Állandó sejtvonal tenyésztéséhez vírusok
Állandó sejtvonal növekvő vírusok. Folyamatos termesztése vírusok.
Állandó (folyamatos) sejtvonal - képes sejtet szubkultúrát a testen kívül korlátlan számú részeket. lehetetlen meghatározni a pont, amikor a kultúra lesz stabil a tudásszintet a viselkedését a tenyésztett sejtek, azaz a. e. megszerzi a képességet, hogy nő a végtelenségig. Csak a tapasztalatok alapján a humán fibroblaszt sejtekből azt mutatták, hogy a kultúra legyen szubkultúrát legalább 70-szer időközönként körülbelül három nappal előtte állandónak tekinthető (folyamatos) sejtvonal.
Minden kultúrában korlátlan szaporodási képességük ( „halhatatlan kultúra”) fel kell hívni az állandó (folyamatos) vagy stabil vonalak. A virológia irodalomban széles körben elterjedt, a „folyamatos sejtvonal”, arra utal, hogy a sejtvonal képes végtelen növekedési a testen kívül.
Kevesebb sejttranszformációs jelenti visszafordíthatatlan genetikai változásokat. azzal jellemezve, növekedési jellemzőinek megváltoztatása a tenyésztett sejtekben. Az átalakulás teszi a sejtek halhatatlan, és kevésbé függ a tápanyag növekedési faktorok és geometriai paramétereit. Változások a növekedési tulajdonságok megváltozásával jár a közlekedési tápanyagok a sejtmembránon keresztül, és az egyik adaptív funkciók, amelyek lehetővé teszik a sejtek proliferációra körülmények között kedvezőtlen a nem transzformált szülői sejtek.
A változás kíséri elvesztése sejtmembrán felületi protein (150 kDa) és a változás a antigén tulajdonságokkal. A fő előnye a transzformált sejtek - a képesség, hogy végtelen szaporodási és javított növekedési tulajdonságok. A transzformált sejtek képezhet tumorok immunológiailag toleráns állatok. Emiatt az átalakulás néha tévesen egyenlőségjelet a rosszindulatú. Primer sejttenyészetek, diploid vonal és a transzformált sejtek széles körben használják a virológiai gyakorlat volt az alapja a teremtés nagyszabású sejtkultúra rendszerek, és a vakcinák előállításához.
Ez viszont, szükséges javítása művelési módszerek. szervező merchandising környezet és felszerelések sejttenyészetben.
Beszerzése állandó vonalak nagy mértékben növeli a kutatás területén a sejtbiológia és a virológia. fennállt annak a lehetősége, hogy megszerezze a mutáns és a hibrid sejtvonalak, hogy megnyitotta a kilátásba az új szubsztrátok alkalmas a termesztésére vírusok azok alapján. Normál sejtek a szervezet altenyészetet kezelni korlátozott számú járatok, majd a proliferációt megszűnik, és ezek általában meghal. Ez általában akkor fordul elő, miután körülbelül 50 generáció, ha a sejteket származó szövetekben a felnőtt szervezet.
Csak néha képesek tovább szaporodni tenyészetben végtelenségig, egyre úgynevezett konstans-transzformált sejtvonalak. Transzformálása sejtek tenyészetében polietiologichesky jellegű. Spontán átalakulás sejttenyészetek normális szövetek - viszonylag ritka esemény. A frekvencia ilyen transzformációk növelhető sejtjeinek kezelésével mutagénekkel vagy bizonyos vírusok.
Minden állandó sejtvonal. ellentétben a kultúrák normális sejtek korlátozott élettartam, átalakítják, t. e. módosították több alapon, mindenekelőtt az, amely „halhatatlanság”. Az a képesség, hogy szaporodnak tenyészetben korlátlanul hosszú, általában együtt járó aneuploidok kariotípusok. Egyes sejtvonalak (például fibroblaszt hörcsög - BHK-21), de nekik van a legjobb diploid kromoszómaszám, de a kariotípus láthatóan megváltozott. Más kritériumok átalakulás (karcinogenitás, kontakt gátlás környezetvédelmi követelmények) nyilvánulnak meg a különböző vonalak másképp.
