Transformation in vitro - rák kísérletek és hipotézisek

Page 51 80

Jellemzően a tumor vírusok nem csak „eszik el” a lyukat a réteg a megfelelő sejteket, hanem megtörni a szigorú rend szövettenyészetben.
Sok növesztett sejteket szövettenyészetben vannak kitéve az általános eljárás: ők osztják csak addig, amíg van hely. Ha kialakult vastag sejtek osztódó szünet: szoros kapcsolatot a sejtek között, hogy megakadályozzák az új mitózis (a jelenség a „kontakt gátlás”).
Fertőzött sejtek tumor vírusok néha Engedetlenek ezeket a szabályokat: ők továbbra is növekszik, sőt „napolzaya” a szomszédok és alkotó egyenetlen rétegeket. Ezek a morfológiai jellemzők önmagukban, bizonyos mértékig hasonlítanak a kis daganatok. Sőt, lényegében bebizonyította, hogy a halom kerülnek semmi halmozott sejteken más, mivel ezek a tumorsejtek. Adott esetben implantátum alanynak (állatnak ugyanazon beltenyésztett törzs, amelyből a sejteket eredetileg vett ezt a kultúrát), akkor ezek vannak kialakítva egy állati tumor.
Más szavakkal, a „véletlenszerűen növekvő sejteket” hatása alatt a tumor vírussal transzformált tumorsejtek (ábra. 40).
Jelei a transzformált sejt

1. Megerősített növekedési üteme.
2. Korlátlan passaging szövettenyészetben ( „állandó kapcsolat”).
3. A kontakt gátlás hiánya ( „rendetlenséget sejt” és „rendezetlen növekedés”).
4. Formation vírus-specifikus antigének.
5. A daganatok kialakulását a immunológiai kompatibilitás.

Átalakítás és a sejthalál

Transzformáció és sejt halál kíséri egymást: ha az egér embrió sejtek fertőzött a vírussal polióma, amellett, hogy a megvilágosodás sejtréteg figyelhető jellemző rakás sejtek.
De sejthalál és átalakulás - folyamatok annyira különböző, hogy felveti a feltételezés, hogy két különböző típusú vírusok. Ebben az esetben az izolált vírusokat területek egyéni megvilágosodás, úgy tűnik, kellett volna az úgynevezett csak a megvilágosodás, de nem átalakulás.
A tapasztalat azonban azt mutatja, az ellenkező: az átalakulás és a sejtek pusztulását kísérő egymással, még abban az esetben, amikor a virionokat izoláltunk egy megvilágosodás. Ezért ugyanaz a vírus okozhat produktív fertőzést és az átalakulás.

A sejteket is, hogy egy választás között a vírus, és a termelés átalakítása

A döntés, hogy vajon egy sejt vesz részt a termelés a vírusok, majd összeomlása His vagy alakul át, és a tumor nagymértékben függ a célsejtben. Ismert sejtvonal, amely preferenciálisan lizálására SV- 40 vírussal és az ilyen, amelyek túlnyomórészt vetjük alá átalakulás (lásd. Ábra. 40).
Szerepet játszanak nemcsak örökletes tulajdonságait sejt, hanem a fiziológiai állapotot. Vírusos transzformálás sokkal könnyebb alávetni növekvő, osztódó sejteket, mint a nyugalmi állapotú sejtek (úgynevezett stacionárius sejtek). A vírus-DNS valószínűleg egyszerűbb beépített DNS-ébe sejtek a folyamat replikációs. Ez azt jelenti, hogy fontos, hogy ne csak a sejtvonal, hanem a fázis a sejtciklus.
Természetesen a cellák nem teljesen szabadon „határozat”, ha a kezelt sejtek feleslegben SV-40, ami általában nem okoz olyan átalakítása (többszörös) fertőzés léphet fel „tiltott” vírus termelődését.
Az egyik cellát is több ezer vírusrészecskék, és a transzformált sejteket, ezzel szemben, mivel nem tartalmaz egy vírus.

„Álcázott” vírusok

Szigorúan véve, hogy a transzformált sejtek már nem tartalmaznak a vírus, nincs semmi meglepő. Ez összhangban van a korábbi adatokat, hogy a daganatokban, amelyeket vírusok, gyakran nem figyelhető meg. (Például, egy gyorsan növekvő Shope papilloma házinyulak már nem tartalmazza a vírust Shoup.)
Két lehetséges magyarázat:

1. A vírusok okoznak átalakulása, de alakított tumorsejt, már nincs rájuk szükség. Ezért, a vírusok nem csak elrejteni, de valójában eltűnik.
2. De mint kiderült, bár a vírusok és látszólag elbújik, azok ne vesszenek el: ők a sejtbe, és élni benne, „álcázott” formában.

