Darkfield mikroszkópia - studopediya
A laboratóriumi munka mikrobiológia
gyógyszerészeti és az egyetemi hallgatók
Szerkesztette Orvos Orvosi Tudományok, egyetemi tanár, akadémikus, az ukrán Antonov I.L.Dikogo
SECTION „morfológiája mikroorganizmusok”
Tárgy: típusok mikroszkópia: célja és alapelvei alkalmazás
Cél: hogy megismertesse az elvek és módszerek tanulmányozása mikroorganizmusok morfológiája.
Mikroorganizmusok látható, ha egy optikai-bór - mikroszkóp. Mikroszkóp (a görög microsban -. Kis- és scopeo - karóra) használnak, hogy tanulmányozza a kis tárgyak, a láthatatlan-Mykh szabad szemmel. A mikrobiológia mikroszkóp tanulmányozására használnak élő és halott mikrobák, vagy színes formában. A mikrobiológiai gyakorlat, attól függően, hogy a célja a kutatási célok, különféle típusú mikroszkópok: svetopolnuyu fáziskontraszt, anoptralnuyu, foszforeszkáló, pl.
Kérdések az önálló
1. típusai Mikroszkópia: svetopolnaya, sötét látóterű, fáziskontraszt, anoptralnaya, lumineszcencia-százalékos, e.
2. A készülék svetopolnogo mikroszkóp és szabályai velük dolgozni. Növekvő merülő rendszer.
2. N.P.Elinov, N.A.Zaikina, I.P.Sokolova. Kezelési útmutató dstvo a laboratóriumi munka a mikrobiológia. - M. Medicine, 1988. - S. 9-35.
A készülék svetopolnogo mikroszkóp iporyadok kezelése
Szokásos svetopolnaya (vagy könnyű) mikroszkópiát használni, hogy tanulmányozza mikroszkopikus festett készítmények, amelyek gyorsan elnyelni a fényt.
Ábra. Az 1. ábrán svetopolny biológiai mikroszkóp. A mechanikai rész tartalmaz egy bázist (vagy állvány) micromechanisms dobozok, tárgy asztal, csövek és tartó, binokuláris, lencse torony.
Az állvány különbséget alsó rész (vagy láb) és egy felső része (vagy oszlop). Ahhoz, hogy az oszlop, amely arra szolgál, mint a fogantyú hordozó mikroszkóp mellékelten mozgatható színpadi, Koto-nek az objektum vizsgált helyezzük. Van egy központosító és csavarokkal mozgatja a kábítószer-két egymásra merőleges irányban. Visszaszámlálás elmozdulás mindkét irányban el lehet végezni nóniuszos skálák és legfeljebb 0,1 mm.
A tetején az oszlop csatlakozik mikroszkóp cső - cső. A cső egy mobil készülék, amely csatlakozik a lencse, szolgálja, hogy növelje a vizsgálat tárgya. A csövet hajtott fel és le a két csavart rendszer: makrovintom és mikrocsavarokkal finom fókuszáló.
Durva irányzék szolgál rackwheel vagy szekrénybe, a mozgás és vezetéktermékek makrometricheskim csavart. A csavart használni, ha kis nagyítású, valamint a nagy nagyítású durva első telepítés. Mozgatásakor a-gyöngy makrovinta belül lehetséges 50 mm.
A pontosabb beállítás szolgál mikrométercsavarral. A jobb kar finom fókusz rögzített dob skálán oszlik 50 rész. Ár osztás skála dob 0002 mm. Egy fordulata dob megfelel az elmozdulás a cső 0,1 mm-rel. A teljes összeg a mozgása a gyöngy-zár zár egyenlő 2,2-2,4 mm. Mikrométercsavarral egyik legsérülékenyebb része a mikroszkóp és kezelése különös gondosságot igényel.
A mozgó-gyöngyöket két csavar segítségével, hogy úgy állítjuk be, hogy megkapjuk a legtisztább képet a mikroszkopikus; Ez úgy érhető el, ha a távolság a tárgy a lencse megegyezik a gyújtótávolság a lencse.
