A szövettani tárgyak feltöltése paraffinban

A vizsgálati szövetekből vett vékony részek elkészítése csak akkor lehetséges, ha megfelelően sűrű anyagokkal, például paraffinnal és celloidinnal impregnáltak.

A paraffin nagy molekulatömegű szénhidrogének keveréke, amelyet a kőolaj desztillációjával nyernek. A szövettani alapozáshoz használt paraffin-osztályok olvadáspontja 48-60 ° C. A mindennapi munkában a legkényelmesebb a paraffin, amelynek olvadáspontja 52 ° -56 ° C. A technikai, élelmiszeripari és orvosi paraffinok további előkészítés nélkül nem teszik lehetővé a töltet előállítását, ami biztosítja a szakaszok kiváló minőségét. A szövettani laboratórium kívánatos használni tisztított minőségű paraffin viaszok, vagy hozzáadásával egy speciálisan tervezett viasz-alapú tápközeget módosító adalékok (Paraplast -Sigma (CSHA), Histoplast - Shandon (CSHA), Histomix - Biovitrum (Oroszország).

A paraffinnal való impregnálást egy termosztátban hajtják végre, amely 1-2 fokkal tartja a hőmérsékletet az alkalmazott paraffin olvadáspontja felett (általában 58 ° C hőmérsékletet állít be).

Mivel az olvadt paraffin és az etanol nem keveredik, az alkohol (vagy metil-szalicilát) eltávolítása a dehidratált anyagból egy közbenső közeggel, paraffin oldószerrel, amelyet etanollal elegyítünk. Ilyen köztitermékekként kloroformot, légi benzint, petrolétert, xilolt, benzolt, toluolot, oktánt, hexánt stb. Alkalmazhatunk.

Az abszolút alkohol dehidratálásra alkalmas (abszolút alkohol), ha az erõssége nem alacsonyabb, mint 98 °. A gyakorlati munkában a kloroformot leggyakrabban használják. Az abszolút etanol elérhetőségével a kloroformot a kevésbé toxikus petróleum-éterrel szemben előnyben kell részesíteni, ami jobban eltávolítja az etanolt, és jobb minőségű impregnálást biztosít a paraffinnal.

Javasoljuk az alábbi kábelezést és az anyag impregnálását.

1. Paraffinba kloroformmal öntjük

A kiszáradt tárgyakat egymás után helyezik el:
Az abszolút etanol és kloroform (1: 1) elegyét 1-2 óra hosszat végezzük
Kloroform (I) 1 óra,
Kloroform (II) 1 óra
Kloroform (III) 1 óra
Kloroform-paraffin (1: 1) 37 ° C-on termosztáton 12-24 órán át
Három adag olvadt paraffin (termosztáton 56 ° -58 ° C-on) 40-60 percig

2. Petróleum-éter alkalmazásával paraffinba öntjük.

A kiszáradt tárgyakat egymás után helyezik el:
Petróleum-éter (I) 30-60 perc
Petróleum-éter (II) 30-60 perc
Petróleum-éter (III) 30-60 perc
Petróleum-éter-paraffin (1: 1) 37 ° C-on termosztátban 3-24 órán át
2 adagos olvadt paraffinon keresztül (5 ° -58 ° C hőmérsékletű termosztátban) 60 percen keresztül.

3. Az anyagkábelezés és a paraffin feltöltése a Buen folyadékban lévő tárgyak rögzítése után, a RAMS Nukleáris Kutató Intézet Morfológiai Tanszékén

A rögzítés előtt kis, vékony és könnyen deformálható tárgyakat kell elhelyezni egy vastag papírra.
Rögzítés Buen folyadékban 1 nap. (szobahőmérsékleten).
Rövid öblítés csapvízben 1-15 perc.
70 ° -os etanol 1 napig.
80 ° -os etanol 1 napig. (legfeljebb 1 hétig maradhat)
90 ° -os etanol 1 napig.
96 ° -os etanol 1 napig.
Abszolút etanol 1 nap.
Az abszolút etanol-kloroform (1: 1) 2-3 óra
Kloroform (I) 90 perc
Kloroform (II) 90 perc
A kloroform-paraffin 1: 1 egy 37 ° -os sütőben egy éjszakán át maradt
Paraffin 1 -1 óra (termosztátban 56-58 ° C)
Paraffin 2 - 1 óra (termosztátban 56-58 ° C)
Paraffin 3 - 1 óra (termosztátban 56-58 ° C)

A nem kielégítő minőségű öntvények segítségével kloroform lehet használata miatt kloroform, „Spectroscopy”, ami hozzá etanolt, kloroformot adagoló (a szárított elégtelenül mosás után tartályok) és reagens, hosszú távú tárolása a fényt.

