktív gyógyászat az elmúlt években jelentősen "lépett előre", nem minden esetben a meddőség kezelése az első kísérletből következik be egy régóta várt terhesség megjelenésével. A folyamatban lévő eljárások hatékonyságának javítása érdekében eddig számos olyan speciális módszert fejlesztettek ki, amelyek növelik az embrióbeültetés esélyeit és a terhesség további sikeres fejlődését. Az egyik ilyen technika a kisegítő keltetés (angolul, hogy kinyíljon - "a tojásból kikelt").

Az emberi magzat korai szakaszában a fejlesztési körülvett csillogó átlátszó burok glikoprotein (latin neve «zonae pellucidae»), elvégzi a szerepe a védő héj, amely agykérgi reakció embrió szelektív szállítási tápanyagok, és lehetővé teszi, hogy megóvja a mechanikai sérülésektől. A folyamat során a sejtosztódás hatása alatt különleges természeti mechanizmusok és enzimek válik vékonyabb, és egy bizonyos idő (általában 5-7 óra hasadás) megtört, és „csúszik”, amely lehetővé teszi az embrió belőle és sikeresen beültetett a belső bélés a méh - a méhnyálkahártya.

Mindazonáltal számos okból ez a folyamat mind természetes körülmények között, mind IVF körülmények között nem minden esetben folytatja megfelelően, ami megakadályozza a további terhességet. És ez a probléma az in vitro megtermékenyítéssel foglalkozó szakemberek megvalósításában a segéd keltetés segítségével megoldható - az embrió fényes burkolatának mesterséges felszedése a laboratóriumban. Ez megnöveli az embrió beültetésének valószínűségét és a terhesség további előrehaladását, feltéve, hogy az endometrium helyes előkészítése a megtermékenyített tojás befogadására.

Napjainkig számos módszer létezik a keltetés megtartására, melyek mindegyikének saját tulajdonságai vannak:

• A mechanikus keltetés mechanikus hatással van az embrió átlátszó borítására, és részleges disszekciónak nevezik. Egy különleges mikroncserélővel a fényes héjat kétszer átszúrják egy bizonyos szögben, amely keskeny rést képez, amelyen keresztül a blastociszt gyorsan kiléphet fényes héjjából.
• Kémiai keltetés - a korróziós kémiai oldat (Tyrode savas oldata) héjra kifejtett hatása, amelyet kis területen mikroszerszámokra alkalmaznak. A héjban egy 20 ± 7 μm átmérőjű kis lyuk keletkezik, majd az oldatot eltávolítjuk, és az embriót többször mossuk, hogy elkerüljük az agresszív anyag károsító hatását a sejtjein.
• A lézersugárzással történő lerakódást vékony lézersugárral végezzük, amely az optikai lencse által a héjon keresztül érintkezésmentes kémhatással, vagy gyakrabban a helyi ritkítással történik. Ez a technika pontos, biztonságos és hatékony, míg a legoptimálisabb forma 1480 nm átmérőjű infravörös sugarak használata.
• A piezo eljárást egy piezoelektromos mikromanipulátor segítségével hajtják végre, amely nagyfrekvenciás mikrovibrációval rendelkezik, kúpos bemélyedéseket hagyva a boríték egy korlátozott tartományában, ezáltal hozzájárulva annak elvékonyodásához.

Annak ellenére, hogy a segéd keltetés sokéves rutinszerű eljárásnak tekinthető, ezért nem ajánlatos minden ART műsort használni. Egyes esetekben a keltetés különösen fontos, míg másokban ez nem befolyásolja a terhesség gyakoriságát.

A szakemberek számos lehetséges indikációt állítottak fel az IVF-programokban végzett manipuláció végrehajtására:

• a nő életkora több mint 38 év
• dohányzás
• számos korábbi sikertelen IVF-kísérlet
• az embriók rossz morfológiai paraméterei
• Az embrió vastagabb borítása és más anomáliák
• magas a follikulus-stimuláló hormon szintje a vérben
• az embriók átolvasztása után

Ezekben az esetekben a segéd keltetés technikája a leghatékonyabb lehet.