A genomiális könyvtárak, DNS klónozását in vivo - studopediya
Miután a DNS-t térhálósított in vitro, meg kell lemásolni, azaz klón. Cél: így több példányban a kívánt géneket. Klónozásához kis DNS fragmensek vagy plazmidok, fág DNS-t a nagy - kozmidok és mesterséges kromoszómák.
Vannak két megközelítés a dezoxiribonukleinsav klónozására:
1) a használata bakteriális vagy élesztősejtek, hogy szaporodnak vezetünk idegen DNS-t.
2) amplifikáció DNS in vitro.
A mikroorganizmusok létrehozhat két típusú DNS-könyvtárak: és genomi klón (cDNS-könyvtár).
Genom könyvtár (GenBank, klonoteka) - gyűjteménye DNS-klónok, beleértve az összes fragmenseket tartozó genom a faj. E. Gene bank továbbra is hívják egy sor klónozott genom fragmensek. Ha a szervezet genomjába vágni, illessze be egy plazmid vagy virális vektor, és bejuttatjuk egy sejtbe, tárolható ebben a formában. Amikor vágás a plazmid vagy fág DNS valószínűségét egészében és változatlan darab a genom elég magas.
Ez a módszer a termelő genomi könyvtár úgynevezett „shotgun szekvenálás”, hiszen ebben az esetben a gén tartalmazza az egyes töredékek.
Alapelvei létrehozása plazmid és virális vektorok átfogó, ezért tartjuk őket a példa a plazmid. A vírus-DNS jobb használni DNS fágok, mert van egy nagyobb kapacitású és lehetővé teszi, hogy helyezze be a nagyobb darabokat a genomban.
Ahhoz, hogy hozzon létre egy génbank Bíróság:
1) izoláljuk a teljes genomiális DNS-t
2) DNS-fragmentációját restrikciós enzimekkel vagy ultrahanggal
3) Tisztított cirkuláris DNS-molekulák (vektorok) kezeljük ugyanazzal a restrikciós enzimmel, így lineáris DNS-t. Celluláris DNS-t adunk a plazmid jelenlétében ligázok. Az így kapott rekombináns plazmid DNS-t
4) rekDNK be lehet vezetni baktérium- vagy élesztősejtek, ahol a plazmid replikálódik alkotnak sok másolatot.
5) Klónozás A baktériumok: Minden egyes kolóniát keletkezett sejtek egy klón egyetlen sejt vagy utódja. Tartalmazó plazmidokat egyetlen telepet klón genom DNS és plazmidok meghatározott formák egy genomi DNS-könyvtárat.
Hiányosság. DNS-fragment keletkezik nagy mennyiségben. Vágás esetén genomiális DNS-t határozzuk meg, így csak egy része a fragmensek teljes géneket. Egyes fragmenseket csupán egy részét tartalmazhatja egy gén vagy intronszekvenciákat.
Előny: génbank tárolható és használható korlátlan ideig.
-forrás anyag tanulmányozására szerkezetét, funkcióját és szabályozását az egyes gének, fehérjék szerkezete és működése
-megőrzését, a génállomány veszélyeztetett fajok
Hasonló gyűjtemények származó egyes kromoszómák vagy azok egy részét, az úgynevezett kromoszomális könyvtárakban.