Abban az esetben, ha nincs lehetőség abszolút etanol használatára, akkor a kábelezés ezen szakasza kihagyható, azonban a paraffin impregnálás minősége valamivel rosszabb lehet. Metil-szalicilát (vagy metil-benzoát) alkalmazásával végzett kiszáradás után ezt a lépést el kell hagyni. A töltés minősége nem romlik.

Végén a vezetékek hajtjuk töltési - a tárgy a forgalomba egy öntőformába (papír, műanyag vagy fém, és tele van egy adag friss melegítjük 58 ° -65 ° C-paraffin Ha szükséges sajátos orientációja szövet szeleteket a gyártás szeleteket segítségével boncolótűvel és melegítjük szemészeti csipesz lehetővé. Fordítsa el az anyagot úgy, hogy a forgácsoló síkot a penész aljához forgatja.

A paraffinblokk jobb konzisztenciájának elérése és jobb minőségű vágások biztosítása érdekében a töltött tárgyak gyorsított hűtése megtörténik. Ehhez a papír (vagy műanyag) öntőformát hideg vízbe engedjük le, vagy hűtött felületre helyezzük (speciális hűtőtáblán vagy hűtőszekrényben + 4 ° C-on).

A megszilárdult paraffin (általában egy óra vagy még több a kiöntés után) fűtött szikével vágott tömbök, úgy, hogy a paraffin marad perem darab 1-2 mm kerületű. Abban az esetben, téglalap alakú darabok, amelyek, ha a készítés szakaszok kell elhelyezni a hosszú oldala párhuzamos a penge a kés mikrotom, paraffin rövidebb oldalai lehet vágni a szélén a szövet. Főtt blokkok melegített szikével vagy speciális spatula (spatula) csatolták a fa blokoderzhatelyu amelyre ceruzával, tollal vagy marker helyezni objektum számát. Azáltal, hogy szelet után kezdődhet hűtőegység.

A fém és a műanyag (polipropilénből, polisztirolból stb.) Formát a termosztátban melegíteni kell az öntés előtt.

Az öntő paraffin felmelegítése 56 ° C felett ajánlott a paraffin gyors keményítésének lehetőségével, amelyet a termosztátból kivettek. ami a tömb egyenetlen töltését eredményezi a üregek megőrzésével.

Addig addig, amíg a paraffin nem szilárdul meg, a formáknak a víz felszínén lebegnek. A paraffinviasz előtti teljes vízbe merítés nem ajánlott a veszély miatt
a víz behatolása a tömb belsejébe és annak repedése és deformációja.

Hosszú távú hűtést nem javasolunk 0 ° C alatti hőmérsékleten a blokk repedéseinek kockázata miatt.

Celloidin alkalmazása paraffinba öntéskor

Abban az esetben, beágyazás paraffinba sűrű szövet, amelyből nehéz, hogy magas minőségű vágások, és ha szükséges, fenntartani a forma könnyen deformálható objektumok (például embrionális) ajánlott kombinációja szakadó celloidin-paraffin.

Számos módszer létezik, amelyeknek célja a celloidin gyenge oldatú szövetek kezdeti impregnálása. Az adott módszer véleményünk szerint a legsikeresebb (az eredmények egyszerűsége és minősége szempontjából).

Víztelenítés után abszolút etanolban (vagy 96%) biteket átvisszük egy keveréke egyenlő térfogat etanolt és a metil-szalicilát, 1-24 órán át (mielőtt megvilágítás). objektumok azután átvisszük egy tiszta metil-szalicilát és a bal 12-24 órán keresztül. A peremszövet anyagot 1-2% oldatban celloidin a metil-szalicilát és a bal 3-7 napig. Mossuk tárgya metil-szalicilát petroléterrel (kloroform), és átvittük petroléter - paraffin (paraffin-kloroform 37 ° C-on), vagy közvetlenül az első casting viasz. Továbbá még töltse szerint az egyik ajánlott mondások.

Oldatának elkészítéséhez celloidin a metil-szalicilát, figyelembe 1-2 g celloidin pelyhek és helyezünk egy jól lezárható tartályba 100 ml metil-szalicilát, tegye termosztatikus kamrában (37 ° C) 2-3 hétig. Naponta egyszer kívánatos kapacitás rázza, hogy felgyorsítsa az oldódás celloidin. A kész oldatot egy átlátszó, enyhén sárgás színű szirupos folyadék, amely tárolható hosszú ideig szobahőmérsékleten.