4. melléklet
4. reakciók fehérje kicsapódását
Fehérjék oldatban a szervezetben, és rendre tárolt natív állapotban ellenállása miatt tényezők, amelyek magukban foglalják a felelős a fehérje molekulák és a hidrát burok körül. Eltávolítása ezek a tényezők vezet agglutináció a fehérje molekulák és kicsapásuknál esik ki. Csapadék A fehérjék lehetnek reverzibilis és irreverzibilis, attól függően, hogy a reagenseket és a reakciókörülményeket. A klinikai laboratóriumi gyakorlatban lecsapási reakciót használjuk, hogy elválasszuk az albumin és globulin frakciókat a vér plazma proteinektől, számszerűsítése azok jellemzői a stabilitás a plazmában, a fehérje kimutatása biológiai folyadékokban, és engedje el őket annak érdekében, hogy anélkül, hogy a fehérje-oldatot.
Hatása alatt a tényezők deponálása fehérjék kicsapódnak, de megszűnése után a (eltávolított) ezek a faktorok olyan fehérjék át ismét oldható állapotba, és megszerezni a natív tulajdonságait. Az egyik típusú reverzibilis kisózási kicsapódása fehérjék.
Sózás. Telített ammónium-szulfáttal kicsapott frakciót albumin fehérjék félig telített - globulin frakciót.
ÖSSZEFOGLALÁS reakció a kiszáradás a fehérje molekulák.
1) hígítatlan tojásfehérje;
2) A telített ammónium-szulfát;
3) NaOH, 10% -os oldat
4) CuSO 4. 1% -os oldatban;
5) desztillált vízben;
6) Ammónium-szulfát por.
Ennek során a meghatározást. A pour cső 30 csepp hígítatlan tojásfehérje és a hozzáadott azonos mennyiségű telített ammónium-szulfát oldat. Stirred a cső tartalmát. Készül félig telített ammónium-szulfát-oldat, míg a globulin frakciót kicsapjuk, és a tojásfehérje oldatban maradnak. Az utóbbit leszűrjük, majd elkeverjük egy por ammónium-szulfát, amíg leáll sót oldódás, a csapadékot - globulinok.
Irreverzibilis fehérje kicsapódását.
Irreverzibilis kicsapása fehérjék összefüggő mértékű károsodása fehérje szerkezetének (másodlagos és harmadlagos), és a veszteség a natív tulajdonságait. Ilyen változások okozhatnak fehérjék forrásig fellépés tömény oldatok ásványi savakkal és szerves savakkal, nehézfém sók.
Lerakódás forralással.
A fehérjék hőlabilis vegyületek és fölé hevítve 50-60 ° C-on denaturáltuk. ÖSSZEFOGLALÁS hődenaturációs van a megsemmisítése a hidrát burok törés stabilizáló protein gömböcske kötvények és telepítését a fehérjemolekula. A legteljesebb és gyorsan kicsapódik az izoelektromos ponton (amikor a felelős a molekula egyenlő nullával), mert a fehérje részecskék a legkevésbé stabil. Fehérjék A savas tulajdonságokkal rendelkező, lerakódnak egy gyengén savas közegben, és fehérjék alapvető tulajdonságait - egy gyengén lúgos. A erősen savas vagy erősen lúgos oldatok melegítéssel denaturálják a fehérje nem csapódik, mint a részecskék feltölthető és pozitív az első esetben, és a második - egy negatív töltést, ami fokozza a rendszer stabilitását oldatban.
1) tojásfehérje, 1% -os oldatban;
2) ecetsavat, 1% és 10% -os oldatok;
3) NaOH, 10% -os oldat.
