1 Készítse elő a laboratóriumi edények és eszközök manipulációja embriók
Abstracts >> Növénytani és mezőgazdaságilag >> diagnózis és a megelőzés a mikrobiológiai szennyeződés való átültetésének módszerei embriók
A közeget kialakítva tenyésztésére a baktériumok agar öntjük 20-25 ml, és hagyjuk állni néhány percig, amíg megszilárdul az agar. Amikor szükséges, hogy növekszik a mikrobák agarezirovannoy közepes elkülönült telepek, a szélesztés után csészét helyezünk fejjel lefelé egy inkubátorba.
Mintavétel bakteriológiai kutatást végeztünk minden szakaszában embriók transzplantációra.
2.2.1 A laboratóriumi edények és eszközök manipulációja embriók
A laboratóriumi körülmények között, amely előkészítette a szerszámok, gépek, eszközök, termelő táptalajt, a szervátültetés és mélyhűtésénél embriók, nedves tisztítás végezzük naponta.
Minden berendezés dobozt, a falak, a padló legalább egyszer egy héten mosószerre és letöröljük fertőtlenítő oldatok. Fertőtlenítéséhez használt 2% -os oldatával klóramin „B”. Mielőtt a munka box és más laboratóriumi helyiségek besugárzott 40-60 percig ultraibolya sugarakkal az arány 2-3 W / m.
A boksz napos embriók végeztünk további feldolgozási táblák és eszközök 96 ° etanol.
Minden laboratóriumi dolgozó steril köpenyek és tartalék cipőt. Ruházat (köpenyek, sál, sapka, géz kötszer) mossuk legalább egyszer egy héten a kötelező forráspontú és vasalt vas. Cipő rendszeresen a használat után, és mosás dekontaminált 2% -os oldatot hypo.
Való munkavégzésre, embriók szerszámok, eszközök sterilizálják függően különböző módon az anyag, amelyből készült.
Üvegáruk (fiolák, lombikok, pipetták, hengerek és így tovább.), Valamint az eszközök az embrió transzfer pergamen papírral lezárjuk és autoklávban sterilizáljuk 1,5 atm. 30 percig. Majd szárítjuk 80 ° C-on 60 percig.
Fecskendő, tűk, fogó, olló, vaginális és a tükör rendszer mosására az embriókat sterilizáljuk 30 perces forralással.
Sterilizálás előtt új üvegáru mossuk csapvízzel szappannal vagy oldószerrel, ecsetekkel és álsügér, öblítettük, és elmerül sósavoldattal (1 evőkanál. Kanalat sósavval 3 liter desztillált vízben), és fennmaradni abban 24 órán át. Ezután az edényeket mostuk folyó vízben, majd többször tridistilled bi- és vízzel mossuk és szárítjuk.
Újrafelhasznált üvegáru mossuk forró 2-3% -os nátrium-hidrogén-karbonát, majd tschatelnoopolaskivali csapvíz, majd tridistilled két- és vízzel mossuk és szárítjuk.
Használt például a fém tárgyak a fenti mosott szóda oldattal, vízzel öblítjük, bi- és tridistilled vízzel mossuk és szárítjuk.
Eldobható eszközök polimer (. Ampullák, tasakok, pipettát stb) besugárzással sterilizáljuk boksz baktericid lámpák BUF # 8209; 30 vagy PRK # 8209; 2 20 percig. mindkét oldalról a parttól 20 cm-re a besugárzás forrással.
Gumi eszközök (katéter kimosódás) kezeljük 70 ° C-on finomított alkohol. A külső felületet sterilizáltuk besugárzásával lámpák BUF # 8209; 30, 20 percig. a parttól 20 cm-re a forrás ultraibolya sugarak, munka előtt öblítjük 2-3 alkalommal Dulbecco-féle tápoldatban.
