Meghatározása gonadotropin-releasing hormon a vizeletben, kutatási módszerek
Meghatározása gonadotropin releasing hormon a vizeletben lehetővé teszi, hogy tanulmányozza a gonadotropin agyalapi mirigy működés. Eljárás meghatározására gonadotropin hormonok vizeletben GS Stepanova alapján adszorpciója a molekuláris adszorbens - kaolin vizeletből savas közegben, alkáli elúciós a kaolin és a kicsapódását ötszörös térfogatú hideg acetonnal.
Ahogy javasolt eljárás Méregtelenítő hármas a csapadék mosása tiszta acetonnal, majd háromszoros mosással éter narkózisban. Napi gyűjtött vizeletben tartósítószer nélkül, hűtőben tároljuk. A hosszú távú tárolás nem kívánatos. A napi mennyiség 1 liter vizelet-ját tömény ecetsavval pH 4 (ha a napi vizeletmennyiség kevesebb volt, mint 1 liter, tetején fel desztillált vízzel 1 literre). A savas vizeletet adunk 50 ml 20% -os vizes kaolin szuszpenzióhoz, és az elegyet összerázzuk egy órán egy rázógépen. Kaolin és adszorbeált gonadotropin hormonnal összegyűjtjük egy centrifugacsőbe, egy 500 ml űrtartalmú, centrifugálást 10 percen át 2500-3000 rpm-en. A felülúszót, amely oldható mérgező anyagok, valamint szervetlen sókat eldobtuk.
Egy centrifugacsőbe kicsapására kaolint öntöttük 70 ml 0,1 n. nátrium-hidroxid-oldattal, a csapadékot eldörzsöljük, így egy homogén szuszpenziót. Ellenőrizzük a pH-t és, ha szükséges, beállítjuk ecetsavval és 10 liter. A szuszpenziót centrifugáljuk, 15 percen át 2500-3000 rpm-en. A centrifugálás után a felülúszót (lúgos extraktumot) öntöttünk a hengerbe dugóval 500 ml űrtartalmú, amely 350 ml hideg acetonnal. A hengert tegye a hűtőbe 18 és 20 óra között a teljes kicsapódását gonadotropinok, amelyek nem tartoznak a világosbarna pelyhek. Miután 18-20 óra átlátszó felülúszót acetonos fázist eldobjuk. maradékot acetonnal a csapadékot átvisszük egy centrifugacsőbe fiolába 25-50 ml, és centrifugáljuk 10 percig 3000 rpm mellett.
Ahogy Méregtelenítés mosási eljárást háromszor ismételjük a kaolin-aceton kicsapása 20-25 ml tiszta acetonnal, és háromszor 20 ml éterrel érzéstelenítésre. Éteres mosást követően, a csapadékot szárítjuk, vízfürdőben 30-40 ° nyomainak eltávolítása végett éterrel. Az ilyen szárított extraktumot hűtőszekrényben tároljuk 12 vagy több hónapig (tárolhatók ugyanabban csövekben, ahol mosást hajtottunk végre). A szárított csapadékot világosbarna por súlya 450-950 mg.
HCG extraktumot a bőr alá naponta egyszer három napig, éretlen nőstény fehér egereket évesen 20-22 nap, súlya 7-9 g 72 órával az első injekció után, az állatokat lefejeztük. Kimetszett a méh és a petefészkek, mentes boncoló folyadék, szűrőpapír, szárítjuk és gyorsan lemérjük torziós egyensúlyt. Ha szabályozni használata méhtömeg az érintetlen állatokban (5,6-7,8 mg). Mindegyik „alapvető” határozzuk meg az extraktum 2-4 hígításokat.
méh tömegének befolyása alatt gonadotropin növekszik 7-9 alkalommal. A vizsgálatok eredményei határozzák meg az egér-méh egység (NE). 1 MME azt a mennyiségét jelenti gonadotropin, amely képes növelni a méh súlya éretlen nőstény fehér egereket na 100% elleni kontroll.
A nők normális menstruációs ciklust, petefészek ürítésével gonadotropinok tartományok 7-174 MME, menopauza - 274 ± 11.5 MME.