Gyártása probiotikus bifiform - táptalaja a termesztés
A növekvő kereslet a probiotikus készítmények és élelmiszer szükségessé teszi, hogy új, hatékony és alacsony költségű termelés táptalaj bifidobaktériumok akkumláció. Termelés táptalaj kell nagy mértékű bakteriális növekedést a minimális időtartama a növekedési ciklus, hogy magas koncentrációban kaphatjuk meg életképes mikrobiális sejtek egységnyi térfogatú táptalajt (legalább 10 8 cfu / ml). Nyersanyagok a készítmény ilyen média legyen elérhető, megfizethető és technológiailag megvalósítható.
A bifidobaktériumok az elsődleges kiosztási szigorú anaerob. A szén-dioxid jelenléte lehet toleráns az oxigénre. A laboratóriumi kitenyésztést megszerezzék a képesség, hogy növekszik a jelenlétében mennyiségű oxigént, és magas tápértékű média - növekedni teljesen aerob körülmények között. Oxigén iránti érzékenységet, számos törzse bifidobaktériumok változhat, különbségek miatt a mechanizmus a fermentáció.
Sokszorosítás bifidobaktériumok oka az, hogy hatalmas mennyiségű növekedési faktorok. Sokféle igényel biotint, pantoténsavat, cisztein, riboflavin, purin és pirimidin bázisok, peptidek, amino-cukrok, koenzim-A, oligoszacharidok, néhány telítetlen zsírsav, és mások. Bizonyos törzsek igényel a szén-dioxid, ammónia, hisztidin. A szükséges aminosavak a lizin, prolin, szerin, alanin, aszparaginsav és a glutaminsav.
A szintetikus táptalajok bifidobaktériumok növekedését igényel vas, magnézium, foszfát, kálium és a nátrium-klorid, bizonyos esetekben - mangán.
Bifidobacteriumok termesztik, ami anaerob körülmények vagy csökkentése a redoxpotenciál a közeg, a tej, hidrolizált tej és a kazein-hidrolizátum, valamint a hepatikus húsleves kiegészített növekedési anyagok (-élesztő-autolizátum, kukoricalekvár, cisztein, stb). A sűrű tápanyag médiumok bifidobaktériumok alkotják a különböző kolónia lapos, félgömb, fényes, feszes, dönthető, van egy sötétebb központ, stb A telepek színe változik fehér és szürke és sötétbarna. A telepeket gyakran hasonlítanak egyfajta gabona hajdina vagy csonka gúla háromszög néhány média telepeket alakú lencse.
Jelenleg a felhalmozási Bifidobacterium longum biomassza felhasználása táptalajon különböző összetételű. Szolgálják alapján hidrolizátumok és kivonatok növényi vagy állati eredetű: Blaurock közepes májon alapuló húsleves, kukorica-alapú közegben laktáz kukorica kivonat közegben alapján a kapott húskivonat.
A termesztés bifidobaktériumok körben tekintik a máj- és cisztein közeg (Blaurock szerda).
Elkészítéséhez szerda Blaurock 500 g marhamáj, felszabadult az inak, darálják, öntsünk dupla mennyiségű vízzel, és 2 órán át forraljuk, majd szűrjük. A szűrlet kémhatását desztillált vízzel 1 000 cm, és készült 10 g pepton, 10 g laktózt, 100 mg cisztein-klorid 5 g és agar NaS1 1-2 pH 6,8-7,0. Azonban ez egy drága közegben, amely szűkös alkatrészei kevés alkalmas olyan ipari környezetben.
A tejiparban tenyésztésére Bifidobacterium ajánlott hidrolizátum és a tej környezet - GM tápközeget tartalmazó hidrolizátum címzett, nátrium-klorid, laktóz, L-cisztein-hidroklorid, pepton, agar-agar és víz. Hidrolizátum és a tej tápközeg a következőképpen állítjuk elő:
Előállítása hidrolizált tej. Normál vagy csökkentett zsírtartalmú tej (sovány tej) hozzuk egy forraljuk, és 2 percig forraljuk a, lehűtjük 14oC, beállítjuk pH 7,9 10-20% nátrium-hidroxid-oldattal.
