Fehérjecsapás semleges sókkal (sózás)

Kezdőlap | Rólunk | visszacsatolás

A PROTEIN-DEPOSITEK REAKCIÓI

A legtöbb fehérje nagy molekulájú vegyület, amely jól oldódik vízben. A fehérjék vízben való feloldódása molekuláinak hidratálásával és a hidratált héj fehérje-részecskéinek kialakulásával függ össze. Bármely fizikai és kémiai tényező, amely megsérti a fehérjemolekulák hidratálódását és semlegesíti a töltetüket, a fehérje oldhatóságának csökkenéséhez vezet, és hozzájárul a kicsapódáshoz.

1. A fehérjék kicsapása melegítéskor.

Nagy hőmérséklet hatására vezet hődenaturációs fehérjék, ami megzavarta szekunder, tercier és kvaterner fehérje szerkezetét. A becsukódó legtöbb fehérje kezdődik hőmérsékleten 50-55 0 C-on, rövid fűtött denaturálás nem fordulhat elő, vagy lehet kimutatták, hogy kis mértékben, a további növekedése hőmérséklet vezet a gyors véralvadási fehérje.

A hő denaturálási folyamat sebességét és intenzitását erősen befolyásolja az oldat pH-értéke és elektrolitok jelenléte. Gyorsan és legteljesebb mértékben a fehérjék koagulálódnak az izoelektromos ponton. A erősen savas és erősen lúgos oldatok, A fehérjék kicsapása forralással alig fordul elő, mivel a fehérjemolekulák szert pozitív vagy negatív töltést, ill.

Reagensek: vizes tojásfehérje, 1 és 10% -os oldatok ecetsav, 10% -os nátrium-hidroxid-oldattal, telített nátrium-klorid-oldattal.

A munka elvégzése. Öt csőben öntsön 1 ml fehérjeoldatot. Az első csőben lévő fehérjét forrásig melegítjük, míg az oldat zavarossá válik, de a csapadék nem esik ki.

A második csőben lévő fehérjeoldathoz adjunk hozzá egy csepp 1% -os ecetsavoldatot és melegítsük, míg a fehérje flokkuláló csapadék csapódik le.

A harmadik csőben található fehérjeoldathoz adjunk hozzá 5 csepp 10% -os ecetsavoldatot, és forraljuk fel, miközben csapadék képződik.

A negyedik csőben adjunk hozzá 5 csepp 10% -os ecetsavas oldatot és 6 csepp nátrium-klorid telített oldatot, forraljuk fel - a fehérje kicsapódik.

Az ötödik csőben adjunk hozzá 5 csepp 10% -os nátrium-hidroxid-oldatot, és forraljuk fel, csapadék nélkül.

Ismertesse a megfigyelt jelenségeket, ha ismert, hogy a tojásalbumin tartalmaz: tojásalbumint rNiEt = 4,8 és egg globulin, rNiEt = 6,6.

Fehérjék szerves oldószerekkel való lebontása.

A szerves oldószerek (alkohol, éter, aceton, stb.) Elpusztítani hidratációs héj a fehérje, ami csökkentené a stabilitás és így a fehérjét kicsapjuk.

A fehérjék etanolos kicsapása a reagenst rövid időtartamú és melegítés nélkül reverzibilis. Az alkohol alkohollal való tartós érintkezése visszafordíthatatlan denaturációhoz vezet.

Reagensek: tojásfehérje oldat, etil-alkohol, aceton.

A munka elvégzése. A fehérjeoldat 1 ml-éhez 2 ml etil-alkoholt adunk és rázzuk. Fehérje csapadék eltűnik, ami vízzel hígítva ismét oldódik.

Ugyanazon fehérjeoldat 1 ml-éhez 2 ml acetont adunk és erőteljesen rázzuk. A fehérjeoldat felhős lesz.

A fehérjék kicsapása ásványi savakkal.

A koncentrált ásványi savak (salétromsav, kénsav, sósav) a fehérje részecskék kiszáradását és töltésük semlegesítését okozzák, összetett vegyületek képződhetnek. Mindez a fehérje visszafordíthatatlan denaturálódásához vezet. A felesleges kénsav és sósav savak hatása révén nyert fehérjecsapadék feloldódik, de nem oldja föl a salétromsavat.

Reagensek: tojásfehérje oldat, sósav, kénsav és salétromsav koncentrált oldatai.
A munka elvégzése. Három vizsgálati csőben öntsünk 1 ml savas oldatot: első - sósav, a második kénes, a harmadik nitrogén. Óvatosan a cső falán, úgy, hogy a folyadékok ne keveredjenek, egyenlő mennyiségű fehérjeoldatot öntünk. A két folyadék határán kis csapadék formájában csapadék képződik. A csöveket óvatosan rázzuk, a felesleges savat adjuk hozzá, és a csapadékot feloldjuk az első két kémcsőben.

