Microtomy
A tanulmány a kóros folyamatok a sejtek és szöveti szinten történik mikroszkópos vizsgálat. Szövettani módszere kutatásra van szükség, hogy tanulmányozza a szerkezete és funkciója a sejtek az állam norma, a patológia és a kísérleti időszakban. A szövettani veszik elemei szöveteket és szerveket. A vastagsága a vizsgálati minta nem lehet nagyobb, mint 1 cm3.
A szövetminták lehet venni a személy azonnal a halál után (minél hamarabb, annál jobb) - boncolást. Továbbá, az anyag lehet venni Működés közben vagy közvetlenül diagnosztikai célokra speciális szerszámot - biopszia.
Mintaelőkészítés
A minta előkészítése végeztük több szakaszban:
- Rögzítő anyagokat.
- Előállítása a vágás.
- A folyamat a festést a szelet.
A lényege a rögzítő anyag, hogy állítsa le a természetes folyamatokat a szövetekben és sejtekben. Ez azért szükséges, hogy letartóztassák a folyamat során a pusztulás és enzimatikus változások szöveti szerkezete.
A reteszelt szövetek miatt fiziko-kémiai folyamatok folynak véralvadási (koagulációs) fehérjék és lipoid komponenst. Ez az állapot lehetővé teszi, hogy a szövetek hosszú ideig érintetlen maradt, anélkül reakció különböző hatások. Egyszerűen fogalmazva, a rögzítés szövetek végzik, hogy mentse az élettartam szerkezet a biológiai anyag.
speciális folyadékok (reteszek) használják rögzítéséhez szövet. A legnépszerűbb zárak az alábbi lehetőségeket folyadékok:
A fenti egyszerű reteszeket. Szintén rögzítésére szövet használt kifinomultabb kiviteli alakjaiban bilincsek (oldatok):
- Alkohollal formalinos.
- Zenker folyadékot.
- Dvuhromovookisly kálium.
A lista csak bizonyos típusú klipek használt. A szükséges időtartam rögzítésére a szövetminta időszak változik több órától néhány napig. Az időtartam függ a jellemzői a minták és a kiválasztott típusú tartósítószer. Miután a rögzítési lépésre elvégzett szükséges ahhoz, hogy a mosási anyagot (több óra) az áramló vízben. Ezt annak érdekében, hogy a retesz származó mintákat a felesleges folyadékot, és egy üledékes szuszpenzió.
Zavaros, átlátszatlan minták nem alkalmasak a kutatás. Ezek anyagdarabok nem teszi lehetővé, hogy megszerezzék a szükséges információkat. Mielőtt az egyik fő szakaszai - a végrehajtás a szelet, a mintákat öblítjük tiszta vízzel több órán keresztül. Továbbá, az anyag megy keresztül egy víztelenítő eljárást. Dehidratálást végzik útján egy szövetminta révén emelkedő alkoholok várat. Ez a lépés hosszú. Minden alkohol anyagdarabok származik 2-3 órán át a nap.
ömlött a mintákat víztelenítés után végezzük. Ez a lépés szükséges, hogy lezárjuk a szövet és a minőségi blokkok a tanulmány. Tömítő végezzük fagyasztással (sürgős biopsziák) vagy öntéssel paraffint vagy celloidin. Kitöltése paraffin - meglehetősen hosszadalmas eljárás (24 óra vagy több). Ezek a minták tömítés kiviteli alak vizsgálatára felhasznált normál üzemmódban. A jobb megjelenítés egyes struktúráinak szöveti metszeteket festettük. A szövettani festési speciális festékek (savas, bázikus, speciális).
Az előkészített mintákat a vizsgálat egy speciális mikroszkóp alatt.
Mielőtt a tanulmány szövettani előkészítés is szükséges annak érdekében, hogy ez utóbbi teljes mértékben összhangban van számos kötelező követelmények:
- Az anyag élettartama szerkezetét meg kell őrizni.
- A vágott kell vékony és átlátszó.
- Struktúrákat kell alávetni a tanulmány egyértelműen látható megfestéséből.
- Előkészületek kell egy hosszú ideig eltartható.
A minőségi készítmény a hatóanyag való megfelelés érdekében valamennyi felsorolt követelményeknek egyszerűen. Azt azonban nem zárja ki annak lehetőségét, hogy a kis hibákat. Ha az ideje felismerni bizonyos eltérések, hogy hagyja abba a házasságot, hogy magas minőségű anyagból van lehetőség.
A leggyakoribb hibák előállítására vágásokat a következő lehetőségek közül:
- Az omladozó a vágás.
- Anyagveszteség a paraffin tömegének.
- Lehetetlensége anyagok vágása.
- A rés anyagot.
Ezek vagy más hibák előfordulhatnak különböző okokból. Néha alapján sérti a minőség, a minta olyan hibák a gyártás során. Hogy megszüntesse minden hiba előírja bizonyos intézkedéseket algoritmusok.