Klasszikus modell „álcázott” vírusok bakteriofágok. Fágok - vírusoktól, hogy szaporodnak a baktériumok és a baktériumok roncsolják a sejteket. Azonban, szaporodás és lízis előfordulhat nem mindig. Néha van az úgynevezett „néma fertőzés” 1, ahol a fág belép a sejtbe, de nem semmisíti meg. Utódok a fertőzött bakteriális sejt egészségesnek tűnik, de lehet hirtelen elkezd gyors előállítása fágrészecskék és megsemmisítik.
* A „szunnyadó fertőzés” fogadták a hazai szakirodalomban. - Kb. Ed.
Különböző tényezők meghatározzák késleltetett robbanás: ultraibolya besugárzás, röntgen besugárzás, peroxidok, különböző színezékeket és a rákkeltő anyagok.
A látensen fertőzött sejtek baktérium vírus nem mutatható ki, azonban lízis után, hirtelen újra megjelenik bőségesen. Az ilyen sejtek, úgy tűnik, hogy bemegy hibernáció, de még mindig részt vett minden sejtosztódás és így viselkednek gént.
„Unió” baktériumok, fágok lehet hasonlítani a „házasság”, amely egy ponton bomlik hatása alatt a külső tényezők: a virális genom „veszi át az irányítást”, és kezd foglalkozik kizárólag a szorzást a fág. A tulajdonos látja el az egész gyülekezet szállítószalag vonalak és energiát a szolgáltatást a fág, és végül elpusztul.
DNS tumor vírusok távolról hasonlít az ilyen látens fágok. Polyo és SV-40 is, nem tűnt el teljesen a transzformált sejtek. Még a látszólag mentes a vírus tumorsejtek „friss számok”, jelezve a jelenlétét a vírus.

Nyomában „álcázott” vírus: virussnetsificheskie antigének

Az első nyomai felfedezték keresztül immunológiai módszerekkel: által transzformált sejtekben vírus, antigéneket tartalmaznak, amelyek hiányoznak a normális sejtekben. Függően változnak a vírus okozta az átalakulás. Mivel antigének találtak, amelyek kifejezetten a vírus vagy poliómaenhanszer SV-40
Virussnetsificheskie antigének voltak láthatók a sejtmagban transzformált sejtek, és az úgynevezett T-antigének (tumorantigének). Hörcsögök által indukált tumorok polióma vírus, elleni antitesteket termelni specifikus kapcsolatban a polyomavírus nukleáris antigének. Ha a fluoreszcens festék címke őket, az antigéneket is megfigyelhető mikroszkóp alatt: sejtek T-antigént inkubáció után a jelzett antitestekkel jellemzi fényes fluoreszcens mag, mivel anélkül antigének sejtek sötétek maradnak.
T-antigén nem egy komponense a vírus, mint például, a protein héj. Feladata még nem tisztázott. A legújabb vizsgálatok kimutatták, hogy a tumorsejtek által kiváltott vírusok, nem feltétlenül tartalmazza a T-antigén. Ezért ezek nem szükségesek átalakulás.
Virus-specifikus antigének is lokalizálható a sejtmembránon a transzformált sejtek (antigén transzplantációs kilökődés - aroti). Ők felelősek az átültetett daganatok vírus. Mint láttuk az előző fejezetben, lehetséges, hogy dolgozzon, bár korlátozott vírus elleni immunitás átültetett daganatok. Ha megpróbál másodszor adja meg ugyanazt a tumor vírus rezisztens állatokban a tumor sejteket ültettek nem beoltani (feltételezve - a beírt túl sok sejt).
Lokalizálása transzplantációs antigének a sejtmembránon alaposan tanulmányozták.

1. Általánosan elfogadott, hogy a transzplantációs antigének vannak a sejt felszínén. Csak ebben az esetben lehet egy közötti közvetlen reakció transzplantált sejtek és az immunrendszer sejtjeire védelem.
2. Az immunválasz lehet miatt nem csak intakt transzformált sejtek, hanem a „árnyék”. „Árnyék” nevezett sejtek héjában egy kellően jó sohrannostyo felszíni struktúrák során kapott duzzanat és törés a sejteket hipotóniás sóoldattal.