Mindegyikük származnak spontán vagy indukált transzformációja sejtek a szervezetben, vagy a tenyészet. Sok tumor állatokból származnak, bár nem mindig a sejt által képzett vonalak explantáció tumorsejtek in vitro. Sejtvonalak származik közvetlenül a tumoros szövet (vagyis, átalakult a szervezetben), gyakran megtartják specializált funkciók, mint a képesség, hogy készítsen néhány olyan enzimet, hosszabb ideig, mint transzformált tenyészetben különböző módszerekkel (fizikai, kémiai, virális ágensek ). A frekvencia rendszeres vonalak változik a különböző emlősfaj.
egér sejtek spontán az átalakulás sokkal gyakrabban, mint az emberi sejteket vagy más emlősök. Ezek a különbségek tűnnek kapcsolatos egyenlőtlen stabilitását kariotípus különböző állatfajok.
sejt szubkultúra. majd a kialakulását egy állandó sejtvonal, sikeresebbek voltak, amikor az elsődleges egyrétegű tenyészetet készítünk, inokulálunk mechanikusan darált szövetben, mint a szuszpenzió tripszinezett sejtek. Talán ez annak köszönhető, hogy csökken a fehérje mennyiségének a felszíni struktúrák sejtek eredményeként tripszin kezelés. Átalakításához sejtek gyakran vírusok. Újszülött hörcsög vesesejtek (BHK), például, könnyen transzformált vírus vagy poliomavírus SV-40, és hörcsög embrió sejtek - es típusú 3 ló. Az utóbbi esetben, a sejtvonalak expresszálják a vírus-specifikus fehérjék, de nem termelnek sem virális utódokat.
Transzfekciója kultúra humán embrionális vesesejtek onkogén vírus SV-40 megnövekedett in vitro tenyésztési szezon 15-20 70-90 generációk. Populációból származó sejtek képesek különbséget tenni két állandó vonal, szinte jelek nélkül az átalakulás. Transzfekciója hepatociták Normál patkányok DNS vírus SV-40, egy sor sejtvonalak SV-40 májsejtekben. Használata rekombináns vektor SV-40 adenovírus kapott eltérő tulajdonságainak állandó vonalak emberi csontvelő-kötőszöveti sejtek expresszáló nagy T-antigén a vírus SV-40. T Retikuloendoteliózis vírustörzs indukált transzformáció csirkék kultúrák májsejtek, lép, csontvelő, és a csecsemőmirigy csirke embriókat és fiatal csibék. A túlnyomó többsége a transzformált sejtvonalak kiválasztják a vírus okozza a halálos retikuloendoteliózis 1-2 napos csibék.
Az előnyös virális genom integrációs helyek voltak törékeny helyek az emlős genomban, hogy az okozza, úgy tűnik, a szerkezeti és funkcionális jellemzői. Az eredmény a kölcsönhatás a virális és celluláris genom lehet megszerzése a kromoszóma-rendellenességek és a sejt kapacitás korlátlan szaporodásra.
Hosszantartó tenyésztés sejtvonalak módosíthatja bizonyos tulajdonságokkal, így fenntartani a kezdeti tulajdonságok rasplodki sejtek, ezek alacsony hőmérsékleten tároljuk, és periodikusan vett szaporításra és a gyakorlati felhasználásra. Például, számos sejt ciklus termesztés BHK-21 egyrétegű tenyészeteket is jelentősen változhat az eredeti tulajdonságait. Normál egyenletes növekedési fibroblastopodob-CIÓ sejtek helyettesíthető növelésével epiteliális-képző sejtek és klaszter rétegek. Szérum tulajdonságai is függ a sejtnövekedés sebességétől és az érzékenység különböző típusú és törzsek a FMD-vírus.
A legtöbb ilyen változások jellemzőek más transzformált sejtvonalak.