Ennek során a meghatározást. A 4 számozott csövek 10 csepp öntjük tojás fehérje oldatot. Ezután az 1. kémcsövet forrásig melegítjük, az oldat zavaros lesz, de mivel denaturált fehérje részecskék hordoznak töltést, ez nem csapódik. Ez annak a ténynek köszönhető, hogy a tojás fehérje savas tulajdonságú (izoelektromos pontja 4,8), és egy semleges közegben negatív töltésű; A második fiolába 1 csepp 1% -os ecetsav oldattal, és az elegyet felforraljuk. A fehérje-csapadékot, mert feloldva azt megközelíti az izoelektromos pont és a fehérje elveszti a töltését (egyik tényező a rezisztencia fehérje oldatban); Egy harmadik fiola adunk 1 csepp 10% -os ecetsav-oldattal, és az elegyet felforraljuk. A csapadék nem képződik, mivel a erősen savas közegben fehérje részecskék szerez egy pozitív töltést (tárolt egyik faktor fehérje stabilitása oldatban); a 4. öntsünk 1 cső csepp nátrium-hidroxid-oldatot forrásig melegítjük. A csapadék nem képződik, mint a lúgos környezet növeli a negatív töltés a fehérje.
A lerakódás koncentrált ásványi savak.
Tömény savak (kénsav, sósav, salétromsav és mások.) Fehérjede eltávolítása miatt a tényezők a fehérje stabilitása oldatban (töltés és hidratációs héj). Azonban, amikor a feleslegben lévő sósav és kénsav, a csapadékot ismét denaturált fehérje. Feltehetően ez történik eredményeként feltöltés a fehérje molekulák és azok részleges hidrolízis. Azáltal, hogy feleslegben lévő salétromsavat torta oldódás következik be. Ezért meghatározásához kis mennyiségű fehérje a vizeletben salétromsav használt a klinikai vizsgálatok során.
1) tojásfehérje, 1% -os oldatban;
2) tömény kénsav;
3) koncentrált sósavat;
4) tömény salétromsavat.
Ennek során a meghatározást. A három csöveket öntjük 5 csepp koncentrált kénsav, sósav és salétromsav. majd hajlított csövet szögben 45 fok, réteges, óvatosan a falra az azonos mennyiségű tojásfehérje. Határán a két réteg a fehérje csapadék formájában jelenik meg fehér gyűrűk. Finoman rázza cső, a fehérje volt megfigyelhető az oldódási vizsgálati csöveket kénsav és sósav, in vitro fehérje oldódási salétromsavval zajlik.
Deposition szerves savak.
Triklór-ecetsav válik ki az oldatból fehérjék és szulfo kicsapódik nemcsak a fehérjéket, hanem a nagy molekulatömegű peptidek. Sulfosalicylic savat alkalmazunk, amikor meghatározzuk a fehérje a vizeletben.
1) tojásfehérje, 1% -os oldatban;
2) triklór-ecetsavat, 10% -os oldatban;
3) szulfoszalicilsav, 10% -os oldat.
Ennek során a meghatározást. A két cső vezették 5 csepp a fehérje oldatot. Egyikük adunk 2 csepp szulfoszalicilsav, és a többi - 5 csepp trifluor-ecetsavat. In vitro fehérje-csapadékot kiesik.
Csapadék fehérjék által nehézfémek sói.
Fehérjék kölcsönhatásban sói ólom, réz, higany, ezüst és más nehézfémek denaturáljuk és kicsapjuk. Azonban a túlzott bizonyos sók figyelhető kezdetben feloldjuk a képződött csapadékot. Ez annak köszönhető, hogy a felhalmozódása a fémionok felületén a denaturált protein és a megjelenése pozitív töltést a fehérjemolekula.
1) tojásfehérje, 1% -os oldatban;
2) réz-szulfát, 10% -os oldatban;
3) ólom-acetát, 5% -os oldatban;
4) ezüst-nitrát-oldatot 5%.
Ennek során a meghatározást. Három cső így 5 fehérjét cseppecske. Először 1 csepp ólom-acetát, a harmadik - 1 csepp ezüst-nitrát. Minden csövek kicsapódni. Ezután az első csőbe 10 csepp ezüst-nitrát - nincs a csapadék feloldódásának megkönnyítésére.