A fehérjék csapdázása nehézfémekkel.

A fehérjéket ólom, higany, ezüst, réz és más nehézfémek sóira kicsapjuk. Ebben az esetben a fehérje denaturálódását a nehézfém-ionok fehérje molekulák felületén történő adszorpciója oldhatatlan komplexekké alakítja.

Néhány só feleslegessége (réz-szulfát, ólom-acetát és mások) az üledék feloldódásához vezet (peptizáció).
Reagensek: tojásfehér, 1% réz-szulfát oldat, 5% ólom-acetát oldat, 1% ezüst-nitrát oldat.

Menni dolgozni. A három csövet öntöttünk 1 ml oldatot tojásfehérje és sóoldatok csepegtetünk: az első - a réz-szulfát, a második - ólom-acetát, a harmadik - ezüst-nitrát-csapadék. Ezután hozzáadjuk a felesleges sókat, és figyeljük az oldódási csapadék az első két cső. A képződött csapadékot ezüst-nitrát nem oldódik só- feleslegben.

A fehérjék semleges semlegesítése (sózás).

A fehérjék kicsapódása a csapadékban, amikor a semleges ammónium-, lúgos és alkáliföldfém-sók oldataik hatással vannak rájuk. Ez a folyamat a fehérjék dehidratálásán és a sóionokon adszorbeált fehérje részecskék töltésének semlegesítésén alapul. Ebben az esetben a fehérjeoldatok elveszítik a stabilitást, a fehérje részecskék összeragadnak és kicsapódnak.

Koncentrációjának változtatásával a sók, kiválaszthatja a különböző fehérje frakciók. Így, abban az esetben, kisózás nátrium-klorid, a globulin (Phiet = 6,6) letétbe telített sóoldattal mostuk, és kicsapódni albuminhoz (Phiet = 4,8), szükséges, hogy adjunk hozzá 1% ecetsav oldattal, hogy semlegesítse a felelős a fehérje.

Reagensek: tojás fehérje oldat nátrium-klorid, a kristályos nátrium-klorid (finomra őrölt por formájában por), 1% -os ecetsav oldattal, 1% -os nátrium-hidroxid-oldattal, 1% -os réz-szulfát oldat.

A fehérjeoldat elkészítése (nátrium-klorid hozzáadásával).

A három csirketojás fehérjéit elválasztják a sárgájától, feloldják 7 ml desztillált vízben és 3 ml telített nátrium-klorid-oldatot öntünk. Az oldatot 3-4 rétegben hajtott rágcsálókon átszűrjük. Tárolja a hűtőszekrényben.

A munka elvégzése. Öntsünk 3 ml tojásfehérje-oldatot egy kémcsőbe, és adjunk hozzá por nátrium-kloridot, amíg telített oldatot nem kapunk. 5-6 perc elteltével a kémcsőben a globulinok kicsapódása figyelhető meg. A lúgos és alkáliföldfém-sók semleges oldatából származó albuminok nem csapódnak le. A cső tartalmát papírszűrőn szűrjük át.

A szűrletben albuminokat tartalmaznak, hogy kicsapják őket, az oldatot 1% -os ecetsavval megsavanyítjuk. A megjelenő csapadékot leszűrjük, és a fehérje hiányát a szűrletben biuret reakcióval igazoljuk.

1. Adja meg a natív fehérje fogalmát.
2. Milyen tényezők befolyásolják a fehérjék oldhatóságát?
3. Mi történik a fehérjék reverzibilis és visszafordíthatatlan kicsapásával?
4. Milyen reagensek okozzák a fehérjék visszafordíthatatlan lecsapódását?
5. Milyen szerves oldószerek okozzák a fehérjék kicsapódását a megoldásokból és miért?
6. Hogyan befolyásolja az izoelektromos állapot a fehérjék kicsapódását fűtött állapotban?
7. Milyen tényezők okozzák a fehérje denaturálódását és miért?
8. Miért nem válik ki a fehérje a tojásfehérje termikus denaturálódása során egy erősen savas vagy erősen lúgos közegben, még fűtött állapotban is?
9. Mi az alapja az albuminok és a globulinok elválasztásának?
10. Mi az alapja a fehérjék sójának módszerének?
11. Javasoljon egy fehérje kicsapódási módszert: pepszin (pNRIE = 1,1), ureáz (pNRIE = 4,9), kataláz (pNRIE = 6,7).
12. Melyek a fehérje-kitermelés módszerei?