A fertőző betegségek mikrobiológiai diagnózisának alapelvei
A mikrobiológiai vizsgálatok célja egy anyag jelenlétének vagy hiányának megállapítása a páciens testében és környezeti objektumokban.
Feladatok mikrobiológiai vizsgálatok - azonosítani mikroorganizmusok az anyagban, hogy meghatározzák a fajból származó, morfológiai, biokémiai és antigén tulajdonságokkal toxikus, és létrehozza az érzékenység az izolált mikroorganizmusok antimikrobiális szerek. Annak ellenére, hogy a mikrobiológiai kutatások feladata mikrobiológusok, minden orvos foglalkozik a fertőző betegségek, tudnia kell, hogyan és mikor kell választani az anyagot kutatás, amelyre a tanulmány útmutató és hogyan kell értelmezni az eredményeket.
A mikrobiológiai vizsgálat első szakasza a megfelelő anyag kiválasztása a tanulmány számára. Ezt a kórokozó tulajdonságai és az általa okozott betegség patogenezise határozza meg. Az egyes szervek és rendszerek sérüléseivel célszerű kiválasztani a megfelelő lokalizáció anyagát. Károsodás hiányában a vérvizsgálatot végezzük, majd a mintákat a betegség klinikai képét és a vizsgálat rendelkezésre álló anyagának figyelembe vételével veszik. Így ismeretlen eredetű lázzal kezdetben vetett vér; akkor, amikor konkrétabb tünetek, például tüdőgyulladás tünetei jelentkeznek, köpetet kell venni.
• A mintákat az antimikrobiális terápia kijelölését megelőzően kell összegyűjteni, az aszeptikus szabályoknak megfelelően, hogy megakadályozzák az anyag szennyeződését. Minden mintát potenciálisan veszélyesnek kell tekinteni. A gyűjtése, szállítása, tárolása és a vele való munkavégzés során a biológiai biztonságra vonatkozó szabályokat be kell tartani. Az anyagot a teljes vizsgálati komplexumra elegendő térfogatban gyűjtöttük össze. A mikrobiológiai vizsgálatokat a laboratóriumi mintavétel után azonnal el kell kezdeni.
• A tanulmány kiválasztásának összhangban kell lennie a fertőző folyamat természetével. Így például a tüdőgyulladás etiológiájának megállapításakor az anyagnak köpetnek kell lennie, nem pedig nyálnak és sebfertőzésekkel a leválasztható anyagot a seb mélységéből kell venni, és nem a felszínéről.
A laboratóriumi vizsgálatok megválasztása
A fertőző betegségek mikrobiológiai diagnózisának alapja mikroszkópos, mikrobiológiai, biológiai, szerológiai és allergiás módszerek.
Mikroszkopikus eljárások közé tartozik a kenetek és a mikroszkópos készítmények előállítása. A legtöbb esetben mikroszkópos leletek tájékoztató jellegűek (például, hogy meghatározzuk az arány a színezőanyagok), annyi mikroorganizmusok fosztva színező és morfológiai jellemzői. Azonban, az anyag lehet a mikroszkópos vizsgálatok alapján, bizonyos morfológiai jellemzőit kórokozók (jelenlétében, csillók, intracelluláris zárványok, stb), és azt is, hogy létrehozza a jelenléte vagy hiánya a mikroorganizmusok az elküldött mintákban.
A mikrobiológiai módszerek a mikrobiológiai diagnosztika "arany standardjai", mivel a mikrobiológiai vizsgálatok eredményei lehetővé teszik egy anyag jelenlétének feltárását a vizsgált anyagban. A tiszta kultúrák azonosítását (a mikroorganizmus fajtáig) a mikroorganizmus morfológiai, tinctorial, kulturális, biokémiai, toxigénes és antigén tulajdonságainak figyelembevételével végezzük. A legtöbb tanulmány magában foglalja az izolált patogén antimikrobiális ágensekre való fogékonyságának meghatározását. A mikroorganizmus szerepének epidemiológiai értékeléséhez intraspecifikus azonosítást végzünk a fág, a biovarok, az ellenálló anyagok stb. Meghatározásával.