Módszerek szövettani
A mikroszkópos vizsgálata vékony szelet anyagból van szükség. A szélesség az ilyen darabok mérjük mikrométer. mikrotom - speciális eszközöket használnak a kényelem megszerzésére az ilyen szakaszok. Az építőiparban ez a készülék biztosítja a szakaszolását 5-10 mikrométer vastag.
A fő kutatási módszer szövettan a mikroszkópot. Segítségével mikrotommal lehet rendkívül vékony metszeteket alkalmas mikroszkópos vizsgálat. Előállítás cutoff miatt előfordul, hogy a mozgás a kés az egyik irányba. A szeletvastagság as lépésnél beállított felszedő emelőszerkezet.
A vágási anyag vagy paraffinba ágyazott celloidin használatra radiális, rotációs, vagy szán mikrotom.
speciális fagyasztó mikrotom lehet használni ahhoz, hogy egy szelet növényi vagy állati szövetek. A mikroszkópos vizsgálat segítségével több főzéssel szakaszok. Az egyes kiválasztott módszer bizonyos típusú mikrotom és néhány egyértelmű intézkedéseket algoritmusokat alkalmaznak.
Szövettani metszetek közül
Szakaszok lehet rögzített és nem rögzített anyag. Minden attól függ, hogy milyen jellegű a szövetek és a fő célja az említett tanulmány. Szintén szövettan, vannak más előállítási módszerekkel szakaszok.
Mikrotom és alkalmazásuk
Mint már említettük, a szövettani metszeteket készített egy speciális eszköz - mikrotomot. A megállapított megnevezést dekódoló eszköz célállomás - microsban (kicsi), kötet (boncolás). Az egyik leggyakrabban használt nevezhető szánkó mikrotomot.
Az eszköz neve származik az elvet a mechanizmus, amelynek alapja a pályán a kés egy klip speciális szán. Szánkó mikrotomot vágási paraffin. Tipikusan ilyen eszköz együttműködik eldobható pengét vagy patronokat. Az ilyen pontosság mikrotomot áll egy keret, a mikro mechanizmus az emelőszerkezet bilincsek blokkok késgerendely.
Egy ilyen berendezés lehetővé teszi, hogy készítsen szelet vastagsága 0,5-60 mikrométer. Szánkópálya mikrotom különböző szelet vastagságát beállító pontossággal. takarmány függvény lehet kézi vagy gépi. Ezt a készüléket úgy tervezték, hogy a rutin a kutatás területén az orvostudomány, a botanika és a biológia.
Rotációs mikrotom - a készülék egy rögzített pengével, és egy mozgatható asztalra. A készülék rendelkezik egy motoros mintafeed. Ez mikrotomokat való használatra tervezték szövettani laboratóriumban célzó kutatások problémák megoldására szövettani és kórszövettani.
Mert szakaszok fixált szövetek vagy azokban az esetekben, amikor sürgős szükség, hogy végezzen kutatást fagyasztó mikrotom segítségével. Az ilyen eszközök vannak ellátva fagyasztás táblázatot, amelyre a mintát rögzített. A fő szabály a sikeres átvételét a szövettani metszetek segítségével mikrotomokat választott a szög a penge szakasz és a szög. A legjobb szög, amelyben a penge párhuzamos a felső sík a blokk.
Ha úgy dönt, a dőlésszög nagyobb, mint szükséges, a kockázat, hogy a levágott leomlanak. A kisebb hajlásszöge a penge csúszik mentén az anyag felületén. Előállítása A kívánt eredmény ebben a helyzetben a penge nem lehetséges. A keresztmetszet a szög függ a az anyag természetéből. Minél lágyabb a minta, annál kisebb az ék szöge. A kezelés lágy blokkok tartják jó ez ferde elrendezés a penge.
Vágás mikrotomon
A készítmény a szakaszok viaszos tárgyak vagy kezelt minták celloidin ismét gyakran használják rotációs mikrotómmal.
Először is, a blokk vetjük alá vágás. Erre azért van szükség, hogy megszüntesse a szabad paraffint vagy egyéb tömítő. Ha ez az eljárás nem termel, és a vágás is kiderülhet, egyenetlen, ráncos, és ennek következtében nem informatív. Továbbá, ráncosodás el lehet kerülni a hűtés a anyag.
Továbbá, paraffin blokk szilárdan rögzítve a bilincs. Először meg kell igazítani a megfelelő szögben a kés helyét, és válassza ki a kívánt vágási szöget. Ezután meg kell állítani segítségével a feeder, telepítse a készüléket úgy, hogy a felület a penge a parttól 0,5-1 mm.
A telepítés után a szerelvény végezzük mikrometrikus skálán megszerzésének első vastag szeletekre. Ezt követően, a szimulációs berendezés (csonkolás feleslegben paraffin Legend téglalap alakú). A végső lépés az, hogy skála mutató mikrométer vastagságú fogant és végrehajtása a végső vágási anyag.