A készítmény szövettani metszetek - a gyakorlatban hisztológus
speciális metszőgép kések előállításához felhasznált szövettani metszeteket. eltérő alakú, hossza és a szög a lapát keresztmetszetének. A formában vannak nehéz acél ék, amely további vágóéi élesítés ék. Penge hossza lehet 8-50 cm.
Szerint a konfiguráció a penge van három csoport mikrotom Knife: A, B és C. A mikrotom kések csoportjába tartozó A, az egyik felület sima és a másik konkáv (más néven síkhomorú egy nagy görbületi homorú felület). Ezek a kések gyakran készülnek egy lágy vagy viszonylag puha acél és vágására tárgyak, úszva celloidin.
Kés vonatkozó B csoport az úgynevezett sík homorú. de a görbület a konkáv felület ezek sokkal kisebb. mint a csoportban A. Ezek a kések anyaga kemény acélból, ezek alkalmazása a készítmény tselloidinovyh és celloidin-paraffin metszeteket.
A kések csoportjába tartozó C mindkét felületén a lapos penge. Anyaguk kemény acél és használják vágás tárgyak, paraffinba ágyazott, és vágási fagyasztó mikrotommal.
Ezen túlmenően, az előállítására félvékony szakaszok és paraffin egy mikrotom és ultratome használja fém mágneses pengét és üveg kések. Fémes mágneses penge (eldobható pengét) lehetővé teszi megszerzésének szeletek 50-60 parafintömböket, majd a penge változást.
KÖSZÖRÜLÉS metszőgép pengék
Get kvalitatív szövettani metszetek tselloidinovoy, celloidin-paraffint és paraffin töltőanyag segítségével a mikrotom késsel, amelynek penge vastagsága kell lennie 3-5 mikron. A munka fagyasztó mikrotommal kell egy éles késsel nélkül beceneveket a pengét. Kés élezés azonnal ki kell szerkeszteni, és mielőtt minden éles tárgyakat.
Metszőgép kések élezett segítségével speciális eszközök, mint például a «Sakura» (Japán). Mostanáig azonban nem vesztette relevanciáját és használják sok laboratóriumban kézi élezés a kés. Kézi Mikrotómmal kések éles a kő alakú sáv. Percek sárga, úgynevezett belga élező kő használják az első, majd tovább élező kő fehér (AR), amely finomabb részletesség. Lehetőség van használni természetes pala kő, amely szintén egy finomszemcsés és durva szemcsés felületet.
Őrlés előtt kő a felületen alkalmazott motorolaj vagy kerozin, a glicerin, a hígított alkohol 70% (1: 1) szappanos vízzel. A hátoldalon a penge kopás speciális obushok (előnyösen folyamatosan használt élező ugyanazon kést - ez határozza meg a élezési szög), és a rúd vagy a nyílás a végén a kés fogantyú csavarozva. Azután, hogy a kés tompa egy szikla, amelyen a csúszda és a penge a gravitáció. A kés hajtjuk a kő egyik végétől a másik, majd elfordítja obushok, végzi a mozgást az ellenkező irányba.
Az az eljárás időtartama függ a képesség és állapotától laboratóriumi kés éle. Átlagban akkor 30 perc és 1 óra. Rendszeresen ellenőrizze a minőséget élező késsel óvatosan szóló mikroszkóptárgyasztalon és mozog úgy, hogy az élvonalbeli áthalad a látómező kis nagyítás. Aztán egy széles késsel szabály öv feszített egy fa blokk. Szerkesztése végeztünk ugyanúgy, mint a csiszolás (a obushok).
Mikrotom JELLEMZŐK ÉS nekik dolgozni
Metszőgépek - olyan készülékek, amelyek termelnek szövet szeletben, áztatott különböző környezetekben, valamint a fagyasztott és a nem rögzített. Mikrotom teszik lehetővé olyan szövettani metszetek különböző vastagságú. A működési elve a különbséget szánkó, forgó, fagyasztó mikrotommal. és takzhekriostaty és vibratome.