A felső rész tubusoderzhatelya fejvégek szolgáló rögzítő és revolvercső. A cső tetején található szemlencse, és az alján a vezetékes revolver, amelyben a foglalat csavarozással-lencsék. A revolver körül forog a tengelye körül, amely lehetővé teszi, hogy az egyik vagy a másik lencse kívánt esetben luchit kisebb vagy nagyobb növekedést.
Az optikai rész egy mikroszkóp lencséje, és a szem lyara-világítóberendezés.
A világítóberendezés alatt a minta szakaszában, és egy tükör és egy hűtővel ellátott membrán. A tükör arra szolgál, hogy a fénysugarakat felé tárgyak-tivu és azokon keresztül a mikroszkópot. Az egyik oldalon lapos tükör, a másik konkáv. Sík tükör használt nappali szórt fény, és konkáv - mesterséges os fényviszonyok mellett is.
A kondenzátor lencse alakú optikai elhelyezni, hogy az alján a színpad úgy, hogy a kondenzor lencse alatt található a nyitás a szakaszban. A kondenzátor szolgál, hogy összegyűjtse (kondenzáció) a gerenda a fénysugarak, melyek a legnagyobb lefedettség a vizsgálat tárgya.
Ha a mikroszkóp kondenzátor napfénnyel adott esetben megy, hogy emeljék a színpad; amikor artific Venn-fény kondenzátor csökkentjük, ameddig a ma-törmelék növekvő fényforrás kép nem jelenik meg a kábítószer-síkon. Amikor mikroszkópia festetlen készítmények kondenzátor is el kell hagyni.
Között a tükör és a kondenzátor membrán van elhelyezve, koto-paradicsom mennyiségét szabályozza sugarak incidens a lencse. Ez áll acélból szirmok és egy kar megváltoztathatja az átmérője. Festett-WIDE gyógyszereket kell tekinteni egy nyitott rés; A tanulmány nem festett készítmények kell nyitni a nyílást.
A lencsék bikonvex lencserendszer van zárva egy fém op-Rav. Anterior (elülső) az objektív a fő termelő nagyítással. Mögötte lencsék korrekciójára KÉP-set, és az úgynevezett korrekciós.
A emelkedés mértéke függ az objektum vizsgált Cree-görbület lencse használt objektívtől. Minél kisebb a görbülete a lencse, annál kisebb a növekedés, és fordítva, minél nagyobb a görbülete a lencse, annál nagyobb a nagyítás. Általában mikroszkóp tivy-helyek számszerű megjelölése hossza fókusztávolsága függ a görbület a lencse: minél több domború felülete a lencse, annál kisebb a fókusztávolság és minél nagyobb a kapott beállított növekedése.
A lencse jellemző áll saját növekedését, gyújtótávolság, numerikus apertúra. Minél kisebb a gyújtótávolság, annál erősebb a lencse, mint a saját nyereség. Gravírozva Az objektív a saját növekedését (8, '20, '40, '90) és a numerikus apertúra. Numerikus apertúra - a termék hosszú törésmutatója a közeg által sine a szög a lyuk fele - lencse leírja az a szög, amely még WMO-dit a lencse ferde útját. Emellett ezek a megnevezések apokromatikus lencsetárolórész tönkölybúza „apohr” és a merülő-onnyh „RI” vagy „MI” - immerziós objektívvel (olaj) vagy a „VI” - vízbe merülés Nye.
