A géntechnológia gének klónozására
Gene Cloning - A eljárás, beleértve a szelekció és amplifikáció specifikus gének a befogadó sejtekben, prokarióta és eukarióta. A sejteket, amelyek a kívánt gént lehet alkalmazni, hogy: a) a nagy mennyiségű fehérje gén által kódolt; b) nagyszámú, a gén egy nagymértékben tisztított formában.
gén klónozása folyamat több lépésből áll:
Előállítása 1. A kívánt gén:
a) emésztésével genomiális DNS restrikciós enzimekkel (endonukleázok, hogy hasítják a DNS-molekula egy meghatározott ponthoz);
b) kémiai szintézissel csak kis DNS-fragmenseket (mivel ismerve a szekvencia aminosav a fehérje molekula, mindig lehetséges, hogy meghatározzuk a nukleotid szekvencia, a kódoló DNS-fragmens szerinti fehérjét a genetikai kód). Így, kémiai szintézissel állítható elő a szintéziséért felelős gén a szomatosztatin;
c) a test sejtjeinek izolált mRNS-molekula, és a reverz transzkriptáz enzim (RNS-függő DNS-polimeráz egy) a védőcsoportot eltávolítjuk DNS másolatát a kívánt gén. Például, a sziget hasnyálmirigy sejteket izoláltunk mRNS információt hordozó szintézisét inzulin. És fertőzött sejtek vírusokkal, izolált és RNS, amely információkat hordoz a interferon szintézisét.
2. Írja be a kiválasztott vagy kapott DNS-fragmenst a DNS-vektor-molekula - megszerzése rekombináns DNS-t. Vektor - egyfajta molekuláris „taxi”, amelyek képesek átvinni az idegen DNS bakteriális sejteket, hogy ez lehet reprodukálni ott. Két fő típusú vektorok bakteriális plazmidok (gyakran felelős ellenállás két vagy több antibiotikum) és hibás mérsékelt (képes végrehajtani transzdukció) bakteriofágok.
A kapott plazmid-DNS restrikciós enzimmel egy szigorúan meghatározott helyen. Hasítása után a végei, mint a végek klónozásához a kiválasztott DNS-t terminális transzferázzal „doraschivat” úgy, hogy a végrészek a plazmidok beágyazott komplementer DNS (vagy egy másik mondani, hogy „ragadós”). Továbbá, mivel a kölcsönhatás „ragadós” szekvenciák és a speciális DNS-ligáz enzimmel hajtjuk térhálósító (ligáció) és a plazmid DNS-inszertjének DNS. Az így kapott új cirkuláris DNS-molekula, azt mondta, hogy a rekombináns DNS-t.
3. Írja be a rekombináns DNS-t a befogadó sejt. A sejteket a kiválasztott gén-klónozás céljára lehetnek mind pro-, mind eukarióta. Leggyakrabban erre a célra használt baktériumok, mert a kultúra nem egy nagy probléma (E. coli, B. subtilis és mások.). De ha a gén izolálását az 1. módszerrel, meg kell klónozva eukarióta sejtek, mint például élesztő. Bevitele a rekombináns DNS-t úgy végezzük, hogy az átalakulás (bakteriális sejtfal permeabilitását növeli a híg kalcium-klorid oldatot) vagy transzdukció (abban az esetben alkalmazásra bakteriofág vektor).
4. a transzformált baktériumok. Mivel nem minden a bakteriális sejteket transzformálunk a reakcióeleggyel, szükséges, hogy az olyan sejtek szelekcióját, amelyek a rekombináns baktériumot. A kiválasztás általában azon a tényen alapul, hogy a plazmidok rezisztenciát biztosítanak bizonyos antibiotikumokkal, és így a baktériumok a plazmidot tartalmazó fog szaporodni, jelenlétében a megfelelő antibiotikum.
5. termesztése a transzformált sejtek. Tenyésztve kijelölt cellák szükséges biomassza növekedés erősítésére gének recipiens sejtek.
6. A fehérje izolálása vagy géntermék az inszertált DNS-izolálás A tisztított plazmidokat.
Előállítása monoklonális antitestek (mAb)
Az alapvető módszerek a modern sejt általában - hibridizáció (vagy fúziós) és rekonstrukciós a sejt. sejthibridizáció módszer lehetővé teszi, hogy összekapcsolják a sejtek még egy teljesen más mikroorganizmusok, valamint növényi sejtek, az állatok és az emberek.
A sejtfúziót elvégezték, vagy kezeljük a sejteket polietilénglikol, vagy az intézkedés rövid elektromos impulzusok. A kapott hibrid sejtek - hibridómákat - van két kromoszómák és tulajdonságait egyesítik mind a „szülő” sejtek.
1974-ben, Keller Milstayn és hibridizációs normál limfociták lépéből immunizált egér egér mielóma sejtekkel. fúziós termékét antitesttel a tumor sejtek - termelő hibridómákat az antitest egyik specificitás (egyetlen antigén determináns) és korlátlanul képes in vitro növekedésének.
ICA széles körben alkalmazhatók diagnosztizálás sok bakteriális és vírusos fertőzések (hepatitis B. influenza, herpes, brucellózis); meghatározására szöveti antigénekkel, receptorok és közvetítők limfociták; a diagnózis és a kezelés a rosszindulatú daganatok (ICA létre, amely reagálni specifikus Ar tüdőrák, mellrák, vastagbél, hasnyálmirigy).
Témák jelentések képzési konferencia
1. A történelem a biotechnológia fejlődése.
2. Biotechnológia és környezeti problémák megoldásával.
3. Biotechnológia: új lehetőségek diagnózis és kezelés.
4. Új orvosi készítmények.
5. lehetőségei és kilátásai géntechnológia.