A gyártási technikát szövettani készítmények
Előállítása szövettani készítmények közé tartoznak: 1) a rögzítő anyag; 2) microtomy; 3) festése szakaszok.
rögzítő anyagok
Általános információ. ÖSSZEFOGLALÁS rögzítéstől venni, hogy tartsa a darab szerveket és szöveteket a rothadó, és fermentációs eljárások, amelyek megváltoztatják a szerkezetét a szövetek.
Felvett számos szövetben mennek keresztül fizikai és kémiai változásokat. A legfontosabbak ezek közül: a gyors véralvadási fehérjék és lipidek részben és ezek átmenet olyan állapotban, amelyben az anyag nem változott a hosszú távú tárolás és az ezt követő kezelések.
szöveti rögzítéstől végezzük folyadékok különböző összetételű. A leginkább használatosak a formalin, egy alkohol, legalább aceton, a higany-klorid, és mások.
Rögzítés formalinnal. VENAL formaiint (40% -os vizes formaldehid-oldat) alkalmazunk 10%, 15% -os oldat (10,0-15,0 korrupt formaiinnal 90,0-85,0 víz). A formalin koncentrációja az említett viszonylag gyors (48- 72 h) impregnálja a szövet és rögzíti azt is. Lehetetlen, hogy rögzítse a anyagot olyan oldatban, magasabb koncentrációjú formalinnal vagy formaiinnal hígítatlan eladható. Ebben az esetben, a felületi rétegek szövet tömörítik gyorsan képeznek kéreg, hogy megakadályozza a penetráció a rögzítő folyadék mélységét, ahol autolízis folyamatok továbbra is.
Annak a ténynek köszönhetően, hogy a formalinnal mindig tartalmaz bizonyos mennyiségű hangyasavat, amely hátrányosan befolyásolhatja a szövetet, és zavarja a bizonyos módszerek további feldolgozásra az anyag (ezüst, stb), azt semlegesíteni kell krétával. 100 g kereskedelmi forgalomban kapható formaiint (40% -os formaldehid oldat) adunk hozzá South kréta. Tartalom többször összerázzuk, majd állni hagyjuk, amíg a kréta rendezi az aljára ételeket. Azt is meg kell jegyezni, hogy a tárolás során a formalin egy hideg szobában, amely képes .polimerizatsii formaldehid és a veszteség a gazdag lé formájában fehér csapadék. Annak érdekében, hogy ezt a formalin javasoljuk, hogy tárolja a meleg szobában, egy sötét tartályba.
Darab szövet vett szövettani vizsgálatot nem lehet több, mint a 0,5-0,7 cm. A darab ruhát nem illik szorosan a falhoz bankok raktak vatta vagy szűrőpapíron. A kötet a fixáló folyadék meg kell haladnia a 10-szer mennyisége vett anyagok. Fixation -os vizes formalin-kívánatos olyan esetekben, ahol a szöveteket tanulmány célja a kimutatására oldható anyagok a vízben.
Azokban az esetekben, amikor egy gyors vizsgálat, szövetdarabokat formalinnal fixáltuk, 85-90 ° C-on A időtartamát rögzítő darab 2-3 mm vastagságú hőmérsékleten 10-15min. Hosszas tárolás anyag; formalinban fixáltuk képződött szövetet sötétbarna iszapot, amely szennyezheti a készítmények. Eltávolítása csapadék célszerű alacsonyabb szövettani metszeteket 2-3% hidrogén-peroxid-oldatot, vagy egy 1% -os kálium-hidroxid-oldattal, majd többször mossuk vízzel.
Rögzítés alkohollal. Ez az eljárás alkalmas csak olyan esetekben krgda kell rögzíteni szöveti anyag, vízben oldható, és vizes oldatai bilincsek. Rögzítésére használt alkohol 95 vagy 100 °. Alkohol, a víz eltávolítására a szövetdarabokat és hígított önmagában kevésbé erős. Ezért ajánlatos megváltoztatni az alkohol többször is. Darab szövet rögzítés alkohol kell 2-3 mm vastag. Télen, akkor ajánlott használni formalin-alkohol (alkohol 70 ° -90,0, formalinnal 10,0).
Microtomy
Általános információ. A gyártási szakaszok a rögzített szöveti igényel járulékos tömítést. Számos módszer létezik: fagyasztás szövet, áztatás neki celloidin, paraffin, stb ...
Miután rögzítéséről és tömítő a szövet, vagy más módon elkészített szakaszokat. vékony
Egyforma vastagságú alkalmas a makroszkopikus vizsgálat is különleges berendezést mikrotomot. Őket több típusa van. A leggyakoribb a szánkó mikrotom, fagyasztás (ábra. 137). Az elv az eszköz áll az a tény, hogy miután minden vágás asztal, amelyhez kapcsolódik a szövet emelkedik egy előre meghatározott magasságban. Így, egyforma vastagságú darabokká kapunk. A vágott kellően vékony és átlátszó, akkor általában készült vastag szeletekre 4 és 15 m> km. Fagyasztás szövetet. A gyártás a szövet szövettani készítmények fagyasztókamrában mikrotom, alkalmazása folyékony szén-dioxid, éter, klór-etilén, vagy egy elektromos áram az asztalon a félvezetők.
By fagyasztás lehetséges elég gyorsan, hogy szövettani készítmények. Ez a módszer is használják a tanulmányok szövet lerakódását a zsírt és zsírszerű anyagokat tartalmazó zsírok oldható alkoholok, aceton és xilol.
Szakadó szövet celloidin. Ahhoz, hogy töltse gyógyszer celloidin kivágott szövet szeletekre 1-3 mm vastag, és következetesen végigvinnék alkoholok növekvő vár - 50, 75, 95 és 100 °, áztatás 24 órán egyes. Miután a alkoholtartalmú a szövet darab 100 ° ajánlott kétszer áztatjuk 24 órán minden egyes alkalommal. Ezután, a szövet darabok átvisszük egy keveréke egyenlő rész abszolút (100 °), és éter-alkoholt is 24 órán át. Ezt követően a szöveti darabokat helyeztünk az első 2%, majd 8% -os oldat celloidin 2-3 napig minden.
Celloidin elő a film - vagy filmek. Kezdetben úgy lemossuk a zselatint forró vízben, majd szárítjuk, apróra vágott és feloldjuk egy egyenlő arányú keverékében alkohollal és éterrel. A 2% -os oldatot celloidin konzisztencia hasonló folyékony kollódiumban, és 8% hasonlít egy sűrű szirupot. A megvilágítás után celloidin vastag darab szövet azonos celloidin öntünk egy csészét a motorháztető, ahol összenyomódik 12-24 órán keresztül. Amikor celloidin szerezhet sűrűségű rugalmas gumi, a blokkok vannak vágva, és ragasztott azok celloidin téren fadarabot. Ez lehet tölteni darab ruhát celloidin közvetlenül a kocka. ILIB kell jelölni, amiért az egyik oldalsó felületére kocka make tinta megfelelő megnevezést. Általában írja a tanulmány szobában.
Store darab feltöltött celloidin, egy 70 ° alkohol. Töltsük meg a szövet paraffin. A dehidratáció a szövet végezzük alkoholok növekvő erőt ugyanolyan módon, mint abban az esetben; tselloidinovoy kábelezés. Az expozíció után a szövetdarabokat 100 ° alkoholt azok átvisszük egy keveréke egyenlő tömegrész abszolút alkohol és xilol 2-3 órán át, majd öntjük tiszta szövet darabokat xilol, és ott tartjuk 2 -. 3 óra után az idő után azok átvisszük egy új, tiszta xilol. . 2-3 órán át, majd paraffinba-xilol (telített paraffin oldatot xilolban 30 ° C-on) 1 és 1,5 órán át Ezt követően szövetdarabokat helyeztünk nettó; paraffin hőmérsékleten 54- 56 ° C-on 1,5-2 órán át. Ezeket azután paraffinba ágyaztuk a papír vagy fém öntőformák, és vízben lehűtöttük. Tömörített darab ruhát, valamint tselloidinovye blokkok ragasztott fa kockák és jelölés.
festése szakaszok
Általános információ. Színező szövettani metszetek alapján egyenlőtlen affinitást szöveti elemek, bizonyos festékek. A sejtmagokat megfestettük egy alkalmas mag, és a citoplazma - a sav színek. Ennek megfelelően, a fő különbség, vagy nukleáris, és savas vagy diffúz festék.
Leggyakrabban a szokásos állatorvosi gyakorlatban alkalmazott mortem festéssel metszeteket hematoxilin-eozin szerinti Van Gieson, Perls, a szudán III és mások.
Hematoxilin-eozin. A megfestett metszeteket kis Petri-csészében vagy szemüveget. Ezt a módszert alkalmazzák a festés szakaszok bármilyen módszerrel előállíthatjuk. Ebben a sejtmagok szerez ibolyakék vagy sötétkék, a citoplazma és a rostos anyag - világoskék vagy rózsaszínes-vörös. A zsírok és lipidek nem festett. A vörösvértestek emlősök, mert nem tartalmaznak atommagok festjük csak eozin.
Színes szeletek A Petri-csészében elő az alábbiak szerint.
1. Szelet boncolótűvel át a víz a hematoxilin oldattal 2-5 percig.
2. Öblítés vízben, 2-5 perc.
3. Merítse 10-20 s 1% -os sósav-oldatban 70 ° alkoholt (ha a szelet erősen haematoxylinnel átfestették, meg kell ebben az oldatban tartjuk valamivel hosszabb).
4. Mossuk tiszta vízben 5-10 percig.
5. Mosás enyhén alkalikus oldatban (egy üveg vizet adunk hozzá 1-2 csepp folyékony ammónia) 10 percig.
6. Mosás ismét tiszta vízzel 10-től 15 percig. Ha a vágás után lúgos víz mosott elég, ő megkérdezett rosszul eozin.
7. foltot eozinnal 3-5 percig.
8. Öblítés vízben 1-2 percig. 280
9. dehidratált alkoholokban növekvő kreposti- 75, 90, 100 °. Ha a vágási átfestett eozin, meg kell egy kicsit tartani a 75 ° alkohol.
10. A fényvisszaverődés a karbolksilole.
11. segítségével egy spatula és vágja a tű át tárgylemezre.
12. Szárítsuk a szűrőpapírt.
13. A csepp részén alkalmazzák, vagy a kanadai balzsam fenyő és borított lefedjük.
Festés Van Gieson. A festett metszeteken Van Gieson, kötőszövet festett élénk piros, a többi szövet - sárga vagy szürkés-sárga. A magok vannak színezve fekete vagy sötét lila.
Elszíneződést a következőképpen.
1. A metszeteket intenzíven megfestettük hematoxilinnel (hematoxilin jobb Weigert), és vízzel öblítettük.
2. Közvetlenül picrofucsin át 3-5 perc alatt (keveréke telített vizes pikrinsav és 150,0 telített vizes fuchsin - 3,0-5,0).
3. Gyorsan mossuk vízzel (vizes kivonatainak bíbor cutoff).
4. víztelenített alkohol 95 ° C-on 1-2 percig.
5. fehéríthető a karbolksilole és beágyazott balzsam fenyő, mint amikor festettünk hematoxilinnel és eozinnal.
Bevonat Sudan III. Sudan III - semleges azokraska oldódik alkoholban, acetonban és zsírok nem oldódik vízben. Színező Sudan III termelt meghatározására szakaszok a zsírok és a lipidek. festés berendezések következik.
1. Fagyasztott szakaszok sújtja át 0,5, 1 percig 50 ° alkoholt.
2. A szeleteket úgy helyeztük be svezhefiltrovanny Szudánban oldatban 10-20 perc.
3. öblítjük alkoholban 50 ° C-on 0,5-1 percig.
4. Óvatosan vízzel mossuk, 10 - 15 min.
5. A metszeteket hematoxilinnel Ehrlich timsó, vagy Boehmer.
6. Mosás vízzel 3-5 percig. Festeni a szeleteket különbséget hematoxilin
Az 1% -os vizes sósavoldattal, öblítjük lúgos vízzel, majd tiszta vízzel.
7. álló glicerin, vagy glicerin-zselatin.
8. Fedjük le a fedél üveg. Festési Perls. Ez a módszer a színezés alkalmazhatjuk szövetek azonosítására hemosziderin.
1. A desztillált vizet át metszeteket üveg tűk 15-20 percig frissen készített álló keverék egy rész 2% -os oldatot ferrocianid és fél tömegrész 1% -os vizes sósavoldattal.
2. Mossuk desztillált vízzel 5-10 percig.
3. Dokrashivayut alum kármin 15-20 percig.
4. Öblítés vízben, és áthalad alkoholok karbolksilol és balzsam.
Vastartalmú pigment - hemosziderin - szerez kékes-zöldes vagy kékes színű.
Festési Turevichu. Példaként Turevicha festett metszeteket készítettünk az agy a diagnózis a veszettség. Ebben az esetben a borjúnak Babes - Negri és a vörös vérsejtek színű bíbor vörös, hematoxilin idegsejtek - kék.
A szövettani vizsgálatok figyelembe szelet hippokampusz és a kisagy, a fix 10% -os formaiinban, acetont vagy folyékony Adutskevich következő összetételű: 80% -os ecetsavval - 1 rész kloroform -2 rész etil-alkoholban 96 ° - b alkatrészek.
A fixálást mennyi ideig szobahőmérsékleten 1 napon formaiinban, acetonban és folyékony Adutskevich -. 3-6 órával rögzítéséről vágott darabokat nem több, mint 1 és 1,5 mm-es, paraffinba ágyaztuk, majd előkészíti szövettani metszeteken, megszárítjuk és megfestjük.
Elszíneződés Turevichu következik.
1. A szakaszok festés előtt deparafiniruyut Xylene 10-20 perc.
2. Mossuk alkohollal.
3. Stain sejtek hematoxilin nucleus Wei-Gert 2 percig.
4. A metszeteket vízzel leöblítjük.
5. Adott esetben festettük 1% - a sóoldat
Savas fukszinnal 1 percig.
6. Mosás vízzel.
7. Különbséget egy 95 ° alkohol és egy telített, vizes pikrinsav-oldatot 10-20 másodpercig, hogy törölje sárga színárnyalat.
8. Száraz szűrőpapír.
9. dehidratált abszolút alkohollal.
10. fényvisszaverődés xilol 1 percig.
11. Arra a következtetésre jutottunk Kanadai vagy fenyő, balzsam.
Ábra. 137. Az általános nézet az fagyasztó mikrotom:
/ - tömlő széndioxid;