Objektív kétféle rendszer: achromats apo. Akromatikus egyszerűbbek, de számos hátránya, hogy a címzett a bonyolultabb apokromatikusan objektívek. Alkalmazásakor Apochromat lencsék elért teljes jar-ség képre, és kiküszöböli a kromatikus aberrációt. Ez utóbbi különösen fontos a mikroszkópos színes tárgyakat. Minden lencse (achromats és az apo) vannak osztva a száraz és im mersionnye. Ha a lencse és tartják prep-térfogat levegő, az ilyen lencséket úgy nevezett száraz. Ha a lencse merítjük a folyadék, amely kitölti a teret a lencse és az előtt a készítmény, az ilyen lencséket úgy hívják elsüllyedt vagy merítés (immersio - dip). A vizsgálat-SRI merítés mikrobák kizárólag vagy gruzhnaya lencserendszer.
Bemerítés lencsék előnyt száraz. Összehasonlító útját fénysugarak a száraz és bemerítéses rendszerek ábrán mutatjuk be. 2. Ha mikroszkóppal száraz rendszer fénysugarak go-nek a tükörből a lencsén halad át az inhomogén közegben, különböző fénytörési. Ily módon a levegő (törésmutató 1,0), a fénysugár sugarak belép az üveg (törésmutató 1,5), majd ismét a levegőben, és végül az első lencse. Mindegyik ilyen átmenetek része a sugarak megtörik az interfész a különböző folyadékok annyira deformálódik, hogy az oldalsó és nem ad pop-lencse. Ennek eredményeként, a látómező világít nedos-tatochno, ami különösen fontos, ha egy erős nagyító rendszerek Mami, ahol egy nagyon kis frontlencse. Ennek elkerülése érdekében, a lencsét egy folyadékba mártjuk csepp (immerziós olaj, víz), törésmutatója közel, hogy a hosszú-ence fénytörési üveg. A második csepp az azonos folyadék-viselni a kondenzátor. Így, a kondenzátor, a folyékony pre-Paratov folyékony lencse és képviselnek egyetlen ASIC tárgyát anélkül, hogy eltérés a fénysugár.
Szemlencse (a latin szó oculus - szem) két sík-domború lencse (pick-forrást és a szem). Ez növeli a kép kapott keresztül a lencse, a 7, 10 vagy 15-szer. Az ilyen egyszerű szemlencsék jellemzően használt akromatikus lencsék. Amikor dolgozik apo kell használni egy speciális, úgynevezett kompenzációs okulárok. Ők választják oly lencse Obra zoom, adnak a kromatikus hiba fordított maradék színváltozás apo és mivel ellensúlyozza. Meg kell jegyezni, hogy csak növeli a tárgy objektív szemlencse is növeli nem vizsgálták a témát, de csak a kép mód feszültség kapott a lencse.
A teljes nagyítás a mikroszkóp egyenlő a termék a növekedés a lencse, hogy növelje a szemlencse. Például, a kombináció a immerziós objektív 90 egy szemlencse 10 ad a növekedés az objektum 900-szor.
A minőség a mikroszkóp nem csak attól függ a növekedés IC követett tárgy, hanem határozza meg a felbontás. Az utóbbi úgy kell érteni, hogy a legrövidebb távolság nekem előre két pontot a gyógyszer, amely lehet a kép-chetlivo megkülönböztetni a mikroszkóp alatt. Minél kisebb a távolság-set, annál nagyobb a felbontás.
A felbontóképessége az immerziós mikroszkóp biológiai-sósav rendszer 0,2 mikron. Ezért, amikor az egy-Kim mikroszkóppal tárgyak látómezejébe nem kevesebb, mint 0,2 mikron.
Nem szabad elfelejteni, hogy az immerziós objektív igényel különösen gondos kezelést. Hagyja ezt a lencsét szükség darazsak CAU TI ne törje össze az üveget a gyógyszer, amely maga után vonja kár, hogy az első lencse. Merüljön merülő helyek-TIV egy csepp olajat a dián legyen ellenőrzése alatt a szemek figyelik az oldalon, a szemmel kell szintjén a színpadon. Miután merítik a lencsét a ka-plu olaj, nézegette a szemlencse segítségével makrometricheskogo csavarok óvatosan alsó cső mikroszkóp, amíg Ön egy látómezőben a kontúrok a kábítószert. Majd egy mikro-metrikus csavar aktuálissá tárgy képét.
