Laboratóriumi módszerek - studopediya
vaginális kenet módszer. Ez a módszer csak akkor alkalmazható, hogy meghatározza a terhesség kancák. Meghozatala előtt váladék a hüvelyből szükséges kanca külső szervek, meleg vízzel és szappannal. Ezután bevezetésével a tükör extender hüvely veszi nyálka aljáról a felső vaginális boltozatot útján egy hosszú kanállal pre akut tompa élek vagy egy steril vattacsomóval. Kézhezvételét követően a nyálka, hogy egy kenetet tárgylemezre nyálka. Kenet termelés, akkor egy fedél üveg. A kenet szárítjuk, metanollal fixáltuk 5 percig, és megfestettük Giemsa (2 csepp per 1 ml desztillált vizet) a 25-30 percig, és alaposan szárítjuk.
Mikroszkópos vizsgálata kenetet nyálka vemhes kanca talált csillóhám sejtek nyálkát labdák és ritkán - a fehérvérsejtek. A nezherebyh kancák a hüvelyváladék figyelhető neutrofil leukociták és pikkelyes hámsejtek és különálló sejteket előforduló csillóhám.
Ami további bizonyítékot diagnózist csikók figyelni a klinikai tünetek, a megfigyelhető makroszkopikus vizsgálat hüvelyi üreget.
Hüvelyi nyálkahártya a 3 hetes terhesség hatálya alá tartozó állat egy vastag, nagyon viszkózus és zavaros nyálka, ami akadályozza a bevezetését és eltávolítását hüvelyi speculum. A kifejezés a terhesség hüvelyi nyálkahártya válik vérszegény, száraz és mentes a fényét. Méhnyaknyák lyuk szorosan lezárva, amely egy fajta sapka, ezáltal vaginális része a méhnyak néz unalmas. A 4-5 hetes terhesség a vaginális része a méhnyak általában eltér jobbra vagy balra.
Hormonális módszer. Alapján fiziológiájának tanulmányozására a hipofízis elülső lebenyének és petefészek válasz terhesség van kialakítva alapján egy nagyon korai megjelenése a vérben a vemhes kancák hormon LH a vizeletben a terhes kancák, tehenek és sertések - a hormon ösztron.
A vizsgálatok állati Prolan venni a nyaki vénából körülbelül 25 # 9235; 50 ml vért belőle megvédeni a szérum ami injektált kezelés nélkül a bőr alatt az egerek. Injekció mennyiségben 0,1-0,4 ml mintát folyékony végezzük 3 napon belül, 2-szer naponta infantilis (éretlen) nőstény egerekben. A súlya egy ilyen egér 6-8 g (3-4 év).
A vizsgálatok állati folliculin venni vizelet katéter útján, vagy a várakozás természetes vizelés. Vizelet előtt befecskendeztük egerekbe vetjük alá étert kezelés toxicitásának csökkentése céljából. Ebből a célból, hogy támogatja a vizelettel. Az így kapott felső réteg átlátszó keverékeket mennyiségben legfeljebb 10 ml. hozzá ecetsavat, hogy hozzon létre egy enyhén savas reakciót, és dietil-étert adunk azonos térfogatban. Ezt követően a vizeletet 5 percig rázzuk. A csövek tartalmát ülepedni hagytuk 10 percig; étert dekantáljuk, és a vizelet maradt nyitott edényben néhány órán át, hogy eltávolítsuk a maradék éterrel. Ezután a vizelet hígítottuk 3-szorosára desztillált vízzel, és ebben a formában injektálunk szubkután az egerekbe hat dózist 3 napon át. Detektálásához vizeletben ösztron adjuk be kasztrált nőstény egerekben és csecsemőkori.
A diagnózis a vizeletben vagy a vérben az egyes teszt állatnak adjuk be a terhesség 3-4 egerekben. A jelenlétében a nemi hormonok a vizsgálati folyadék ivarzás egerek után jelenik meg 72-100 órával megkezdése után injekciót. Kimutatására ivarzás, kezdve reggel a 3. napon az egerek egy tampont naponta kétszer kell bevenni a hüvelyi folyás. A kapott nyálka csinálni tárgylemezre egy csepp víz tampont, mely még ma is a mikroszkóp alatt.
Jelenlétében ivarzás egerekben egy kenetben észlelt csak szilárd tömeg sejtek elszarusodó hám atomfegyvermentes. Ebben az időszakban a többi egy kenetben észlelt nukleáris leukociták és epiteliális sejteket.