Antigén anyagokkal önmagukban vírus részecskéket (fehérje alegységek) nem azonos aroti antigének. Aroti termelt antigének által transzformált sejt az utasításoknak megfelelően érkező virális genom. A különböző sejttípusok ugyanazt az antigéneket az átalakulás ugyanazon vírus (lásd. P. 167).
Amellett, hogy a felszíni antigének, amelyek észlelt transzplantáció során is vannak, antigének, amely kimutatható, közvetlenül in vitro (agglutinációs vizsgálati, antitestek fluoreszcein). Ilyen antigéneket gyakran nevezik S-antigének.
Tekintsük most biológiai jelentőségét transzplantációs antigének. Transzplantációs és graft kilökődés mesterséges helyzet, hogy úgy mondjam, biológiailag rendkívüli esetben lehetséges, csak kísérleti körülmények között. És mégis, vannak megbízható jele annak, hogy a vírus-specifikus anyagok, például transzplantációs antigének szerepet játszanak a „normális” fejlesztési vírusos tumorok.
Módosított antigén struktúrájának tumorsejtek megakadályozzák az immunrendszer, hogy megvédje a fogadó. A transzformált sejteket minősülnek „új”, „idegen”, és a védelmi mechanizmusok aktiválódnak. Hatása alatt a vírus a szervezet saját sejtjeit lesz „idegen”, amely tükrözi a következő:

1. A sejteket vált idegenek, kiesnek az egész szervezet rendszer: megszűnik engedelmeskedni a szabályokat „társadalom”, válnak a tumor.
2. De éppen azért, mert az a tény, hogy a sejtek válnak idegenek, a tulajdonos kap egy lehetőséget, hogy megnyerje őket, mint idegen anyagot.

Ezen elmélet szerint, S-antigének középpontjában vírus onkogenezissel: a több sejt válik idegenek köszönhetően ezeket az antigéneket, annál könnyebben távol maradnak a normális szabályozó jeleket. Ugyanakkor ezt az a körülmény gyengíti viszonyított helyzete az immunrendszer védekező rendszert. Az összefüggés egyértelmű, bár még nem szigorú kísérleti igazolását.
Virus-specifikus antigének nem egyedi „ujjlenyomat” tumor vírusok a transzformált sejtekben. Különösen elárulja a vírus jelenlétét-specifikus vírus ribonukleinsav.

Nyomában „maszkolt” tumor DNS-vírusok: vírus-specifikus ribonukleinsav

A transzformált tumorsejt termel vírus-specifikus hírvivő RNS. Kimutatása az RNS végzi úgynevezett DNS hibridizációval RNS. Azt kell, hogy egy kis kitérőt a teória, hogy megértsék a lényegét ennek a módszernek.
Messenger RNS-t kap a genetikai információt a DNS nukleotid szekvencia, és ez határozza meg a DNS nukleotidszekvenciáját.

ELVE molekula-hibridizáció

hibridizációs technika
Következésképpen, a hírvivő RNS és DNS komplementer egymással. Azonban, külön messenger RNS-molekula van a „cast” csak egy rövid hosszúságú DNS-nukleotid-lánc. Ha DNS-t és messenger RNS-t az azonos sejteket elkevertük egymással, a megfelelő nukleotid-lánc két nukleinsav újra egyesül párban. Az ilyen DNS - RNS komplexeket el lehet különíteni és mennyiségileg. Ha a DNS-t összekeverjük mRNS különböző forrásokból származó, mint a szabály, csak gyenge asszociáció fognak tartani (ábra. 41).
Hasonlóképpen, a szereplő információk a vírus DNS, elsősorban megfelel az RNS molekula, és hogy a vírus-specifikus hírvivő RNS is hibridizálódott a vírus-DNS. Így, vírus-specifikus hírvivő RNS - RNS hibridizált virális DNS.

A kísérletek a hibridizációs virális DNS való RNS normális nem fertőzött sejtekben a párosítás nem figyelhető meg. Fordítva, ha elválasztjuk az RNS a transzformált sejtek és hibridizálnak azt egy DNS vírus, nem lesz részleges közötti hibridizáció RNS és DNS-t. Bár párosítás csak egy nagyon kis töredéke a teljes RNS-t a transzformált sejtek, annak kötődését a vírus-DNS meghatározásakor a nagyfokú megbízhatóságot (ábra. 42). Ez azt jelenti, hogy a vírus-specifikus RNS jelen van még a transzformált sejtekben, bár a virionok bennük és nem detektáltak.
Kaptunk új adatok egy közvetlen jelenlétét jelzi a virális DNS, vagy ahol a sejt, hogy az információt az RNS szintézist?