Végén mikroszkópos emelő cső mikro-halászsas, majd távolítsa el a drogot; egy elülső lencse óvatosan letöröljük puha ruhával, néha nedvesítő ezt alkohollal, referencia idő-víz 1: 1.
Lighting. Amikor dolgozik Abbe kondenzor függetlenül a fényforrás elegendő a pol-Hívjon sík tükör.
A világítóberendezés (vagy világítóberendezések Abbe) képeznek egy tükör, az írisz-diafragma és a kondenzátor. Zer kalóriatartalmú, mert a keret van szerelve az SPE-ügyi villát lehet forgatni két egymásra merőleges irányban-CIÓ. Az egyik fényvisszaverő felülete tükör sík, a másik konkáv.
Modern íriszblende vágással tanuló típus, állítható a nagysága a fénysugár belépő kondenzátor-e. Ez azért fontos, mert a nyílás arány (rekesz) a kondenzátor mindig meg kell valamivel kisebb, mint a tárgyak-tive.
A kondenzátor egy lencserendszer, szerelt egy kúpos-TION fém keret. Minél nagyobb a lencse, annál nagyobb a blende a kondenzátor. Elkülönült i-leképezés során a drog volt a hangsúly con densora. Erre a célra a kondenzátor mozdul el függőleges irányban legfeljebb 20 mm.
Rays mozogni. A visszavert fénynyaláb által a tükör, a dia-Phragmen belép a kondenzátorba. Megtört az ő lencsék, a sugarak esnek a kábítószer formájában kúp, amelynek csúcspontja Obra-Schena a gyógyszer. Miután áthaladt a gyógyszer sugarait újra-FLOW dyatsya formájában kúp és esik a lencsét. Megtört a lencse, a kimeneti sugárzás belőle ad okot, de a fordított képet. Ez a kép van kialakítva gerendák olyan távolságban hátsó a tárgylencse, a nyíláson át a szemlencse, t. E. A végső szemészeti lencse sík. Szemészeti sugarak bejutnak a szem, és az ő állítólagos retina történik, továbbfejlesztett, fordított képet. Így az időben, a lencse növeli a vizsgált témával, és a szem LNR-zoom. Következésképpen, a képesség, a mikro-ROSCOP, hogy növelje a nagyítás mértékét, amelyet a lencse és a szemlencse. A legtöbb lencse biztosítja a legjobb képcső, amelynek teljes hossza 160 mm, és a szemlencsékbe általában tervezték, 250 mm távolság, amely megfelel annak a távolságnak-niju normál szabad szemmel az olvasható szöveget.
A teljes nagyítás a mikroszkóp (V) lehet meghatározni véve ezeket az adatokat a következő képlet szerint:
ahol FOB - gyújtótávolság;
Fok - a gyújtótávolság a szemlencse.
A jó világítás érhető meggyújtva a Me-Todd Keller. Erre a megvilágító van beállítva, hogy a távolságtartó SRI 30-40 cm-re a mikroszkóp és mozog a kazettát egy izzó, vagy az egész megvilágító elérni éles képet az izzószál lámpa széklet teljesen zárt blende a kondenzátor úgy, hogy teljesen kitölti a lyukat kép kondenzátor. Lezárja a nyílást a megvilágító, kinyithatja a rekeszt con densora és mozog a kondenzátor elérni, éles képet CIÓ nyílás megvilágító a mikroszkóp alatt. A tükörképe a nyílás van beállítva középpontjában a látómező, és a megvilágító apertúra kinyitják úgy, hogy az összes A-vescheno látszólagos látómezőt. Nyilvánosságra több a nyílás nem szükséges, mivel nem növeli a világítás, és csak a képesség-pajzs kontraszt miatt a környezeti fény.