Biológiai módszerek annak meghatározására irányul, a jelenléte a kórokozó az anyagban a toxinok és a kórokozó kimutatására (különösen a kis kezdeti tartalom a mintában). A módszerek közé tartozik a fertőzés a laboratóriumi állatok a vizsgálandó anyagot, majd izolálása a tiszta tenyészet egy patogén vagy a megállapítás a jelenléte mikrobiális toxin és annak természete. Szimulációs kísérleti fertőzések fogékony állatokban - fontos eszköz a tanulás patogenezisében a betegség és a természet a kölcsönhatások a makro-organizmus mikroorganizmus rendszerben. Biológiai minták elvégzéséhez csak az egészséges testtömegű és korú állatokat használják. Fertőzés anyagot vezetünk belsejében a légutak, intraperitoneálisan, intravénásán, intramuszkulárisan, intradermálisan és szubkután elülső kamrájába a szem, egy fúrt lyukat a koponyán keresztül, szubokcipi-táiis (egy nagy tartályban az agy). Az állatok veszi vivo vér, váladékok a hashártya, a halál után - vér, darab különböző szervek, CSF, váladék a különböző üregek.
A specifikus AT és AG kórokozók kimutatására szolgáló szerológiai módszerek a fertőző betegségek diagnózisának fontos eszközei. Különös jelentőségűek azokban az esetekben, amikor a kórokozót nem lehet izolálni. Ezért szükséges meghatározni növekvő titerei AT, ezért a vizsgált minták párosított sera hozott 10-20 napig (néha ez az időköz hosszabb lehet). AT általában megjelennek a vérben 1-2-hetes a betegség és keringenek, a test viszonylag hosszú, ami lehetővé teszi azok használatát azonosításához retrospektív epidemiológiai vizsgálatok. Az Ig-osztályok meghatározása egyértelműen jellemzi a fertőző folyamat szakaszait, és közvetett prognosztikai kritériumként is szolgálhat. Különösen fontosak a mikrobiális Ag detektálására szolgáló módszerek. Jelentős számban, úgy tűnik, a legkorábbi időzítés, ami számukra fontos eszköze azonosítására gyors diagnózis a fertőző betegségek és azok mennyiségi meghatározás olyan intézkedés hatékonyságának antimikrobás terápia dinamikájában fertőző folyamat.
Allergológiai eljárások. A számos kórokozó agjának szenzitizáló hatása van, amelyet fertőző betegségek diagnosztizálására, valamint epidemiológiai vizsgálatok elvégzésére használnak. A leggyakoribbak a bőr allergiás tesztek, beleértve az Ar (allergén) intradermális beadását a HRT reakciójának kialakulásával. Bőrvizsgálatokat alkalmaztak olyan betegségek diagnosztizálására, mint az SAP, a melioidosis, a brucellózis. A leghíresebb Mant про, amelyet mind a tuberkulózis diagnosztizálására, mind a kórokozó immunitásának értékelésére használják.
A baktériumok elkülönítésének és azonosításának módszerei
Ez a rész a következő témaköröket: előkészítő anyag mikroszkópos és típusú mikroszkóppal, táptalaj tenyésztésére a baktériumok, növények és baktériumok tenyésztéséhez, hogy tanulmányozza a funkciók bakteriális növekedés elsődleges azonosító, valamint a biokémiai, szerológiai, allergológiai és biológiai módszerek azonosításához baktériumok.
Minden bakteriológiai vizsgálat az anyag mikroszkópos vizsgálatával kezdődik, majd ezt követi a tápközeggel végzett vetés. A kiválasztódás hatékonysága nagyrészt a klinikai anyagok mintavételének megfelelő technikájából, a laboratóriumba történő szállításhoz és a minták megfelelő tárolásához kapcsolódik.