A vírus-DNS megmarad a transzformált sejtekben

A jelenléte a transzformált sejtekben, a virális DNS-bizonyíték nem csak vírus kimutatását-specifikus mRNS; A vírus-DNS-t kimutatni közvetlen módszerekkel.
Bizonyíték új vegyületek módszerén alapuló komplementer DNS és RNS. Erre a célra, először szükséges, hogy megkapjuk a vírus messenger RNS, amely a használt indikátora a virális DNS. Ez az RNS izolálható sejtek keverékéből álló sejtek a mRNS-ek és a kivont vírust az információ sejtek.
Westphal úgy döntött, egy elegáns út: szintetizál hírvivő RNS SV-40. Ebből a célból, ő használt egy enzim polimerizáljuk ribonukleotidok polinukleotidok (RNS) a pontos összhangban az úgynevezett „mag” DNS-t (DNS-függő RNS-polimeráz). A nukleotidok szekvenciája egy szintetikus RNS komplementer a DNS nukleotidszekvenciája alkalmazott csupasz. Ha azonban a „mag”, hogy a vírus-DNS, akkor kap virussnetsificheskuyu RNS.
Ilyen szintetikus virális messenger RNS lehet kapcsolódik a DNS által átalakított sejtet tumor vírusok; DNS-kötő normális sejtek nem fordul elő. Ebből az következik, hogy a vírus-DNS állandóan jelen van a transzformált sejtben. Így a „maszkolt” vírus nem egyszerűen a „Csupasz virális DNS”, vagy „core” a vírus részecske. Az előzetes számítások szerint van egy 10-50 vírusos sejtenként. Minden példányban található a sejtmagba. Ha arra gondolunk, hogy az átalakulás zajlik sikeresen azon fázisok a sejtciklus, amikor a szintézis
DNS, könnyű egyetérteni azzal a feltételezéssel, hogy a vírus-DNS integrálódik a gazdasejt DNS. Mindegyik osztály a virális DNS osztva sejtek teljes sejtes DNS-t. Ellenkező esetben, akkor meg kell elhalványul, és nem lehetett kimutatni.
A legszigorúbb értelemben nukleinsav hibridizációs technika csak azt bizonyítja, hogy legalább egy része a vírus-DNS is fennáll a transzformált sejtben. Új technikák lehetővé teszik, hogy a szélesebb általánosítások: ha bebizonyosodik, hogy a transzformált sejtek megtartják a teljes genom vírus SV-40.

Lelepleződése tumor vírus: sejtfúzió termelését eredményezi, vírus

Az elmúlt években sikerült elérni egyesülése emlős sejtek (Ephrussi, Harris). Ebben a formában a cellában, amely kezdetben két vagy több mag; egy idő után kialakított egyetlen sejtmagból, amely tartalmazza kromoszómák mindkét szülői sejtek.
A természetben, a fúziós magasabb rendű szervezetek sejtjeiben ritka. Lehetőség van megfigyelni csak különleges esetekben, amikor a „szupercella”, amely felmerült eredményeként az egyesülés, több mint a hagyományos szülő sejtek egy előnye a kiválasztás. Azonban egy ilyen fúzió lehet elérni mesterségesen kezelésével sejteket Sendai vírussal. Ez a vírus, neve a város Japánban és általában nem okoz influenzaszerű megbetegedés is képes indukálni sejtfúzió tenyészetekben: látszólag nem tartalmaz „fusion tényező”, amely kifejezetten hat a sejtfal. A sejtfúziót okozhatja egy „halott” (inaktivált ultraibolya sugárzással) a Sendai-vírus. Az utóbbi esetben, nincs szükség a „stop” a termelés vírus sejt-fúzió után.
Az előzőekben ismertetett módszerrel, Koprowski sikerül egyesíteni egy sor transzformált sejtek (természetesen anélkül, hogy vírus) normál sejtek, amelyekben a vírus termelés lehetséges. Vírus termelés kezdődött az így kialakított hibrid sokmagvú sejtek. Normal „produktív” sejt fordul „álcázott” transzformált sejt vírussal produktív vírus (lásd. Ábra. 40).
A kísérletek során azt találták ki, hogy:
1) a transzformált sejtekben tárolhatók teljes genomját a vírus, mivel a sejtfúzió képződését okozza teljes virális részecskék;
2) nyilvánvalóan a transzformált sejtben nem fordul elő semmilyen reakciókat előállításához szükséges teljes vírusrészecskék. A transzformált sejtfalszintézis nincs fehérje, és így a tömegtermelés a virális DNS-t. Ezért, amint azt feltételezhetjük, egy transzformált sejt (legalábbis ebben a tekintetben) irányítja a vírus.