Előállítási eljárásai és sterilizálása táptalajok
A cél a tevékenység: hogy megismertesse a különféle alkalmazott táptalajok mikrobiológia. Megtanulják, hogyan kell főzni tápláló környezetet receptek. Megismerjék a sterilizációs eljárásokat a táptalaj.
Anyagok és berendezések: kémiai reagensek, lombik, tölcsér, üveg, csempe, szűrőpapír, géz, mérleg, vényköteles táptalajok, autoklávban.
- Készítsünk táptalaj IPA, Czapek agáron, keményítő-ammónia agáron, burgonya agar tápközeg éhezés, a közeg külön különböző csoportok a mikroorganizmusok.
- Forraljuk fel, és szűrőközeg, hogy felkészítse őket a autoklávban.
- Megismerjék a sterilizációs eljárásokat a táptalaj.
- Autoklávban környezet irányítása alatt egy tanár.
Tápanyag médiában. Köztudott, sok tápközegeinek mikroorganizmusok tenyésztéséhez (több mint kétezer neveket sorolták és Johann Lukas Schönlein- Levin 1930 g), de az összetevők száma, ezek lényeges elemei, viszonylag kicsi. Azonban, ezek a média minősége igen széles - oldataiból szervetlen sók, amely növekszik autotróf komplex tápközegek között, amelyet a húsából előállított hidrolizátumok dúsított vér vagy szérum; azokat általában izolálására használt patogén mikroorganizmusok típusú Streptococcusok, amelyek rendkívül igényes a tápközeg összetételének. Két alaptípusa táptalaj: az úgynevezett szintetikus környezetben, a fő elemei a pontosan ismertek (pl, a glükóz-só táptalaj), és empirikusan szelektálja a tápközegek természetes eredetű, az összetétele, amely nem pontosan ismert (ezek közé tartoznak a peptonok, előállíthatjuk részlegesen hidrolizált fehérje).
A választás táptalaj nagyban függ a kísérlet célja az. Herbert határozottan kiállt a széles körben elterjedt a szintetikus növekedési médiában. Azonban fel kell ismernünk, hogy van egy sor gyakorlati kényelmetlenséget. A mikroorganizmusok termesztett ilyen táptalajon általában fenotípusosan eltérnek termesztenek a táptalajon tenyészthető természetben előforduló típusa (például a készítmény és elosztjuk a sebesség). Számos baktérium van egy nagy számú növekedési faktorok és néhány közülük a mesterséges környezet még nem talált, amelyen tudták reprodukálni. Lehetséges, hogy ezek a kellemetlenségek ez végül legyőzni, de amíg a közeg ismeretlen összetételű, mint a levesek, elő Digest használt nagyon széles körben, bár hozzájárulnak a kísérlet ellenőrizhetetlen tényezők.
A médium összetétele termesztésére használt baktériumok, van szükség, hogy építeni fehérjék citoplazmába szerv-nitrogén, szén, hidrogén, oxigén, szervetlen vegyületek, amelyek foszfort, kálium, kén, nátrium, magnézium, vas és nyomelemek: kobalt, jód, mangán, bór , cink, molibdén, réz és mások. Mindezek az elemek kell lenniük olyan tápközegben a mikroorganizmus udobousvoyaemom vegyületet, a követelményeket a különböző mikrobák e tekintetben nem azonos. Annak szükségességét, hogy az oxigén és a hidrogén megfelelnek a baktériumok elsősorban a belépő víz a cella. A természet a nitrogén asszimiláció mikroorganizmusokat a következőképpen oszlik meg: az egyiket eltávolítjuk egyszerű ammónium nitrogénvegyületek, másoknak kell egy aminosavat, és még mások hasítják nagy molekulatömegű anyagok - peptonok, amelyek a tökéletlen enzimes emésztése fehérjék. Szigorúan parazita faj a baktériumok elszaporodnak csak jelenlétében natív, azaz. E. Változatlan fehérje. A szénforrás a baktériumok főleg különböző szénhidrátok: cukrok, többértékű alkoholok, szerves savak és ezek sói. Annak szükségességét, baktériumok elégedett szervetlen elemeket adunk a tápközeghez sók: NaCl, KH2 P04. K2 HP04 és hasonlók. D.
Nyomelemek, hogy katalizátorként működni a kémiai folyamatok van szükség nagyon kis mennyiségben, és adja meg a táptalajt peptont, szervetlen sók és a víz. Együtt a fenti szerves és szervetlen elemek baktériumok igényelnek növekedési faktorok, amelyek a szerepük megfelelnek vitaminok az állatok számára. A forrás a növekedési faktorok adunk a táptalajhoz a növényi és állati eredetű, amely szerkezetében a nikotin, pantoténsav, parabenzoynuyu savak, vitaminok. A tápanyagokat lehet megszerezni, ha egy bizonyos mikrobák reakció táptalaj, mivel a permeabilitása mikrobiális sejtmembránok függően változik pH. Tápanyag követelményeinek és fizikai feltételek, a különböző fajok a mikrobák változik, és ez kizárja a lehetőségét egy univerzális médium.
