Vladimir Lelevich - biokémia - 16. oldal
transzkripció szabályozásában (lásd. előadás № 6).
Alapvető, hogy a sokfélesége fehérjék játszik poszttranszkripciós RNS feldolgozás. A fő módszer az ilyen szabályozás - alternatív splicing és az RNS stabilitását változás.
Vannak esetek, mennyiségének szabályozásával és sokfélesége fehérjék sebességének változtatására való fordítása folyamatban. A leginkább tanulmányozott példa - fehérjeszintézis retikulocita. Ismeretes, hogy ezen a szinten a vérképző sejtek nem sejtmagokat, és így a DNS-t. Szabályozása szintézisének globin fehérje végzik csak a transzlációs szinten, és függ a tartalom a hem a sejtben.
Inhibitorai mátrix bioszintézis
Van egy nagy csoportja, vegyületek, amelyek gátolják a DNS szintézist, RNS vagy fehérje. Néhány közülük már használják a gyógyászatban a fertőző betegségek kezelésére és daganatos betegségek, és mások számára egy ember erős toxinok. Az utóbbiak közé tartozik toxin sápadt mérgesgomba α-amanitin, mely gátolja az eukarióta RNS-polimerázok.
Gátlók hatása mátrix bioszintézis, mint a gyógyszerek alapján:
1. módosítások tömbök (DNS-t vagy RNS-t);
2. proteint szintetizáló rendszer (riboszómák);
3. A inaktiválása enzimek.
A központi helyet közöttük tartozik antibiotikumok - a különböző kémiai szerkezetű szerves vegyületek által szintetizált mikroorganizmusok. Rövid információt az antibiotikumok, amelyek gátolják a mátrix szintézis táblázatban mutatjuk be a 7.2.
7.2 táblázat. Antibiotikumok - ingibiruyushie sablon bioszintézis
Gátolja iniciációs translyatsii.Svyazyvaetsya a 50S riboszóma-alegységhez, ami a hibákat az olvasás a kódolt információ a mRNS
A DNS-technológiát az orvostudományban
A molekuláris biológia jelentősen befolyásolta a modern orvostudomány: ezek nem csak elmélyítette a megértése a sok betegség okát képezik, hanem hozzájárultak az új megközelítések a diagnózis és a kezelés.
Detektálásához hibák a szerkezet a DNS meg kell izolált biológiai anyagok és az „másolt” (halmozott) elegendő mennyiségben a vizsgálathoz. Mert génterápiás működik szükséges elkülönítése normális gének és azok bevezetése a hibás sejteket, hogy azok kifejezése, amely lehetővé teszi, hogy állítsa vissza a beteg egészségét.
DNS izolálása magában foglalja a gyors sejtlízis, deléciós fragmenseket és membránok a sejtalkotók centrifugálással, pusztulástól proteázok a fehérjék, DNS extrahálás, majd annak kicsapódását. A kiválasztás során nagyon nagy molekulák, ezek tovább daraboltuk restrikciós enzimek segítségével. Az így létrejövő fragmentumokat elektroforézissel elkülönítjük. Száma és hossza a kapott fragmentumokat, és ennek megfelelően, a helyét a sávok a electrophoregram egyedi és különleges, hogy minden egyes ember.
Azonosítása specifikus szekvenciák végezzük Southern-blot Southern hibridizációval. A DNS-fragmenseket vetettük alá denaturálási és szállítására transzfer (blotting) egy sűrű közegben (szűrő vagy membrán). DNS rögzítve a szűrőt hibridizáljuk kis fragmensekből a DNS vagy RNS, amely egy radioaktív (vagy fluoreszcens al.) Mark. Az ilyen fragmensek nevezzük DNS- vagy RNS-próbák. Mintákat komplementer szekvenciákat a próbaként, a hibridizációs meghatározható vizuálisan vagy útján speciális eszközök. A módszert használják diagnosztizálására fertőző betegségek, genetikai hibák, létrehozó expressziója bizonyos gének.
Szekvenálása (meghatározása az elsődleges szerkezet) a DNS-t úgy végezzük, hogy kémiai vagy enzimatikus módszerrel. Maskama és Gilbert módszerrel (kémiai) alapuló kémiai lebomlását DNS. A módszer lényege a következő: az egyik végén a DNS-fragmens jelölt radioaktív vagy fluoreszcens jelölővel. A készítmény jelzett DNS négy részre osztjuk, és mindegyik kezeljük egy reagenst, amely lebontó egy vagy két, a négy bázis, és a reakció feltételeit úgy választjuk meg, hogy minden egyes molekula DNS volt néhány hibák. Az eredmény egy sor jelzett fragmensek, amelyeknek hossza határozza meg a távolságot az alapja elpusztult vége előtt a molekula. A fragmens alakult mind a négy reakció elektroforézisnek vetjük alá négy szomszédos sávokra; akkor töltik azonosítása. A helyzet az ujjlenyomat meg tudja határozni, hogy milyen távolságra a jelzett végén a bázis elpusztult, és tudván, hogy alapot - álláspontját. Tehát egy sor sávok határozzák a DNS nukleotidszekvenciája.
Sanger módszerrel (enzimatikus) modellezése alapján a DNS-polimeráz reakció, ahol a DNS-molekula vizsgálat alatt használjuk templátként. A reakcióelegyhez hozzáadtunk didezoxinukleotidok (OH csoport 3'-helyzetében a pentóz offline). DNS polimeráz a prekurzorok a DNS-be. Azonban, tartalmazza a DNS-t, a módosított nukleotid nem alkotnak foszfodiészter-kötést az alábbi dezoxiribonukleotid. Ennek eredményeként, nyúlása a lánc megáll azon a ponton, ahol csatlakozott a DNS didezoksiribonukleotid. A reakciót végrehajthatjuk egyidejűleg négy különálló csövek, amelyek mindegyike egy négy didezoxinukleotidok és minden 4 dezoxinukleotid trifoszfát (ez általában kapcsolódnak, egy radioaktív vagy fluoreszcens jelölés). Az egyes csövek kialakított egy sor jelzett fragmensek különböző hosszúságú. A hossza függ, ahol a vonalkapcsolt hibás nukleotid. A kapott jelzett DNS fragmenteket egy poliakrilamidgélen, hogy belül egy nukleotid azonosítása végzik, és az elosztó fragmensek mintája a sor négy mintát DNS nukleotidszekvencia.