Fénymikroszkópos mikroszkóp esetén mikroszkóp, optikai eszköz, amely lehetővé teszi a kis tárgyak megfigyelését (11-1 ábra). A képet nagyítja meg az objektív kondenzátor objektívje, a lencséje és a szemlencse. A fényforrás és a vizsgált tárgy között elhelyezkedő kondenzátor fénysugarakat gyűjt össze egy mikroszkóp területén. A lencse létrehoz egy képet a mikroszkóp területén a csőben. A szemlencse megnöveli ezt a képet, és lehetővé teszi annak érzékelését a szemmel. A mikroszkóp felbontási határértéke (a minimális távolság, amelyen két objektum megkülönböztethető) a fényhullám hossza és a lencsék nyílása határozza meg. Elméletileg a fénymikroszkópos felbontás 0,2 μm; A tényleges felbontás növelhető az optikai rendszer rekesznyílásának növelésével, például a törésmutató növelésével. A folyékony közeg törésmutatója (bemerítése) nagyobb, mint a levegő törésmutatója (n = 1,0), több mikroszkópiás anyagot használunk: olaj, glicerin, víz. A mikroszkóp mechanikus része állványt, színpadot, makro- és mikrometrikus csavart, csövet, csőtartót tartalmaz.
FELMÉRÉS 11-01
A Darkfield mikroszkópos vizsgálata lehetővé teszi az élő baktériumok megfigyelését. Ehhez egy sötétkamrás kondenzátort használnak, amely elválasztja a festetlen anyag kontrasztos szerkezetét. Mielőtt elkezdené a munkát, a fényt egy fénymezőre állítja és központosítja, majd eltávolítja a fénymező kondenzátort és helyére egy megfelelő rendszert (például "OI-10" vagy "OI-21"). A készítményt a "zúzott csepp" módszerrel állítják elő, így a lehető legvékonyabbak (a fedőüveg vastagsága nem lehet vastagabb, mint 1 mm). A megfigyelt tárgy úgy néz ki, mintha egy sötét mezőben világítana. Ebben az esetben a megvilágító sugarai az oldalról esnek, és csak a szétszórt sugarak lépnek be a mikroszkóp lencsékbe (11-2 ábra). Merülő folyadékként vazelinolaj alkalmas.
FELVÉTEL 11-02
Ábra. 11 -2. Sötét színű kondenzátorral rendelkező fénymikroszkóp sémája. A szöveg magyarázata.
A fázis-kontraszt mikroszkóp segítségével élet és festetlen tárgyak tanulmányozása a kontraszt növelésével. Amikor a fény áthalad egy színes objektum egy változás a fény hullám amplitúdója, és amikor áthalad a festetlen - fényhullám fázis használni ahhoz, hogy nagy kontrasztú képeket fáziskontraszt (11. ábra -3.) És interferencia mikroszkópia. A kontraszt növelése érdekében a fázisgyűrűk olyan fémből vannak bevonva, amelyek közvetlenül megvilágítják a fényt, anélkül, hogy befolyásolnák a fáziseltolódást. A mikroszkóp optikai rendszerében egy speciális kondenzátort használnak diafragma revolverrel és központosító eszközzel; a lencséket az immersion célok helyettesítik - apokromák.
FELVÉTEL 11-03
A polarizációs mikroszkópia lehetővé teszi a festetlen anizotrop szerkezetek (például kollagénszálak, myofibrillák vagy mikrobiális sejtek) képalkotását. A módszer elve egy olyan objektum tanulmányozásán alapul, amelyet két, egymásra merőleges síkban polarizált két gerenda alkot.
Az interferencia mikroszkópia kombinálja a fázis-kontraszt és polarizációs mikroszkópia elveit. Az eljárást a festetlen tárgyak kontrasztos háromdimenziós képének előállítására használják. A módszer elve a fényáramlás bifurkációján alapul, mikroszkópban; egy fény áthalad az objektumon, a másik - mögötte. Mindkét sugarat a szemlencsébe csatlakoztatják és zavarják egymást.
