Előállítása A sejttenyészetek és osztályozása
Meg kell jegyezni, hogy a növekvő sejttenyészetekben kell zárni a szennyeződés baktériumok, gombák és vírusok. Ehhez, ha velük dolgozni kell betartani a legszigorúbb sterilitás, de a vírusos szennyeződés dobja használata révén SPF donorok.
Sejttenyészetek ezen vagy más szövetekben vagy szervekben, hogy egy pillanat alatt. Azonban ez a technológia nem igényel szigor, óvatosság, bizonyos technikákat és készségeket. Sejteket eltávolítjuk a szövetet, a köszörülés és kitettség tripszin, papain, kollagenáz, elasztáz, stb mukazy De a leginkább alkalmas olyan tisztított sejttenyészet tripszin. A porított szövetet helyezzük nagyon gyengén koncentrált (0,25%) tripszin, amely lebontja az intercelluláris anyagként, amely elősegíti a sejtosztódást. Alkalmazása elektromágneses keverővel, centrifugáljuk és többször mossuk a sejtszuszpenziót kapott mesterkeverék alapján élő sejtek, amely bekerül a megfelelő közegben. Ezután a sejttenyészetet egy inkubátorban növesztjük 37 ° C-on, és 3-4 nap elteltével sejttenyészet elkészített kész. A jelenléte a sejtek növesztéséhez határozzuk mikroszkóp alatt. Általában növekvő tenyészetéhez sejtek mikroszkóp alatti lesz egy egyrétegű sejtek szorosan egymás mellett, és amelynek a tipikus morfológiai ezt a kultúrát. Amikor a hőmérséklet-változás, a pH lassítja sejttenyésztő sejtek elpusztulhatnak.
A sejttenyészet használt az úgynevezett tartalmazó növesztő közegben a szérum fehérje specifikus állatok, laktalbumin hidrolizátumot, stb
generáló különböző kultúrák a sejtek 15-50 órán át. Miután elérte egy bizonyos, a jó növekedéshez, azok további szaporítás leállítjuk. Az ilyen sejtek tenyészetének lehet használni, hogy növekedni vírusok (ábra. 2).
Fabric magzati vagy felnőtt
Ábra. 2. reakciólépés: sejtvonalak, amikor in vitro tenyésztjük
szomatikus sejtek (J. Griffiths. B. 1989)
Itt egy konkrét példa egy olyan cellát kapunk kultúráját vese borjak (Fr) alkalmazott termesztési avirulens vakcinatörzs TC-A (VIEV), fertőző rhinotracheitis vírus (RTI) a szarvasmarha. A kultúra FET sejtek alkalmazásával vese egy borjú korában 1-1,5 hónap. A vese kapszula eltávolítjuk, őröljük veseszövetében szelet nagysága 3-5 mm, alaposan mossuk Hanks-oldat antibiotikumokkal. Az őrölt szövetet átvisszük steril lombikba, és töltse meg a 0,25% tripszint tartalmazó 1:10 arányban -1: 15. Bontási szöveti frakcionált hajtjuk mágneses keverő alkalmazásával hőmérsékleten 35-37 C befejezéséhez kimerültség szövetet. Ehhez végezzen 7-8 ciklus 10-15 percig. sejthozam egy gramm veseszövet 40-50 milliót.
A sejtek tenyésztésére használt Fr tápközeg a laktalbumin hidrolizátummal hozzáadásával 10% normál szérum szarvasmarha. Ebben a táptalajt koncentrációban PT dózis 600-800 ezer. Sejt / ml. Tenyésztést FET sejtek matracok 37 ° C-on A sejt monoréteg alakult az 5. napon. A változás a növekedési táptalajt hajtjuk végre 2-3 perc naponta. kultúra minőségellenőrzési végezzük makro- és mikroszkópos.
Miután képező egyrétegű tenyészet sejteket kétszer mossuk Hanks-oldat, ezáltal eltávolítva a tejsavóprotein-megakadályozza a virális replikációt, miután azt a sejttenyészet.
Jelenleg az összes sejttenyészet előállítása során felhasznált és felhalmozása vírusok oszthatók a következő csoportok:
- Elsődleges kultúra - mint a kultúra sejtek, amelyeket alkalmaznak a sejtek, szövetek vagy szervek, amelyeket közvetlenül a szervezetből;
- szubkultúra - sejtek „elsődleges tenyészet”, tenyésztettük;
- sejtvonal - sejtek tenyészetének származó szubkultúra;
- diploid sejtvonal - sejtvonal, amelynek 75% -a van kariotípus rejlő normál sejtben a szervezet, amelyből ezek a kiválasztott;
- átültetett (stabil) sejtvonal - kultúra diploid halhatatlan sejtek, amelyek következtében az átalakulás megszerezte a képességét, korlátlan számú átjárók (legalább 70-szor, 3-napos időközönként);
- heteroploid sejtvonal - egy sejtvonal, amely kevesebb, mint 75%) diploid sejtek. Ezek a sejtek nem voltak láthatók a daganatok. Ugyanakkor, ezek csak korlátozottan képesek in vitro növekedését.
Gyakorisága szerint aejttenyészetben vannak osztva elsődleges (időszakos) és transzplantált (állandó). Először használják a szabály csak egyszer, azaz a folyamat során alkalmazott egyszeri díj. Az utóbbiak folyamatos, állandó sejtvonalakat, amelyeket ismételten a folyamatban.
sejteket tenyésztettük, majd egyre állandó sejtvonal volt sikeres, ha primer egyrétegű tenyészetet készítünk, inokulálunk mechanikusan őrölt zagy tripszinezett sejtek.