Biotechnológiai termesztése egyetlen növényi sejtek
Kultúra magasabb rendű növények sejtjei
Technikák tenyésztésére növényi sejtek egyetlen
Az egyes sejtek tenyészthetők klónok, tanulmányozása a genetikai és fiziológiai variabilitásának vagy stabilitását. Ezen túlmenően, a termesztés egyes sejtek lehetővé teszi számunkra, hogy tanulmányozza a feltételeket, amelyek meghatározzák a megjelenése ösztönzést a szétválás a sejteket izoláljuk a befolyása egyéb sejteket vagy szöveteket. Az egyes sejtek szintén fontosak klonális szelekciója mutáns, hibrid és a transzformált vonalak. Jellemzően az ilyen sejtek bevezetése marker gének, amelyek lehetővé teszik a szelektíven.
Ezen túlmenően az egyes sejtek modellként szolgálhat egy összehasonlító tanulmány a fiziológiai folyamatok szövetek és izolált sejt. Például, a tanulmány lehet hasonlítani fotorespiráció folyamat a fotoszintézis egyetlen sejt szintjén, és az egész levél mezofillum szövetet.
A termesztés izolált sejteket két lépésből áll: 1) izolálása intakt növényi sejtek vagy kallusz szövetet; 2) olyan körülményeket elősegíti a növekedését és fejlődését az izolált sejtek.
Az első lépés az, hogy kijelöljön egy életképes és intakt sejtjeiben egy egész növényi szövet vagy kallusz szövetet. Ezt úgy érhetjük el, kezeléssel pektináz szöveti maceráció vezető a sejteket. Azonban nem mindig ilyen kezelés után a sejtek képesek a későbbi szövet kialakulását és megosztottságot. Ez jobb, ha különálló sejteket szuszpenziós tenyészetekben vagy kallusz laza. Ideális egyedi sejtek a protoplasztok, amelyek alakult a sejtfal.
A sejteket azután izolálhatjuk, hogy vagy mikromanipulátorok, vagy több egymást követő hígítások. Az első kísérletek a kultúra egyetlen sejtből származik fontos tudományos probléma: hogyan lehet megosztani sejteket izoláltak befolyása egyéb sejteket vagy szöveteket? Az egyes sejtek másként viselkednek, mint azok koncentrációját a aggregátumok formájában szuszpenzióban vagy kallusz tömeg a felületén a tápközeg.
Mert a megoldás egy hipotézist „kondicionálás tényező”. Ezt nevezték az anyag serkenti a szétválás egyetlen sejt. Megállapította, hogy ez a tényező egy kémiai természete, hőérzékeny, vízben oldható, nizkomolekulyaren (MK Pavlova, RG Butenko, 1965), vidonespetsifichen, nem helyettesíti a jól ismert növényi hormonok, sinergichen a brassinok. Egyes megvalósításokban az egyed sejttenyészet javasolták.
Először válassza ki a megfelelő körülmények részlege egyetlen sejt, lehetséges volt 1954-ben Muir, Hildenbrantu és Riker. Ez a módszer az úgynevezett módszer „szövet - nővér” (12.).
Ábra. 12. reakcióvázlat Használat kallusz „szövet - nővér”
Cell izoláltunk mikromanipulátorral a töredező kallusz közvetlenül a szűrő darab 8 * 8 mm-es, tetejére helyezzük kallusz szövetet, amelyből a sejtek származnak. A kalluszt kell lennie az aktív növekedési fázisban. Az is lehetséges, mint a „dajka” kell használni a kalluszt egy másik növény rokon fajok. Ebben az esetben a sejtek növekednek és osztódnak. Elöregedésével kallusz - nanny szűrő sejtek át a fiatal kallusz. Amikor a szövet a sejtek olyan méretet ér el a 0,5-1 mm, ez lehet ültetni közvetlenül a tápközegben.
Is végeztünk kicsapódása sejt kísérletek közvetlenül az agar táptalajon, de nem feltétlenül közvetlenül a szűrő, ami néhány nap kapcsolatba kerül egy fiatal, gyorsan növekvő kallusz szövetet. Mivel ezek a vizsgálatok kimutatták, hogy egy állandó sejtet érintkeztetünk egy szűrő kallusz tömeget nem szükséges a sejtosztódáshoz, azt javasoltuk, hogy a régi táptalajt stimulálására egyetlen sejt osztani.
Ön is használja a módszer „etetés egy réteg”. Ehhez, hogy egy sejtszuszpenziót, az azonos fajtájú, mint az egyetlen sejt, vagy egy közeli rokonságban álló fajok. A sejtszuszpenziót kell lennie a korai exponenciális növekedési fázisban ciklus. 1959-ben godu Bergman javasolt szűrőt szuszpenziós tenyészetben (ebben a kísérletben volt a dohány, bab) aszeptikusán keresztül egyrétegű muszlinon (sejtek 0,3 * 0,1 mm). Ennek eredményeként, olyan zagy, amely 90% -a az egyes sejtek. Ezt a szuszpenziót összekeverjük agar táptalajon, ugyanolyan összetételű, hogy használták a felfüggesztés termesztés (tápközeg 0,6% agar). Az elegyet vékonyréteg (1 mm) egy Petri-csészébe. Agar megosztott sejtek, de nem akadályozza a csere kémiai jelek közöttük, és a réteg vastagságát szabad nézni a viselkedésüket a mikroszkóp alatt.
Indukciós körzetek az egyes cellák lesz elérhető alkalmazása során igen gazdag táptalaj, például Cao és Mikhailuk közegben. A kötet a közeg, amelyben a sejteket helyezünk, csak minimális (mikrocseppeket térfogat 20 ul).
Mindezek a sejt tenyésztési módszerek „érzi” kondicionálás tényező. Ez vagy termelt olyan mennyiségben sejtek „szoptatás réteg”, „szövet - nővér” vagy foglalt szuszpenzió, ahol a sejtek tenyésztve a fenti, vagy nem vész egy nagy térfogatú közegben. Így, az a tényező, ami a sejtosztódás, a sejtek által termelt, de kis mennyiségben. Ez csak növeli a sejtek száma, amelyek ezt a tényező az, hogy nem eloszlatni nagy mennyiségű táptalajt vagy térfogatának csökkentésével a közeg, amelyben a sejtek szaporodnak van, akkor kap rá megosztani.
További fejezetek ez a rész: