Az otomycosis diagnózisa
Az otomycosisban szenvedő betegek összes gombájának törzsét a fajhoz határozzuk meg. A penészgombák típusának meghatározásához a gombákat a következő összetételű Chapec közeggel kereszteztük:
Víz - 1000 ml
NaNO3 g
KH2P04 (vagy K2HPO4) - 1 g
MgS04 0,5 g
KCI 0,5 g
FeS04 0,01 g
Szacharóz - 30 g
Mindegyik fonalas gomba törzset szélesztünk egy külön Petri-csészébe Czapek közepes és inkubátorban tartjuk hőmérsékleten 28-30 C. Az első vizsgálatban az ültetés után végezzük 3-4 napig, és a 8-10 nap véglegesen meghatározzák az eredményül kapott tenyészetből.
Először tanulmányozza a növekedési mintát gombák: kolónia mérete, forma, szín, mind a felső és az alsó oldalán a Petri-csészék, festés a szubsztrát, a szélesség és a szerkezet a növekvő szegélyén (merítjük, pók, sűrű). Mindezeket a megfigyeléseket szabad szemmel vagy a Holdon keresztül végzik, anélkül, hogy megnyílnák a Petri ételeket. Így egy sor megfigyelés eredményei alapján a kolónia makroszkopikus struktúráját írjuk le (15-16. Ábra).
Ábra. 15. A Penicillium notatum kultúrájának növekedése a vetés során Czapek táptalaján.
Ábra. 16. Az Aspergillus fumigatus kultúra növekedése a Czapek táptalajában történő telepítés során.
8-10 nap múlva, a bőségben lévő spórák kialakulásának ideje alatt mikroszkópos vizsgálatot végeznek annak érdekében, hogy végül meghatározzák az adott gomba törzs faját. Ez a meghatározás szinte kizárólag a telepek morfológiai jellemzőire és színére épül, ellentétben a baktériumok fajmeghatározásával, melyeket szintén biokémiai aktivitásuk mértékével jellemeznek.
Mikroszkópos vizsgálatot végeznek mind az átlagos nagyítások (X200-300), mind pedig az erősebbeknél (X400). Közepes növekedés esetén tanulmányozzák a kefék vagy konidiális fejek általános szerkezetét, maguk a spórák elhelyezkedését, a konidioforokat, a micélium szerkezetet és a sclerotia kialakulását. Erõsebb növekedés mellett meghatározzák a konidioforok egyedi részleteit, azok színét, elágazását, a conidia méretét és alakját, valamint más kisebb gombás részleteket. Az ilyen azonosítást az Aspergillus, Penicillium és Mucor nemzetségekből származó otomycosis kórokozók típusainak meghatározására végzik (17.
Ábra. 17. Az Aspergillus nemzetség gomba tenyészetének mikroszkópos képe a Czapek táptalaj 10. Napján, a konidiális fej és az összezúzódó conidin x900 látható.
A tenyészet diagnózis a gombás fertőzések okozta élesztő gombák a Candida nemzetségbe tartozó, vannak bizonyos nehézségek, mert a kultúra az élesztők nőnek gyakran együtt jár más baktériumflóra, valamint az azonosítása a gombák eléréséhez szükséges tiszta tenyészeteket. Ugyanakkor a faj meghatározásához nemcsak a kultúrák morfológiai, hanem biokémiai vizsgálata is szükséges.
Ebben a tekintetben, primer tenyészeteiben élesztők kapott Sabouraud tápközegben, vetjük alá mechanikai tisztításához idegen növényfajok ismételt hígítással gombás szuszpenziók steril vízben és ültetési egy hurok utolsó hígítási egy stroke-on Sabouraud-féle tápközegben egy Petri-csészébe. A felnõtt telepeket ezután ellenõrizzük a tisztaságra (színes készítményben), és szükség esetén újra tisztítjuk ugyanezzel a módszerrel. Van egy kémiai tisztítási módszer is: a gomba tenyészete 1 óra hosszat öntjük 10% -os kénsavoldattal.