Szán mikrotom jellemezve vízszintes mozgását és függőleges emelő kés blokoderzhatelya. Ők sikeresen használják vágás tárgyak, úszva celloidin, celloidin-paraffint és paraffin. A fő részei a mikrotom található speciális csúszótalpakkal, innen a név. A működési elve szánkó mikrotom, hogy közben a visszatérő lökete a kést szúrt dia toló rudat a skála áramlását szabályozó, ami a mozgás. Mozgása a rúd továbbítjuk a rúd, amely a „kutya” fordul a racsnis. Forgatás a racsnis mikrocsavarokkal továbbított, amelyen keresztül a lakatanya a dia felfelé mozog egységet. Minden egyes szelet egység magasabbra emelkedik egy megfelelő távolságra a szeletvastagság. Miután blokoderzhatel csúcsosodik segítségével osztott anyákat, hogy csökkentse a csúszómechanizmusban a legalacsonyabb helyzetbe. Vannak más fajok szánkó mikrotom különböző változatai szállítási módszerek, bilincsek kések, stb
Rotary mikrotom tervezték vágására parafintömböket, ezek segítségével juthatnak metszeteken. A legfontosabb része a rotációs mikrotom - a mikro mechanizmus, amely tartalmaz egy kilincsművet, a differenciálmű, mikrocsavarokkal, végtag, homlokkerekes hajtómű és a bütykös. A meghajtó mechanizmus, amikor a tengely forog, a „kutyák” forog, előre meghatározott számú kilincskerékfogakkal, amelynél hajtómű tengelye áthalad a fogaskerék forgása mikrocsavarokkal. A csiga mozog a kocsi takarmány obektoderzhatelya. Szeletvastagság beállítása forgatásával.
Obektoderzhatel rotációs mikrotómmal - csavaros terminál szerelt egy gömb alakú keretben etetés kocsi. A csuklós mechanizmus lehetővé teszi a készülék, hogy nyújtson bármilyen szögben. Obektoderzhatel rögzített bilincs speciális fogantyúval.
Tartó a kést - egy hatalmas állvány két oszlopot, melyek szerelt egy mozgó hordozó szerelésre a penge a kívánt szögbe. A rögzítő csavarok kés készült. A anteroposzterior irányt a kés mozog egy speciális útmutatót egy csavarral. Fokozatosan közelít a kést, hogy a tárgy és egyidejűleg forgassa el a takarmány kerék, a vágási terület levágjuk, majd rögzíteni a kést.
Rotary mikrotom egy speciális szállítószalag, amely a szalag a penge hiányzik (egy sor) szelet. Arányuk szalag boncoló tűk és készítsen további manipuláció. Távolítsuk el a szakaszok a kés rotációs mikrotom lehet ecsettel vagy egy boncoló tűt.
Fagyasztó mikrotom használják, hogy csökkentsék nem töltött, de rögzített tárgyak, anyagot töltjük a zselatin és a vízoldható műanyag. Különösen általánosan használt fagyasztó mikrotom gyártásához készítmények a tananyag sürgős biopsziák. A design, fagyasztó mikrotom vannak Mikrotom szánkó típusú, de az eszköz olyan különleges jellemzőkkel rendelkezik. A keret rögzítő rögzítőszerkezete az asztalra. Késkészlet a kívánt szögben a mozgatható fogantyú segítségével egy vagy két bilincsek. Automatikus adagolás végrehajtjuk minden söpörni a késsel fogantyú
egy emelő rendszer. Fagyasztás asztal olyan eszközzel ellátott ellátására szén-dioxid vagy hűtött termoelektromosan félvezető elemeket.
Cryostats, vibratome. A fejlesztés a enzimhisztokémiai és immunomorphology volt szükség a kezelés nem rögzített anyag, amely végre a segítségével speciális eszközök - a fagyasztóból. Később, a kriokity és vibratome.
Cryostat - egy speciális fagyasztó beállítani mikrotomot, amelyben nyílások vannak a kezében, fénycső és kémlelőüveggel. Megbízható szigetelés tartja a hőmérsékletet a fagyasztóból -5 és -25 ° C-negatív pillanatok, amikor a kriosztatikus jelentős túlhűtés kezében az üzemeltető, a rossz világítás a munkaterület és a képtelenség, hogy összpontosítson a tárgy képest a kés alá. Ezeket a hátrányokat gyakorlatilag megszűnt vkriokitah külföldi termelés, a menedzsment, amely kívül készült a fagyasztóba. Ezek külön-külön beállítani a hőmérsékletet, a tárgy és a kést. Miután 3-5 percig váltás után érjük el alacsony hőmérsékleten, a hűtést a esetleg akár -65 ° C, ami megakadályozza, hogy a kristályok képződését szövetekben.
