Az embrionális őssejteket (ES) sejtek áttekintéshez
Embrionális őssejtek (ES sejtek): általános információk
Az embrionális őssejtek (embrionális őssejtek): differenciálatlan sejtek származnak egy korai embrió, amely képes fenntartani egy tartós replikáció és átalakulni a különböző differenciált sejttípus. Az őssejtek szolgálnak állandó forrása az új sejtek. Amikor át a másik korai embrió azokat kombinálni lehet a belső sejttömeg az embrió, és tartalmazza a fejlesztési folyamatban, így a kiméra állatoknak. Lehetnek benne van a sejtek számát a germinális módon.
Primer tenyészeteit ezek a sejtek nyert blasztocita sejtek (belső sejttömeg), vagy a primordiális csírasejtek korai posztimplantációs embriók. Amikor nőtt a tápréteg embrionális fibroblasztok PGC tárolt differenciálatlan állapotban 3 hónapig. legfeljebb 1 éves. Azonban ismételten lehet fagyasztani vagy felolvasztani anélkül, hogy elveszítené a képességét, hogy különbséget. ESC kiszabott blasztociszta ürege (hólyagcsíra üreg), megtartják totipotenciája és részt vesz a kialakulását szinte minden embrionális primordia és szervek, a fejlődő embrió. Az eredmény egy kisállat - kiméra - álló sejt-klónok két különböző típusú: az eredeti szülői sejttel genotípus és ESC. Ha ezek a sejtek különböző, például a szőrzet színét gének, állati kiméra - lesz egy keresztirányú vagy foltos elszíneződést. Az összes állat, egymástól függetlenül kapott bevezetésével az azonos genotípusú embriók azonos sejt-vonal lenne különböznek egymástól a jellege szerint foltosság, mint az összes kimérák különböznek a készlet sejt-klónok, amelyek a fejlett és megkülönböztetni a kiszabott embrió ESK . A kiméra állatok, amelyekben hESCs differenciálódnak csírasejtek és az adott okot, hogy egy teljes körű érett ivarsejtek is folyamatosan adják tovább utódaiknak a genetikai információ az ESC. Ezeket az állatokat néha csíra adók. Keresztezzük őket a vad típusú egerek utódainak lesz heterozigóta mutáns gének ESC t. E. Will mutációt hordoznak a haploid állapotban minden sejttípus. Ez egyaránt vonatkozik a mutációkat korábban mesterségesen bevitt PGCs. Keresztezésével ezek heterozigóta, akkor kap az állatok homozigóta egy adott mutáció. Persze, ez utóbbi csak úgy érhető el abban az esetben, ha a mutáció következtében nem halálos a homozigóta állapotban az állatoknál ez a faj.
Az a képesség, hogy végezzen kiválasztására vonatkozó mutáns klónok vagy transzgenikus PGC és csak ezután használni őket, mint a sejt vektorokat már széles körben használják a genetikai modellezés. Kezdetben, az erre a célra hESCs kezeltük különböző mutagén (etilnitrozomochevinoy) szelektált sejt klónokat a mutációt hordozó a kívánt gént, és majd őket, hogy létrehoz kimérák injekcióval Gardner. Ily módon kaptuk egérmodei Lesch-Nyhan-betegség - mutációt gipoksantinfosforiboziltransferazy [Hooper M. et al. 1987],.
Esetei stabil integrációját exogén DNS-t könnyen azonosítható, amikor transzfektáltuk egy olyan plazmiddal, vagy vektor, amely egy szelektálható marker gént. Leggyakrabban használt prokarióta marker gén neo. Jelentést sejtek neomicinre. Azok a sejtek, amelyekben az integráció bekövetkezett ilyen plazmidot a kromoszomális DNS-t képez stabil klónokat, amikor tápközegben növesztve G418, neomicin tartalmú, míg az összes többi sejt klón rontja ilyen körülmények között.
Vegyük a 4.5 nap blasztociszta. A belső sejttömeg a blasztocita hozott egy sejtréteg, amely a kínálat mátrix a mellékletet, és növekedési faktorok (úgynevezett feeder, feeder sejteket).
A növekedési faktorok támogatja a pluripotens őssejt karaktert. gátolva azok differenciálódását. Ilyen körülmények között, a belső sejttömeg sejtek szaporodnak megfelelő időpontban azt eltávolították mikropipettával.
Diszperziós eredetű sejteket, és a sejteket friss tápréteg. Colonies mikroszkóp alatt vizsgáltuk, és a kiválasztott azok, amelyek egy jellegzetes morfológiája ES sejt telepek Megfelelő. reszuszpendáltuk, és a sejteket egy tápréteg. Olajos anyagként kolónia ES-sejtek megtartják pluripotens és termelésére képes kiméra állatoknak.
Csináljuk egy kísérletet, ábrán vázlatosan ábrázolt. 6.
Vegyük eredetű embrionális őssejtek egerekből származó homozigóta fekete juttassunk az egér blasztociszta, homozigóta az allél albínó.
Kitűzte a blasztociszta álvemhes egérrel, és hagyja őt szülni utódok. Az utódokat kapunk kiméra egerek, amelyek tartalmazzák a hasonló sejtek - a leszármazottai fekete homozigóta és a fehér leszármazottai sejtek homozigóta. Megértették? A bőr ilyen egereket foltos. Ez a hely a jele kimerizmust.
Keresztezett kimérák kapott homozigóta albínók. Az utódok kap egy bizonyos számú fekete egerekben. Ezek a fekete egerek kapott eredményeként a tényt, hogy néhány podsazhennyh embrionális őssejteket egy fekete egér tartalmazza azokat az információkat tartalmaznak a csíravonal-sejtek az utódok. Ez egy nagyon fontos eredmény, azt mutatja, hogy ez a megközelítés lehet használni, hogy a transzgenikus állatok.
Most már használhatja az ES-sejtek érdekében idegen DNS-nek azokat. Ezt meg lehet tenni a különböző módon, például az elektroporáció vagy a retrovírusok által. Általában használja az elsőt. És akkor ez azoknak a sejteknek választottak ki, melyek stabilan tartani, és megkapta az idegen DNS. Miután kiválasztotta a kívánt sejtek in vitro, bemutatjuk azokat az egér pontosan úgy, ahogy mondták, hogy csak. Transzdukált sejt klónok marad pluripotens jellegű.
Már világos, hogy mi forradalmasították az egész folyamat? Ahelyett, válasszuk a transzgenikus állatok, mi selektiruem őssejtek segítségével a jól fejlett szomatikus sejt genetika. Lásd transzgenikus szervezetek :. használata ES sejtvonalak és EK