Pankreatin adunk az arány 1 g / dm 3 előre feloldjuk kis mennyiségű melegítjük 44 ° C víz, keverjük, és tegye egy termosztáttal 40 ° C-on egy pamut dugón. Az első két óra keverés és a pH beállítása 7,9 végezzük 30 percenként, a következő két óra után minden órában. 4 óra múlva a kezdetektől hidrolízis hozzáadunk 1-2% kloroform, lezártuk gumidugóval, és tegye egy termosztátot. Miután 4 Chasa elegy pH-ját 4,4 30% -os ecetsavval kezeljük, majd keverés közben, legalább 15 percig, szűrőpapíron átszűrjük. Ready hidrolizátum kell tartalmaznia 200-300 mg /% az amino-nitrogén, átlátszó, reakciója annak semleges vagy gyengén savas.
Előállítása hidrolizátum, tejes közeg. Hidrolizált tej hígítjuk ivóvízzel az arány 1: 1. Egy kis mennyiségű hígított hidrolizátum olvasztott agar mennyisége 2,5 g per 1 dm 3 médium. A fennmaradó összeg a hidrolizátum oldatához hozzáadunk 28 g peptont és 3,5 g nátrium-kloridot, a keveréket melegítjük, hogy a hőmérséklet 80 ° C-on, majd összekeverjük az olvadt agar. Az elegyet pH-ját 7,5, visszafolyató hűtő alatt forraljuk 15 percig, majd hagytuk, hogy leülepedjen, a csapadékról dekantáljuk, nincs szűrés, alkotják forró desztillált vízzel, hogy egy előre meghatározott mennyiség és hozzáadunk 10,0 g laktózt, és 0,15 g hidrokloridot cisztein. Szerda öntjük csövekbe 10 cm magas oszlopot 3 és sterilizáljuk 112 ° C-on 30 percig, előmelegítő gőz által autoklávban 30 percig. pH 7,1-7,3 kész közeg.
Hidrolizátum, tej közeg széles körben használják az Ukrajna és más FÁK-országokban a növekvő biomassza bifidobaktériumok. Ez a környezet biztosítja bifidobaktériumok koncentrációban augusztus 10 - szeptember 10 cfu / ml. Ez elég egyszerű előállítani. Azonban GMR számos hátránya van. A fő közülük - lassú a bifidobaktériumok növekedését. Így, amikor növesztjük ezen a táptalajon bifidobaktériumok elér egy maximális koncentráció, 18-24 óra elteltével termesztés.
A izolálásához és tenyésztéséhez Enterococcus faecium számos szelektív tápközeg :. Base véres agar azid azidodekstrozny húsleves, KF-streptococcus agar, M-agar Enterococcusok streptococcus-szelektív agar stb véresagar kolónia enterococcusok kis, krémszínű vagy fehér, sima sima él, eltérő típusú hemolízis. Ez a törzs - homofermentatív, gáz nem kialakul a végtermék fermentációs glükóz és más szénhidrátok - tejsav. A enterococcusok hangsúlyos redutsiruya tulajdonságok: azok színtelenítjük és metilénkéket Lakmusz tej, reducyruut nitrátok nitritek.
Termesztésére Enterococcus faecium használt azid-glükóz táptalaj. A tápközeget szánt izolálására és tenyésztésére enterococcusok izoláljuk a vizsgálati anyagot. A közeget szelektív, és biztosítja preferenciális növekedését enterococcusok. Azid-glükóz táptalajt készítünk a következőképpen: előállítása a BCH. 500 g apróra vágott friss kicsontozott hús, zsír és ín öntjük egy zománcozott serpenyőben 1 liter csapvizet melegítjük 50 ° C-on, majd hagyjuk, hogy átjárja 12 órán át szobahőmérsékleten vagy 1 órán át 50-55 ° C-on Hús préselt, az extraktumot átszűrtük egy gézt egy réteg vatta, 30 percig forraljuk a koagulációs kolloid fehérjék és szűrjük kétszer (először egy pamut géz, a második - keresztül papírszűrő). Szűrés feltöltjük vízzel 1 liter, öntjük a lombikba, lezárjuk vattadugóval és sterilizáljuk 120 ° C-on 20 percig (-lombikot, lezárt cső tetején sapkák a papír). Füldugó kell szilárd, mert egy szűrő megakadályozza behatolását baktériumok a levegő után, a sterilizálás. A húsleves használható bármikor a készítmény a megfelelő média. Ha készek harcolni, a elősterilizálása szükségtelen. Amennyiben az a kívánatos, hogy egy nagyon nagy húsleves tápanyag infúzió során húst vizet adunk és megsavanyítjuk enyhén pepszin húslevest sósavval. A pepszin tovább hidrolizáljuk fehérjeszerű hús vegyületet, és az összeget a tápanyagok felszívódását a baktériumok megnövekedett. Hús helyettesítheti húskivonat, vesz neki, hogy 5 g per 1 liter közegben.