Ápolás és Mikrotom Mikrotomkés késeket. Minden mikrotom csúszófelületek tisztának kell lennie, és kenést egy vékony réteg a gép olaj vagy vazelin. Folyamatos üzemmódban, a mikrotom minden csúszófelületek szükséges hetente egyszer, hogy törölje ruhával benzol vagy toluol, és a zsírt. Miután a munkát a gépváz és mikrotomon obektoderzhatel tisztított paraffin maradék korábban eltávolítjuk a mikrotomot kést, és eltávolítja az ügyben. Metszőgép kések soha nem hagyja el a mikrotomkés vagy az asztalon! Fagyasztás mikrotom és cryostats 30 percig kikapcsolása után szárazra töröljük és a csavaros takarmány kent vazelinolajat.
Vágó parafintömböket Sannomiya metszőgép
A paraffin blokkba elhelyezni egy fából készült blokk vagy anélkül (nagy viasz réteg), be van szorítva obektoderzhatel. Beállítása a kívánt hajlásszöge a kés (optimum 13-15 °) sűrűségétől függően a szövet, a kés lassan vezetik az egységbe, hogy állítsa be a érintkezési magasság a késsel. Első illesztett a tömb felületén, amelyben egy mikrometrikus skála egy vastag (20-25 mikron) szakaszok, és úgy alakítjuk át skálán használt -8 mikron és elkezd vágás anyag. Jellemzően, egy kés van elrendezve merőlegesen, de az is kapjunk szakaszok (különösen a sűrűbb tárgyak) kés, amely fel van szerelve olyan szögben, hogy a keret a mikrotom.
A szeleteket ezután óvatosan eltávolítjuk a blokk egy száraz vagy megnedvesített ecsetet alkoholt alkalmazunk egy hajlított boncolótűvel vagy szikével. A metszeteket általában átvisszük egy doboz, amelynek alsó bélelt fekete papírra, és elhelyezni matt oldalával felfelé. Miután a kívánt számú szeleteket mellé, vagy blokk címke számát. Az előnyös eljárás azonnal blokkolja 20-30, majd folytassa a szerelhető szeleteket üveglemezekre.
Gyakran szakaszok ragasztott üveg csúszik közvetlenül egy késsel. Ehhez azokat átszállítják egy lombikba meleg (35-40 ° C) desztillált vagy forralt vízzel, majd fogott a diákat, amelyeket előzőleg zsírtalanított és átmosni fehérje glicerin. A metszeteket ragasztott tárgylemezre fényes oldalával a kést. Kis ráncok a vágás is terjed finoman megérintette őket szögben hajlított boncoló tűt.
Lehetőség van, hogy egyenesbe szakaszok közvetlenül az üveg egy speciális szerkezettel egyengetése és szárítás paraffin szakaszok. Ehhez a bevont csúsztatható üveg pipettával egy csepp víz, és ez csökkentette a vágás. Üveg egy vágás elhelyezett fűtött asztalra egység, ahol a vágás fokozatosan kiegyenesedett. Eltávolítása után a felesleges vizet pipettával vagy üveg szűrőpapíron szárítjuk, és vágja egyidejűleg szelet szorosan rögzítve tárgylemezre. A fűtött táblázatban eszköz 45 egyidejűleg behelyezhető csúszik annak használata nem igényel további szárítás szemüveg szeleteket egy kemencében. Vannak speciális importált fürdő egyengetése szeletekre, és átadják a pohár. Ezek folyamatosan fenntartott optimális víz hőmérséklete 38 ° C-on
Szárítási időtartam szakaszok termosztátban 37 ° C-on 6-12 órán át. Abban az esetben, sürgős szükség színező szakaszok hozhatók 10-15 percig egy termosztáttal 56 ° C-előtt olvadáspontú viasz, és ezáltal jobb rögzítéséről szeletet a tárgylemezen. Azonban számos viaszmentesítésévei nehéz: használatát igényli, további adag xilol és időtartamának növelésére a viaszmentesítő.
