Vírusizolálás anyagok
Vírusizolálás anyagok. Izolálása vírusok csirke embrió
Leggyakrabban anyagokból készült izolált vírusokat sejttenyészetekben és csirke embriók, ritkán fertőz kísérleti állatokban.
Vírusizolálás sejttenyészetekben. A legtöbb esetben az emberi és állati vírusok izolált primer tenyészeteiben az emberi embrionális vese és a majom, vagy transzplantált sejtek tenyészeteiben HeLa, Hep-2, KB, Vero, FL. Ebben az esetben a vizsgált anyag megfertőzni csak azok, amelyekben egy kis nagyítású mikroszkóppal megfigyelhető jó egyrétegű sejtekhez. 30-60 perc múlva a kapcsolatot egy egyrétegű anyag kerül eltávolításra, és újra bevonva tápközegben, forgalomba néhány napig ultratermosztát.
A vírus replikációt sejtekben bírálják el citopatikus változások egyrétegű vezet kerekítési és sejt zsugorodás (Picornaviridae), fokozott lebontására (herpeszvírusok), gyakran kezdeti proliferáció (poxvírusok). Pikorna-, herpesz, sok toga- és bunyavírusok, elpusztítja az egyrétegű plakkot képezni alatt agar-bevonatú ( „steril foltok”), melyek mindegyike egy izolált telep vírus.
Során a szorzás a néhány vírus kialakítva többmagvú sejtek (paramikso- és herpes vírusok). Számos vírus a citoplazmában és sejtmagban alkotnak intracelluláris zárványok alakja kerek. Onkogén vírusok okozzák az átalakulás a normál sejtek malignus is, amelyek gyakran megelőzik a kromoszomális változások a nucleus egyrétegű. A fertőzött sejtek fertőző vírusok általában tartalmaznak egy nagyszámú éretlen virionok és antigének detektálása fluoreszcens antitestekkel.
Ha a vírusok nagy méretűek és szorozni, osztott ki a sejtekből, a tartalmát a sejtréteg merítéssel mikroszkóp, mint már említettük, talált elemi testek.
vírusreprodukciós. a nem-citopatikus hatás (CPE) segítségével állítható be gemadsorbtsii reakciók, nyilvánul `clustering adunk eritrociták fertőzött sejtek jelenléte miatt a legtöbb vírus hemagglutinin (mikso- és Togaviridae). Hemagglutinálást látható szabad szemmel az üveglemezen, hozzátéve, egy csepp folyékony tenyészetet megfelelő eritrociták. Például, miksovirusy hemagglutinációs humán vörösvérsejtek, az 1. vércsoport, és a 60% Togaviridae - erit liba.
Számos vírus lehet azonosítani a jelenség a beavatkozás, azaz. E. Az a képesség, hogy gátolják CPD egy másik vírus (madár leukózis vírus zavarja Rous-szarkóma-vírus). Ugyanakkor azonban meg kell, hogy megszüntesse a jelenség a autointerferentsii.
Izolálása vírusok csirke embrió. Vírusizolációra a felhasznált anyagok 7-11 napos embriók fehér csirke. Fertőzés előállított a chorioallantois membrán (HAO) a allantois és amnion üregek, szikzacskó és az embrió test. A választott módszer a fertőzés függ az adott ingatlan a vírus.
Mielőtt megfertőzheti a tojást helyezzük lámpázást és életképességének meghatározására az embrió, és a határokat a légzsák, az alkoholt jóddal és kagylók rajta. A leggyakoribb módszer bevezetésének anyag Hao. Ebből a célból, az oldalán a légzsák ollóval, és óvatosan távolítsa el a héj repesztési skorlupnuyu héj. Mivel a levegő nyomása HAO mosogatók és felvisszük egy fecskendő 0,1-0,2 ml vizsgálati anyagot. HAO lyukasztó tű és ellepje 1-2 mm, az azonos mennyiségű anyagból fertőzött allantois üregbe.
A bevezetése az anyagot a magzatvíz üreg keresztbe pofái csipesszel finoman Pierce horionallantois, elfog amnionhártya, és a bevezetés után felemelkedik az üregekben ml 0,05-0,10 anyagot lesüllyed.