A könyvtárak a molekuláris genetikában
A könyvtárak a molekuláris genetika. Mi az a könyvtár?
Könyvtár - egy sor klónok, amelyek mindegyike tartalmaz egy másik DNS-vektor molekulába származó fragmentumok teljes DNS-t vagy RNS-t a sejtek vagy szövetek. Ha a gyűjtemény klónok elég nagy, ez elméletileg tartalmaznia kell a teljes szekvenciáját az eredeti DNS-t. Ezután, a könyvtár lehet azonosítani egy hordozó klónt DNS-fragmenst az érdeklődés egy érzékeny szűrési módszerek, amely képes észlelni, hogy a gyűjtemény több millió különböző fragmenst, úgynevezett „könyvtárban.”
Genomiális könyvtárak. Az egyik hasznos típusa a könyvtár tartalmaz egy sor olyan genomiális DNS-fragmensek. szándékosan előállított, korlátozott számú restrikciós enzim, amely csökkenti a DNS-t pontok közös a genomban. Használata miatt kis mennyiségű enzim véletlenszerűen osztott, nem minden, de csak néhány enzim felismerő helyek.
A módszer generál egy sor átfedő fragmensek. alkalmas klónozó vektorokba. Például, plazmidok, amelyek kifejezetten, hogy hozzon létre egy BAC, úgy állítjuk elő, hogy a vektor átvihető során keletkező részleges restrikciós fragmenseket a humán DNS terjedő méretű 100-350 kilobázis. Miután a rekombináns plazmidot tartalmazó nagy fragmentumokat tartalmaz az emberi DNS-t tett baktériumokban tartalmazó könyvtár sok ezer klón, amelyek mindegyike különböző darabjai részben átfedő genomiális DNS-t lehet tárolni ezt követő izolálása sok gén. Ha a könyvtár elég nagy, az egyes genom szegmens képviseli legalább egy az átfedő fragmensek.
komplementer DNS-könyvtár. Egy másik gyakori típusa a könyvtárak izolálására használt génszekvenciák - egy cDNS-könyvtár, amely tartalmazza a DNS-másolatot a mRNS egy sajátos szövet. Forrásként génklónozás egyes alkalmazások komplementerek a DNS-szekvencia a genom-könyvtárak azért előnyös, mert:
• cDNS csak tartalmazza exont a gén, és így közvetlen reprezentációja a kódoló szekvencia egy gén intronok nélkül és promoter;
• cDNS készletek. képviselik génkópia változhat, ami azt jelzi, a jelenléte alternatív promoterek, poliadenilációs vagy pont vagy pontok különböző splicing, úgy, hogy néhány, vagy exon lehet benne, vagy zárni néhány példányban;
• A Forrás-specifikus mRNS nagymértékben növeli a másolatok számát az ismert gén szelektíven expresszálódik ebben a szövetben.
Például, több kilobázisnyi DNS. tartalmazó béta-globin gén, csak egyikét képviselik milliomod humán genomi könyvtárat, de ez a fő mRNS transzkriptum az erythroid sejtekben. Így egy cDNS könyvtárat létre vörösvérsejt-prekurzorok - a legjobb forrása a cDNS izolálására, a megfelelő mRNS-t (3-globin.
Hasonlóképpen máj cDNS-könyvtár, vagy az izom - az előnyös forrása a cDNS-klónok expresszálódó gének elsősorban vagy kizárólag, ezekben a szövetekben. Ugyanakkor, a cDNS-t nem ad semmilyen utalás a mérete vagy száma a gén vagy exon splicing szekvenciát.
cDNS klónozás végzi a reverz transzkriptáz enzim - RNS-függő DNS-polimeráz retrovírus eredetű szintézisére képes egyszálú cDNS-fragment alapján egy RNS templátról. A kapott egyszálú cDNS-t templátként szolgál a DNS-polimeráz, amely átalakítja egy egyszálú molekula a kettős-szálú hélix. Ezt alkalmazzák a megfelelő vektor, hogy hozzon létre egy cDNS-könyvtár, amely egészben eredeti példányban az mRNS kimutatható a kezdeti sejttípus vagy szövet. cDNS képviselő specifikus mRNS teljes egészében, különösen hasznos, ha az szükséges, hogy a teljes hosszúságú kódoló szekvenciát a gén.
Néhány nehéz rendezett vektorok. úgynevezett expressziós vektorok közé tartozik a transzkripciós és transzlációs jelek csatlakozik a beszúrási pont a cDNS úgy, hogy egy teljes cDNS-átírható és a lefordított baktériumok, élesztők vagy tenyésztett sejtek a kódolt fehérje termelését.
Alkotó ezer cDNS könyvtárak különböző szövetekből vagy ugyanabból a szövetből, hozott különböző fejlettségű sok szervezetekre. Ők lettek felbecsülhetetlen cDNS széles skálájával mRNS példányban. Kezd nagy könyvtár növeli az esélyét, hogy az mRNS érdekes, nem számít, milyen ritka az, hogy legalább egyszer képviselte a könyvtárban.
Erőforrás könyvtár genom adatbázisból
Bár az építkezés a könyvtárak és az átvilágítás fontos módszerek kimutatására és leírás a gén tulajdonságai, a projekt „Human Genome” és számos alkalmazása szintén jelentős hatással van a tanulmány az emberi genetika. Például a gyors bővülése az adatbázis az interneten keresztül elérhető információkat tartalmazó nukleotid szekvenciák a gének, így egyre inkább feleslegessé építési és szűrés könyvtárak.
BAC klónok, vagy a DNS egy adott nukleotid-szekvenciát lehet azonosítani a szoftver, amely a hozzá a szükséges szekvenciát az összes betöltött szekvenciákat az adatbázisban. Sok helyi tartalmazó könyvtárak rendezett szekvenciák egyes klónok tárolt központosított kereskedelmi tárolási amelyek könnyen elő lehet állítani klón bármilyen szekvenciát talált automatizált keresést az adatbázison keresztül.