vírus replikációt sejtekben kultaruh
A vírusok szaporodását a sejt kultaruh. Sejtkárosító hatása vírusok
A választás a sejtvonalak. optimális növekedés a vizsgált virus, ez rendkívül fontos. Egyes vírusok lemásolni gyakorlatilag bármilyen sejtvonal és éppen ellenkezőleg, ismert sejtvonalak, amelyek támogatják a vírusok szaporodását a különböző típusokat. Azonban sok vírusok képesek szaporodni a szigorúan meghatározott típusú, bár egyes esetekben ismételt részeket a vak képes alkalmazkodni, hogy más típusú.
Sejttenyészeteket általában használt három fő célja: 1) az elsődleges vírusizolálási; esszenciális ebben az esetben a magas érzékenységű sejtvonalak, valamint határozott citopátiás hatást (CPE); 2) vakcinák előállításában, ahol a fő követelmény a magas vírushozam, és 3) a biokémiai vizsgálatok, amelyekben előnyösek a folytonos sejtvonalak képesek növekedni szuszpenzióban. Ezek ugyanabban a cellában, de, mint egyrétegű tenyészetben lehet használni, hogy meghatározzuk a fertőzőképesség; néha erre a célra alkalmas primer sejttenyészetekben.
A sejteket. termesztésére használt vírusok patogén az emberekre, ismertetnek Lennet és Schmidt (1969), és a munka Andrews és Pereira (1972) információt tartalmaz a kultúrák használt összes állati vírusok. Sok kutató dolgozik, különleges, nem szabványos sejtvonalak, a leginkább alkalmas a vizsgált vírus velük.
Sejtkárosító hatása vírusok
Sokszorosítása sok vírus sejttenyészetben lehet kimutatni egy sor biokémiai módszerekkel azonosítani intracelluláris virális makromolekulák vagy virionokat. Ezen kívül, több durva módszerek, amelyek széles körű alkalmazásra találnak a diagnózis vírusok; Néhány ilyen módszereket használnak a gyakorlati munkát.
A citopátiás hatás (CPE). Sok, de nem minden vírus sejtek elpusztítására, ahol szaporodnak, és az újonnan alakult virionok elfog egyre több sejtek fertőzött sejtréteg fokozatosan felhalmozódnak változások mutathatók szövettani módszerekkel. Ezeket a változásokat nevezik sejtkárosító hatás (CPE) és így azok a vírusok - citopatogén. A legtöbb esetben a CPE látható rögzítetlen, festetlen kultúrák kis nagyítású mikroszkóp.
Mivel az áttetsző sejtek, törölni kell, és az írisz részben zárt, így nagyobb kontrasztot kondenzátor. Némi tapasztalat, meg lehet különböztetni többféle CPE tenyészetekben élő, de ahhoz, hogy a részleteket lásd például zárványtestek vagy syncytiákat szükséges fixálás és festés az egyrétegű. Az a vírus antigének kimutatását a sejttenyészetben széles körben használt fluoreszcens antitest festéssel, az alábbiakban leírtak szerint.
CPE elengedhetetlen a diagnózis és izolálása a vírus beteg emberek vagy fertőzött állatok esetében. Egyes vírusok könnyen szaporított sejttenyészetekben az elsődleges kiválasztási. Kezdetének idejét citcpata különböző változások részben attól függ, hogy hány virionok, amely tartalmazta a mintát, hanem sokkal nagyobb mértékben határozza meg a szaporodási ráta a vizsgált virus. Például, enterovírus, és a herpes simplex vírus, azzal jellemezve, hogy a rövid latens idő és nagy kitermeléssel, általában okoz kimutatható CPE-t 24-48 óra, és az egyrétegű teljesen megsemmisült után körülbelül 3 nap.
Azonban, citomegalovírus. rubeola vírus, és néhány lassú növekedésű, adenovírusok nem okoznak CPE néhány hét alatt. Mivel ez idő alatt a sejttenyészeteket kitéve a nem-specifikus degenerációja fertőzött sejteket és a táptalajt kell mozgatni a friss egyrétegű. Miután az ilyen „vak átjáró” gyakran nyilvánul CPE, amely kapcsolatba hozható a növekedés a vírus titer, vagy szelekciós opció jobban alkalmazkodik a kultúra sejteket.