A reakció hő megerősítheti a nyitó kísérleti egerekbe, amelyekben érzékelni a növekedést a méh kipirulás. Válaszul a szükséges kiegészítő prolan ellenőrzések azt mutatják, az egyik kísérleti egér, és abban az esetben pozitív eredményt a petefészkek megnagyobbodása, a bennük való jelenléte érett tüszők, vörösvérsejtek pontok helyben behatolt graafovyh buborékok, és még lutea. Ezen kívül jól jelzett megnagyobbodás és bőrpír a nemi szervek.
Minimális mennyiség vagy hipofízis follikuláris hormon képes előidézni reakció ivarzás nőstény egerekben, rágcsáló hívott egység.
3 hónappal a születés előtt és a terhesség a terhesség alatt a meghatározás alapján előállított obnaruzhivaniya vemhes kanca vizelet számos hormon ösztron számozás a több tíz vagy akár több száz ezer egér egység per liter vizeletet. Azonban, folliculin hormon észlelt és nezherebyh és korai terhesség kancák, de az összeg a becslések csak néhány ezer egér egység per liter vizelet. Így a különbséget az összeget a hormon ösztron látható vemhes kancák.
Kenet mikroszkópos hüvelyi váladék. A nyálka vett a méhnyak (előnyösen a szájában) sűrű steril gyapot tamponnal csipesszel. Ezek tampont, hogy sima mozdulatokkal száraz sovány csúszda. Keneteket levegőn szárítjuk, metanollal fixáltuk 5 percig, Giemsa festékkel festjük festék (1 ml desztillált vízzel, 2 g tinta csepp) alatt 25-30 percig, alaposan leöblítjük a festék szárítjuk és mikroskopiruyut.
A kenetet nyálka vett vemhes kancák, amelyek jelentős számú csillós hámsejtek, iszap golyó kék, egyedülálló sejtek a laphám és néha kis mennyiségű fehér vérsejtek.
Keneteket nyálka gyűjtött kancák nezherebyh mutatnak nagyszámú fehérvérsejtek és pikkelyes hámsejtek, egyedülálló sejtek a csillóhám. Balls nyálka van. Nyálkát kenetben egy egyenletes réteget.
A biológiai vizsgálatot a vér és a vizelet. A terhesség alatt, a vérben és a vizeletben a kancák felhalmozódott elég sok gonadotropin (follikulus stimuláló hormon - FSH és a luteinizáló hormon - LH) és a gonadális (folliculin) hormonok, amelyek serkentik a funkcionális aktivitását a nemi szervek.
A vemhesség a biológiai vizsgálatok eredményei vér vagy vizelet vizsgálat azonosításán alapul mennyiségi tartalom ezen hormonok. Ez a módszer a magas diagnosztikus (95-100%), de ennek ellenére, amikor vizsgálatok tömeges csikók ritkán használják, mert az összetettsége és költsége annak végrehajtását.
Kimutatására a hormonok a vérben és a vizeletben a terhes kancák a következő módon: 1) Colla és Hart, 2) Friedman és Schneider, 3) és a Tsondeka Aschheim.
Erre a célra javasolt petefészek transzplantáció az elülső kamrába, a szem a kasztrált nyulak. Ha sikeres működése, a gyengülése a gyulladásos válasz, a szaruhártya átlátszóvá válik (az első napokban a posztoperatív időszak, zavarossá válik), és csepegtetni a petefészek nagyon egyszerű és könnyen követhető.
Beadása után a vizsgálandó szérum nyulak fülvénájába graft látható vérzés, három nap - a növekedés tüszők, és öt nap múlva - egyértelmű luteinizáció.
Reakció Tsondeka és Aschheim. ÖSSZEFOGLALÁS reakció - azonosítására ösztron a vizeletben a terhes il vér.
Ezek az adatok azt mutatják, a megvalósíthatósági follikuláris reakciót, előnyösen harmadik hónapja után a terhesség, és egy korábbi szakaszban - kutatás Prolan.
reakció technikával. Vizeletet átfolyatjuk a szűrőpapírt, ecetsavval megsavanyítjuk, amíg enyhén savas (lakmusz). Hogy mentes mérgező anyagok a vizelet hozzáadására egyenlő mennyiségű éter és alaposan összerázzuk. A dietil-étert dekantáljuk, és a vizelet állni hagyjuk nyitott a bepárlási maradékok étert (amíg még a halvány szaga marad). észter kezelés növelte aktivitását ösztron.