Állag megkülönböztetni a szilárd és folyékony táptalajon. Szilárd táptalaj készül; folyékony közeg hozzáadásával hozzá ragasztó anyagok agar vagy zselatin. Agar-agar (zselés maláj) - a termék növényi eredetű, kivont hínár. A vízben agar-agart feloldunk hőmérsékleten 80-86 ° C, zselatinok át 36-40 ° C-on A használata agar táptalajon köszönhetően, hogy képesek fenntartani a sűrűség hőmérsékleten 37 ° C-on lehetővé tette, hogy növekszik a mikrobák az optimális a legtöbb közülük hőmérsékleten sűrű közeg. Zselatin - fehérjetartalmú állati eredetű anyagot. A meleg víz hőmérséklete 32-34 ° C-on ez megduzzad és feloldódik, és alacsonyabb hőmérsékleten válik zselé. Azonban pH alatti 6,3 és 7,0 fölött a zselatin sűrűsége csökken, és ez megszilárdul rosszul.
Követelmények a közegben.
Tápanyag média:
1. Tartsa a szükséges élelmiszer mikroba tápanyagokat.
2. Van a reakció pH-optimuma a faj termesztett mikroba.
3. Van elegendő nedvesség, mikrobákkal enni diffúziós törvények és az ozmózis.
4. Legyen izotóniás.
5. Ahhoz, hogy steril, így biztosítva a lehetőséget, hogy növekszik a tiszta baktérium kultúrák.
Tápkörnyezet vannak osztva általános célú és különleges környezetben.
Az első csoportba tartoznak a marha-kivonatos agaron, húsleves, tápanyag zselatin. Általános célú tenyésztésére használt Sok mikroorganizmus és használják alapként elkészítéséhez speciális média, hozzátéve, hogy neki a vért, cukor, tej, tejsavó és egyéb összetevők szükségesek a reprodukció egy bizonyos típusú mikroba.
A speciális táptalajok választható (választási) és differenciál diagnózist.
Választható (szelektív) táptalajon. Az elv a teremtés elektív táptalajok alapján az elégedettség alapvető biokémiai és energetikai igényeit típusú mikrobák szánják őket termesztés. Egy konkrét összetétel és a koncentráció a mikrotápanyagok, növekedési faktorok szigorú pH optimális feltételeket biztosítanak a termesztésére egy vagy több mikroorganizmus-fajok. Amikor a vetés őket egy anyag keverékét tartalmazó különböző mikroorganizmus kerül nyilvánul előtt növekedés a fajokra, amelyekre ez a közeg választható.
Differenciáldiagnosztikai közegben. Ezek a táptalajok meghatározásához használt tartozó fajok a mikroba alapuló sajátosságai metabolizmusát. Célja szerint a differenciál diagnosztikai táptalajok a következőképpen oszlik meg:
1. Környezet azonosítani proteolitikus és hemolitikus képessége mikrobák tartalmazó saját készítmény fehérje anyagok: vér, a tej, zselatin, stb ...
2. környezetben közömbös vegyi anyagok, amelyek szolgálhat tápanyagként forrás néhány baktériumfajt, és nem szívódik fel a más fajok.
3. Közeg szénhidrátokkal és a többértékű alkoholokat megfelelő kimutatási enzimek.
4. Környezet meghatározni a redukáló képességét mikrobák.
A szerkezet a differenciál-diagnosztikai adathordozókat kimutatására szacharolitikus és redox enzimek, mutatók bevezetett: semleges vörös, metilénkék, lakmusz tinktúra, savas fukszinnal, brómtimolkék, és cián festék vizes rozolovuyu savat. Megváltoztatásával színe különböző pH, az indikátor jelzi a jelenlétét vagy hiányát hasítási, oxidációval vagy redukcióval összetevő be a közeg. Azonban, az indikátor szerves része a média kimutatására enzimek. Így a jelenléte a zselatináz és más proteolitikus enzimek a tenyészetben meghatároztuk a cseppfolyósítási zselatin, hajtogatott tojás vagy savófehérje.
Száraz táptalajon. Előállítása táptalaj - az egyik legkritikusabb munkaterületek a bakteriológiai laboratórium. Ebben a tekintetben, BioIndustry gyárt szabványos, konzerv, száraz táptalaj különböző célokra, a mikroorganizmusok tenyésztéséhez. Készítsük el a közegből a recept a címkén feltüntetett. Az állandóság a kompozíció, a szokásos környezetben, az egyszerűséget és a könnyű kezelhetőség, a könnyű szállítás és tárolás a legnagyobb előnye, hogy száraz táptalajok. Miután létrehozó megfelelő közeg pH-ja forraljuk, szűrjük, tisztázni, öntjük fiolák, kémcsövek és sterilizáljuk. Meg kell jegyezni, hogy a sterilizálás után a közeget savasabbá válik.
Sterilizálása táptalaj. Sterilizálása a tápközegek végezzük különböző módszerekkel függően az összetevők, amelyek szerepelnek azok összetétele.
1. Szintetikus környezet és az összes agar táptalaj nem tartalmaz a szerkezetükben a natív fehérje és a szénhidrátok, sterilizáljuk 15-20 percig autoklávban hőmérsékleten 115-120 ° C-on
2. A média szénhidrát és a tej (amely magában foglalja a laktózt), zselatin tápanyag sterilizáljuk áramló gőzzel hőmérsékleten 100 ° C-on vagy frakcionált autoklávban 112 ° C-on
3. környezetek, amelyek közé tartoznak a fehérjetermészetű anyagok (vérszérum) Csíra-redukáló tyndallization vagy szűréssel.
4. A sterilizálás a tápközeg, amely a szerkezet a natív fehérjék a membránhoz Seitz-szűrőn keresztül szűrjük.
Elkészített táptalajok van jelölve sterilitás. Ehhez azokat termosztátba helyezzük 37 ° C-on Közepes, autoklávban sterilizálunk, inkubáljuk 1 nap, sterilizáljuk áramló gőzzel - 3 nap.