Hogy előkészítse a BCH, hogy 1 liter táplevest adunk hozzá 5,10 g pepton (pepton - első fehérje hidrolízis terméket egy nagy molekulatömegű), hogy növelje a kalóriatartalma a közeg, és 5 g nátrium-kloridot ahhoz, hogy hozzon létre egy ozmotikus aktivitása. A közeget melegítjük oldódásig peptont, folyamatos keverés közben. Ezután létrehoz egy semleges vagy enyhén lúgos közegben, hozzátéve, 20% -os Na2CO3 (kékülési nedves lakmuszpapír piros, annál fenolftalein mutatja alkalikus - hozzátéve, hogy a közeg egy porcelán tálba rózsaszín szín jelenik). Kényelmes használat bromtimolblau mutató. 1-2 csepp így egy üvegbottal egy porcelán tálba és a húslevest hozzáadott csepp. A semleges közegben bromtimolblau sötétzöld savas - sárga, alkáli - kék. Beállítása után a reakcióelegy ismét 5-10 percig, és melegítjük feltekeredett fehérjék megváltoztatásával a reakcióelegyet szűrőpapíron átszűrjük tisztázása nélkül a tápoldat vagy pontosította fehérje. Átlátszó BCH injekciós ampullákba töltjük, vattával lezárjuk, dugók és sterilizáljuk 120 ° C-on 20 percig.
A készítmény az azid-glükóz táptalaj. Legfeljebb 1 dm 3 BCH hozzáadunk 5,0 g pepton, 7,5 g glükóz, 2,5 g nátrium-kloridot, a komponenseket feloldjuk melegítéssel. Ezután lehűtjük, és a pH-t úgy állítjuk be, hogy a sterilizálás után 25 ° C-on volt (7,2 ± 0,1). Ezután, a bázis tápközeget sterilizáljuk áramló gőzzel (100 ° C-on) 30 percig. Az alapja közeget lehűtjük 50 ° C-on hozzáadunk 2,0 cm3 nátrium-azidot, és 2,0 cm3 oldatot brómkrezol-lila. A kapott közeget nem sterilizáltuk. Szerda tároljuk sötét és száraz helyen (4 ± 2) ° C-on nem több, mint 3 hónap. Közvetlenül felhasználás előtt, öntjük 5 cm3 steril csövekben.
Így a bifidobaktériumok és Enterococcus, más tagjaival együtt a normál bélflóra, működtetni és szabályozni számos szervezet funkcióit. A folyamat az élet alkotnak szerves savak, amelyek létrehozásához vezet, a normál bél közegben proliferációjának gátlására patogén, rothasztó és gázosítás bélflórát. Megkönnyíti a folyamat enzimatikus emésztés élelmiszerek, mint fokozza a hidrolízis fehérjék, fermentálható szénhidrátok, zsírok omilyuyut, oldott rost, serkentik a bélmozgást, megkönnyíti a sima kiürítését béltartalom.
Bifidobacterium longum ATCC 15707-ben tenyésztettük, az iparban, ami az anaerob körülmények vagy csökkentése a redoxpotenciál a közeg, a hidrolizált tej. Termesztésére Enterococcus faecium SF68 törzzsel használt azid-glükóz táptalaj. A tápközeget szánt izolálására és tenyésztésére enterococcusok izoláljuk a vizsgálati anyagot. A közeget szelektív, és biztosítja preferenciális növekedését enterococcusok.