Van egy száraz ragasztási eljárás szakaszai, az üveg, amely csak megfelelő minőségű darabok. Üveglapkán bekent egy vékony réteg fehérje glicerin és helyezzük vágott, óvatosan simítsa ki boncolótűvel vagy egy szikét, és óvatosan melegítjük, szellemétől vagy egy fűtött asztalra.
Referenciapélda TSELLOIDINOVYH szelet
Hogy előkészítse a szelet használt tselloidinovyh kések A típusú és B Tselloidinovye blokkok rögzített azonos módon mint a paraffin. A telepítés után a mikrotomot kés kitolja hozzá obektoderzhatel dúsítjuk egységet biztosít. Blokkolása, hogy összehangolja a felületre, amíg teljesen szövet darab van kitéve, majd folytassa a készítmény a szeletek a kívánt vastagságú. A vágókés és egy tárgy bőségesen nedvesített 70% vagy 80% alkoholt, egy kefe segítségével. Kés a szán mikrotomon vezet simán, nyomás nélkül. Az így kapott vágott kiegyenesedett a kést kefével, majd egy késsel eltávolítottuk vágja a pad a mutatóujját ültetett kés alá. A metszeteket egy lombikba helyezünk 70% -os alkohollal.
előállítás diák
A lemezeket használunk szövettani készítmények először podgotovit.Isklyuchenie fel használatra kész, és speciálisan csomagolt importált diák.
A lemezeket mossuk meleg, szappanos vízzel, vagy forralt 2,3% nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd forró vízzel öblítjük és mossuk néhány órán át folyóvízben. Mosott üveg letöröltük egy tiszta, pamut ronggyal több napig, és helyezzük egy keveréket Nikiforov 96% alkoholt, és éterrel (1: 1). Zsírmentes üveg eltávolítjuk csipesszel a keverékből, megtörölte egy tiszta ruhával, és helyezzük egy doboz.
Zsírtalanító tárgylemezeket is használják krómsav elegyet, amelyet álló 100 g kálium-bikromát, tömény kénsav és 1000 ml forró vízben. Kálium-dikromát először forró vízben oldjuk, majd az oldatot lehűtjük, és ezt követően üvegbot óvatosan hozzácsepegtetünk kénsavat. Üveg krómsav keveréket 2-3 napig inkubáljuk, és azután alaposan mossuk folyó víz 1-2 napig.
A tárgylemezeket is jól zsírtalanítjuk erős sósavoldattal. Néhány nap múlva voltak mossuk folyó vízzel, és szárítjuk.
Minőségi zsírtalanító ellenőrizheti a víz csöpögött egy pipetta tárgylemez: pohár sovány víz terjed egy vékony réteg, és nem fog csökkenni.
A jobb rögzítés szakaszok annak üveg előkent fehérje keveréket glicerin. A friss tojásfehérjét egy felvert, és átszűrjük egy durva szűrő, nedvesített desztillált vízzel, majd az elegyet azonos térfogatú glicerint adtunk hozzá, és néhány kristály timol. A elegyet néhány hónapig. Használt, mint a keverékben, amely 15 ml vér szérum, 5 ml desztillált vizet és 6 ml 5% -os formalin. Szűrés után az elegyet felhasználásra kész tárgylemezekre. Ennek használata jobb eredményt ad, mint a használata tojásfehérje háttér nem képződik színezés.
A rögzítő módszert szeletet a dia dörzsölés nélkül ez utóbbi fehérje glicerinnel. A kád meleg desztillált vízzel csepegő néhány csepp folyékony kazein ragasztó és keverjük. A zavaros folyadékot kapott lesüllyed szakaszok, kiegyenesíteni boncolótűvel és fogott egy tiszta zsírtalanított üveg. Ezzel a módszerrel jó hatása, és következetesen körül a vágási nem színes háttérrel, ahogy ez gyakran előfordul az alkalmazása során a fehérje.