Általános szabályok dolgozik a mikroszkóp alatt. Modern mikroszkóp - egy optikai eszköz, amely szigorúan be kell tartani a szabályokat, ha dolgozik vele. Azok a kezelés az eszköz és gondozása céljából, és alkalmazza a megfelelő világítás kiválasztása minden esetben a legjobb megvalósítási módja az optikai rendszer (szemlencse - Ob-injektıv - kondenzátor), stb ...
Por elleni védelem érdekében a mikroszkóp alatt kell tárolni fedelét. Időről időre habosító következőképpen ellenőrizze a tisztaság és a feltétel az optika és törölje, de csak kívülről. Tisztítására optika használt a haj kefével vagy ronggyal etil-alkohol, vízzel hígítjuk (1: 1), de minden esetben nem alkalmazható a benzol, vagy xilol elkerülése érdekében beillesztés lencsék. Mechanikai csúszó alkatrészek letöröljük xilollal vagy benzil-SG, majd olajozott.
Mozgása baktériumok és spirocheták figyelhető meg a sötét területen, amely különbözik a hagyományos könnyű-BOM világítási od előállítására. Ebben az esetben használjon oldalsó fény, miáltal egy képet kapunk, Gosia fénylő objektum egy sötét háttér. Az elv a sötét mező azon a tényen alapul, hogy a fénysugarakat eltérített oldalra eső sűrű részecskék (például mikrobák), és tart ezen keresztül szem a megfigyelő által képviselt fényes. Bo kovoe világítás a mikroszkóp kapjuk, hogy a hagyományos reflektor speciális hűtővel árnyékoló közepén. Az ilyen kondenzátor rendelkezik az összes központi fénysugarak és halad csak a perifériás (3.ábra). Ehelyett egy speciális kondenzátor-alom sötét mező használható hagyományos világítanak-lem, a két lencse van behelyezve a fekete kör Bu mágusok valamivel kisebb átmérőjű, mint a lencse. Meg kell dolgozni egy erős fényforrás (ívlámpa vagy normális lampoch Coy 200-300 gyertyát). Kutatási berendezés a következő. Alkalmazott tárgylemezre, és egy csepp anyagot gondosan borított fedél üveg, hogy elkerüljék a gáz buborék-ing. Ezután a felületet helyeztünk egy csepp a kondenzátor víz vagy fenyőolaj, és a dia a készítményt forgalomba a csepp.
A vizsgált vegyületet akkor tekintjük akár egy erős száraz rendszer (objektív '40), vagy egy merülő rendszer. Az utóbbi esetben, a fedőlemez alkalmazzuk egy csepp cédrus olajat, és egy kis merülő csavaros karmantyút - dia-phragma szűkíteni lumen átmérője lencse.
Ha ezt a módszert mikroszkópos gerendák világító tárgyat, ne kerüljön a lencse a mikroszkóp, a látómező sötét marad, és a tárgy ellen háttérben látszik világító (4.). sötétlátótér hatás jön létre egy speciális kondenzátor (paraboloid vagy kardioid), vagy egy hagyományos kondenzátor egy titkos kör fekete papír központi része.
Megfigyeléshez, sötét mezőben fény készlet és ár-Trier mind fényes hátterű és cseréje a kondenzátor spe-ügyi, add fény maximális, leleplező kudarcra dia-Phragmen beleértve reosztát és megvilágítással.
Készítmények kutatási sötétben területen kell főzni egy nagyon tiszta fedőlemezekre tárgya bizonyos vastagsága: figyelemmel - nem több, mint 1,2 mm, a fedél-WIDE - 0,17 mm. Készítsünk a kábítószer-típus „zúzott” vagy „lógó” csepp (ábra. 5). Előkészítése közötti háromnyakú gömblombikba immerziós olaj (vidd azt felvisszük a felső lencsét a kondenzátor). Ezután emelésével és csökkentésével a kondenzátor elérni a megjelenése a látótérben a fényfolt, amely egy speciális futómű vezérlés rovochnyh kondenzátor kiadási csavar a közepén a látómező. Ezután a helyes lépés, hogy növelje felügyelet.