Genetikai betegségek diagnosztizálására
Géndiagnosztikai nagy jövő a gyorsvonat - diagnosztika a fertőző betegségek. A fertőzés korai szakaszában, amikor antitestek a szervezetben még nem alakult ki, a diagnózis alapja a azonosítása Ar, beleértve az egyedi gének a kórokozó. Erre a kimutatási módszerek a hibridizációhoz és a DNS-amplifikáció.
Kimutatására szolgáló eljárások RNS és DNS kórokozók talált alkalmazást elsősorban a diagnózis vírusfertőzések. Azonban, a fejlett teszt - rendszerek azonosításához bizonyos érzékeny baktériumok (például a Legionella, Chlamydia), valamint azonosítani koloniyNeisseriagonorrhoeae, Haemophilusinfluenzaetipab, B streptococcus csoport, enterococcusok és mycobaktériumok.
Nukleinsav hibridizációs.
A leggyakoribb módszerek a nukleinsav hibridizációs. Elvének módszerek miatt képes a DNS-t (és RNS) specifikusan kapcsolódni a komplementer fragmensek mesterségesen létrehozott DNS-szálak (és RNS), vagy izotóppal jelzett enzimek. Ezután a mintákat vizsgáltunk különböző módszerekkel (például, ELISA).
hibridizációs oldatokban biztosítja a leggyorsabb keresést. Széles bevezetése a módszer megakadályozza a problémát, a nem kötődött nukleinsav szálak.
hibridizáció szilárd alapon, és egy szendvicset - módosítása elosztani. Bázisként szilárd membránja nitrocellulóz vagy nylon. A meg nem kötött reagenseket eltávolítjuk ismételt mosás.
Polimeráz láncreakció.
PCR-alapú módszer által katalizált DNS - polimeráz több DNS-másolatát egy adott formáció része. Kezdetben termelnek lágyítás - termikus elválasztása kettős szálú DNS-molekulák külön láncokat. A tápközeget ezután lehűtjük, és bevezetett primerek (primerek) komplementer nukleotid szekvenciák mindkét lánc. oligunukleotidy álló 10 - - Szintetikus használt primerek a reakció kezdetétől a 20 nukleotidok (például, dezoxinukleotid-trifoszfátok) kölcsönhatásban a végei szekvenciák és a szekvencia 50 - 1000 bázis. Ezután a közeget készül termostabilnuyutag- polimeráz, amely elindítja a szekunder példányban a DNS-szálak, majd az így kapott kettős szálú DNS-molekula ismét melegítjük. A kapott egyláncú lehűtjük, primerek és bevezette megismételjük fűtési és hűtési eljárást; poskolkutag- hőstabil polimeráz, hogy szükség van a visszatelepítés hiányzik. PCR lehetővé teszi, hogy nagy mennyiségben kapjunk a vizsgált DNS-fragmens, akkor is, ha a rendelkezésére álló kutatók csak egy molekula az eredeti genom DNS-t. Azonosítása példányban a DNS végzi elektroforézissel. A PCR-eljárással is az alapja a DNS - azonosítás, szülőktől emberek gének azonosítására, és más genetikai betegségek.
Kimutatása virális Ag.
Jelenleg ott már kereskedelmi készletek kimutatására bizonyos kórokozók, amely lehetővé teszi számukra, hogy azon belül 5-10 perc alatt. Azonosításához Ar, hogy kialakítsuk a szilárd fázist összegyűjtjük, és hozzáadunk tartalmazó szérum Ar; Az inkubálás után, a nem kötődött Ar dekantáljuk, mossuk, és a rendszer make jelölt specifikus antitestekkel szorbeáló AT. Az eljárás inkubálás és mosás, kromogén szubsztrát készül, a pozitív eredmény van rögzítve, amikor a változó a festék rendszer.
Ez a módszer igen specifikus, amely lehetővé teszi a vírus azonosítása genom hibridizáció után a komplementer DNS-molekulák. Ahogy marker használt enzimek és izotópok. A módszer a képességét méri, virális DNS hibridizálódó jelölt jelzett komplementer DNS; az eljárás specifitása egyenesen arányos a hossza a komplementer láncban. Ígéretes módszer nukleinsavak hibridizációjának kislotinsitu. A termelés a reakció a jelzett DNS-t alkalmazva, hogy a biopsziás (beleértve formalin-fixált vagy zárt paraffin blokkok) és a rögzített interakció komplementer DNS. Az alkalmazott módszer kimutatására herpes simplex vírus, humán papillomavírus, Epstana - Barr et al.
(Pp 137 -. 138, 268 - 271., 276-277)