4.2.2 előállítása donorok és a recipiensek
Előállítás donor kezdődött egy arénában tisztító és mosás a bőr és a végtagok. Ezután az állatot került át a műtőben, rögzített a gép, a végbélben megszabadult tartalmát. Ahhoz, hogy felszabadítsuk a végbél feszültség végzett epidurális egy 2% novocain oldat dózisban 5 ml. Az utasítás szerint szeméremtest és perenealnuyu területet alaposan mossuk szappannal és vízzel mossuk, egy szövet, fertőtlenített permet „Septoneks” vagy 70 ° th etanollal. A kísérletekben, a gyökér a farok, gát és a vulva alaposan mossuk szappannal és vízzel mossuk, szárítjuk egy vattacsomót. A bőr a külső nemi szervek és a reproduktív traktus (előtér, hüvely és vaginális része a méhnyak) volt öntözött oldattal Lugol. Erre a célra a farok hozott félre előre, megjavítani segítségével köteleket az első a gép partíciót. Fecskendeznek a hüvelybe speculum elő. A nyitott tükör szuperfundáljuk nyálkahártyát a genitáliák Lugol oldat. 15 perc múlva, miután utánállítást a genitális traktus extrakciót végeztünk embriók.
Előállítása címzettek számára embriótranszfer végeztük, valamint a donor előállítására nem sebészeti helyreállítását embriók. Hogy megakadályozzák a bevezetése a méhbe a címzett a mikroflóra végeztük csatornázás genitális traktus Lugol-oldattal 15 percig. előtt embrió transzfer.
Előállítása Lugol.
Lugol-oldat szerint állítjuk elő az alábbi recept:
Kristályos jód - 1,0 g
Kálium-jodid - 2,0 g
desztillált vizet - 300,0 ml.
2,0 g kálium-jodidot oldunk 100 ml vizet adunk hozzá, 1,0 g kristályos jódot és helyezzük 10-12 órán át inkubátorban, amíg a teljes oldódás jód. Így jódot feloldunk kálium-jodid. Az oldatot beleöntöttük egy nagy mérőlombikba és beállítjuk a teljes mennyiség 300,0 ml. Ezután leszűrjük, és tároljuk sötét üvegek. A használt oldat nem több, mint 30 nap.
4.2.3 kibontása és előkészítése embriók transzplantáció
Extraction végeztük embrionális napon 7-8 szexuális ciklus nem sebészi eljárással. A művelet megkezdése előtt a donor állítjuk elő pontjában leírt eljárás 1.2, ezután injektáljuk epidurális 5-7 ml 2% novocain függően az állatok testtömege. Nyugtalan 0,3-0,5 ml koncentrációjú adagokat adtunk Rompun. A rektális tapintással értékeltük az állam a genitális apparátus, a számításokat végezni tüsző és sárgatest. Mosni az embriók alkalmazott katéterek különböző minták. A mosófolyadék keresztül tápláltuk egy zárt rendszerben a gravitáció a tartályból, található, a felső állvány aljzatba a donor. Mosás méhszarv végeztük 8-10 alkalommal, bevezetésével 60-50 ml mosó tápközegben. Washout egy kürt töltött 450-500 ml módosított Dulbecco tápközegben, amelyet 1% inaktivált szérumot szarvasmarha.
A tudományos és ipari kísérletek utánállítást mosópufferrel média komplexet adunk gentamicin antibiotikum ampicillin koncentrációban 12 ug / ml és 100 U / ml, ill. Baktericid dózis fertőtlenítő készítményeket vizsgáltak mikroorganizmus törzsek, mint a monokultúrás vagy társítva, sorozatos hígítással. Ártalmatlanságát fertőtlenítő készítmények az embriókat úgy határoztuk meg, tenyésztésével szarvasmarha embriók tartalmazó közegben változó mennyiségű vizsgálandó gyógyszerek.
Hatékonyságát fertőtlenítőszerek eredményeit figyelembe átültetések embriók.
Öblítő támogatta 15-20 percig. 37 ° C-on egy inkubátorban. A felülúszót leszívtuk, a szifonon keresztül. Üledékes környezetben töltött steril Petri-csészékbe bélelt csík az alján. Keresés embriók sztereomikroszkóp alatt MBS-9.
Detektált embriókat átvisszük egy steril, mikrofecskendő egy kis Petri-csészébe 40 mm átmérőjű. A életképességét az embriók határoztuk meg a standard technikával morfológiai értékelése az embrió állapotban (V. Shea és mtsai., 1976), mert a kompakt méret, szimmetria, sűrűség. (Utasítások embriótranszfer szarvasmarha, 1987).