Lumineszcens mikroszkópia. Az eljárás azon alapul, hogy bizonyos anyagok rövid hullámú sugárzás hatására ragyognak. Ebben az esetben a kibocsátott fényhullámok hosszabbak, mint a hullámot okozó hullám. Más szóval, a fluoreszcens objektumok elnyeli a fényt egy hullámhosszon és bocsátanak ki, a különböző spektrális régióban (ábra. 11 -4). Például, ha az indukáló sugárzás kék, akkor a kapott izzás vörös vagy sárga lehet. Ezek az anyagok (fluoreszcein-izocianát, akridin-narancs, rodamin, stb) használunk fluoreszcens festékek fluoreszcens megfigyelés (lumineszcens) objektumok. Egy fluoreszcens mikroszkópban a forrásból származó fény (higanylámpa ultrahangos nyomású) két szűrőn keresztül vezet. Eredeti (kék) szűrő blokkolja a fényt, hogy a minta és a fényt a hullámhossz izgalmas a minta fluoreszcencia. A második (sárga) tart egy kék fény, de hiányzik sárga, piros, zöld fény által kibocsátott fluoreszcens objektumot, és a szem által érzékelt. A vizsgált mikroorganizmusokat általában közvetlenül vagy AT vagy a fluorokrómokkal jelölt lektinek segítségével festik. A készítmények kölcsönhatásba lépnek az Ar vagy más, az objektum ligandumkötő szerkezetével. Fluoreszcens mikroszkópia már széles körben használják, hogy láthatóvá tegyük az eredmények immunkémiai reakciók alapján specifikus kölcsönhatása antitestek fluoreszkáló színezékekkel jelzett Ar objektum vizsgálat alatt. Az immunfluoreszcens reakciók variánsait az 1. ábrán mutatjuk be. 11 -5 és 11 -6.
FELMÉRÉS 11-04.
STILL 11-05. Ábra
Ábra. 11 -5. Közvetlen immunfluoreszcencia. Egy közvetlen módszer magában foglalja az AT-vel jelölt fluoreszkáló festéket az Ar-hoz; AT kölcsönhatásba lép az Ar-val a lokalizáció helyén, ami lehetővé teszi a címke megjelenítését.
A FELMÉRÉS 11-06.
Ábra. 11 -6. Közvetett immunfluoreszcencia. Az indirekt módszer két különböző AT használatát foglalja magában. Az első AT-k reagálnak a mikroorganizmus Ar-jával, a második AT-k (a címkéhez kötött) specifikusan kölcsönhatásba lépnek az első AT-kkel, amelyek Ar a második AT-hez. A módszer sokkal érzékenyebb, mint a közvetlen immunfluoreszcencia, mivel a második AT molekulája kötődik az első AT molekulához.
Elméletileg a transzmissziós elektronmikroszkóp felbontása 0,002 nm; A modern mikroszkópok tényleges felbontása megközelíti a 0,1 nm-t. A gyakorlatban a biológiai tárgyak felbontása eléri a 2 nm-t.
A transzmissziós elektronmikroszkóp (11 -7. Ábra) olyan oszlopból áll, amelyen keresztül az elektronok átjutnak a katódsugár által kibocsátott vákuumon. A gyűrűs mágnesek által összpontosított elektronsugár egy előkészített mintán halad át. Az elektronok szóródásának természete a minta sűrűségétől függ. A mintán áthaladó elektronokat fluoreszcens képernyőn megfigyeljük és fényképészeti lemezzel rögzítjük.
A pásztázó elektronmikroszkóppal háromdimenziós képet kapunk a vizsgált tárgy felületéről.
A FELMÉRÉS 11-07.
Anyag előkészítése mikroszkópos vizsgálatokhoz
A bakteriológiai gyakorlat mikroszkopikusan vizsgálni nem festődő mintákat (natív anyag) és festett készítmények (kenetek vagy foltok) készített klinikai minták és a telepeket a mikroorganizmusok termesztenek.
Native gyógyszerek készülnek az életben nem festett baktériumok tanulmányozására. A lógó cseppek módszerét a legszélesebb körben használták. sűrű médiával rendelkező mikrochambers és negatív módszerek élő baktériumok tanulmányozására. Az intravitális kutatások során gyakran alkalmazzák a sötét színű és fázis-kontraszt mikroszkópos vizsgálatokat is. Az ilyen technikákat gyakran használják a szifilisz diagnosztizálására és a kampylobacter által okozott hasmenés előzetes diagnosztizálására, valamint a mikroorganizmusok mobilitásának meghatározására.