Laboratóriumi állatok petefészkét fehér egér (kasztráltak), idősebb két héttel a műtét után, és teszteltük a melegítés nélkül. Lehet használni infantilis nőstény egerek; mindegyikük a festék a szőr a feltételes helyét és három napig naponta kétszer, a bőr alá:
egy s t r t a m
1. klikk - 0,3 teljes vizelet
4. „- 0,1 vizelet hígított
1. klikk - 0,2 teljes vizelet
4. „- 0,1 vizelet hígított
Ha okunk van feltételezni, a terhesség későbbi időszakokban, amikor egy csomó ösztron vizeletben, beadhatjuk összes egér vizelet vízzel hígítjuk 2-3 alkalommal.
100 óra az első injekció után (előnyösen 70-80 th óra) a hüvelyváladék minden egyes egér naponta háromszor, termelnek stroke. Az az anyag, és a kenet készítmény használatát platina hurkok. Kalcinált egy szeszes fűzőlyuk desztillált vízbe merítjük, együtt bezárt víz cseppecske vezetünk be a hüvelybe. Ahhoz, hogy távolítsa el a nyálka hurok által végzett reszelés nyálkahártya könnyű mozgását. Ugyanebben hurok váladék kenet felületén a dia. Egy pohár okozhat 3-Well kenetet. Minden kenet viasz ceruzával jelölje meg a szám, amely jelzi az egér.
Kenet levegőn szárítottuk, fixáltuk alkohol és megfestjük Romanovsky vagy megtekintés mikroszkóp alatt anélkül, festés, egy elsötétített látómezőben. A jelenléte egy kenetet a nem nukleáris sejtek (skálák), jelezve a megjelenése ivarzás, tekinthető pozitív diagnózist. Kétséges esetekben, akkor nyissa meg az egér 1-2. A diagnózist az észlelési a méh, a megnövekedett hatása alatt ösztron.
Gyakorlatilag kimutatási kancák szérum-LH a vérben végezhetjük között 40-120 napos terhesség (egy fél másodiktól az ötödik hónapban).
Testobektom szolgálják infantilis egér (súlya 6-8 g) vagy patkányokat (tömegük 20-28 g).
Vénás mare, meg kell vizsgálni, figyelembe körülbelül 50 ml vért, és tegye hűvös helyen, hogy külön a szérumot. Az utóbbi subcutan három egereket vagy patkányokat dózisban (ml):
Csak csináld hat injekciót három napon át (két injekciót naponta).
4-5 nap elteltével az elején injekciót a kísérleti állatok napi 2-3 alkalommal előállítására kenetek hüvelyi váladék, és mikroszkóp alatt vizsgáltuk. Ha a kanca volt a csikó, majd hatása alatt LH jelen a vérben a csecsemőkori, egereken vagy patkányokon történik pubertás - a tüszők fejlődése. A érését tüszők kialakítva folliculin okoz ivarzás és kenet áll sejtmag nélküli sejtek (pehely). Ha a kép nem tiszta, 100 óra után az injekció helyét, az egereket megölték. A jelenlétében a kanca terhesség egerekben lehet megállapítani növekedése méhszarvakat és a petefészkek - érett tüszők, a corpus luteum vagy tüszőket tele vérrel.
Döntő változások a petefészkek és a méh, így megítélni a reakció néhány vagy az összes az egereket leöljük és felboncoljuk.
Friedman és Schneider reakciót. Object szolgálnak nyúl súlyú 900-1200 gramm, ez serdülő. A nőstények kell tartani izolált mind a férfiak, és még jobb, és a nőstények.
Tíz ml vért szérum vizsgálat kancák injektáljuk egy fül vénájába nyúl. 36-48 órával az injekció után a nyúl termelnek laparotomiát és ellenőrzés a petefészkek. Miután a szérum injekció helyén megrepedt tüszők vagy mutatnak tüsző, amely üreget megtöltjük vérben (ábra. 36).
Ábra. 36 nyúl petefészkek balra - a pozitív reakció, hogy a terhesség, hogy a megfelelő - egy negatív (az NA Flegmatovu).
Vizsgálata után a petefészkek a hasfal sebet összevarrjuk. 2-3 hét elteltével, ugyanazon nyúl lehet használni egy második alkalommal (esetenként egy állat nem tudja használni 5-6 alkalommal). Ha ismételt injekciókat kell venni annak lehetőségét, hogy az anafilaxia.
Az előnye ennek a reakció szolgáltatja lerövidítése élettartama 48 óra helyett 100 óra eljárásnak Colla és Hart.