Színező baktériumokat grammban
A mikrobiológiában széles körben alkalmazzák a baktériumok színezésére szolgáló különböző módszereket. Természetesen lehetőség van, hogy a megfigyelés nélkül e kifinomult manipuláció, de akkor, amikor a mikroszkóp szinte nem látni semmit, mert a törésmutatója baktériumok közel együttható fénytörési folyadék, amelyben élnek. Ahhoz, hogy a baktériumok, vagy azok egyes belső vagy külső szerkezete egyértelműen kitűnjön a háttérben, használja a különböző színek. Ma megnézzük az eljárás Gram-festés, kidolgozott 1884-ben a dán orvos Hans Christian Gram.
Az eljárás végrehajtása a mikroorganizmus kultúrájának pontos feltárásával kezdődik. Ezt alkalmazzák az üveg csepp fiziológiás sóoldatot, ahol mikrobiológiai hurok, tapasztalt web be az égő lángja készült vizsgált baktérium. Ez lehet egy pillanatnyi kaparó vagy pálcikát, és előre felnőtt kolónia. Minden lépést aszeptikus körülmények között kell végezni, lehetőleg az égő lángterében. Bizonyított eljárás eljárás végrehajtására célja, hogy tükrözze a sorozat, hogy a szükséges anyagokat festés és elmagyarázni a szerepét minden egyes szakaszában.
A technika lényege a baktériumok vizuális szétválasztására két csoportra Gram-pozitív és Gram-negatív. Az első, ennek eredményeképpen a differenciálódás mikroszkóp alatt kékes vagy ibolyaszínű, az utóbbi pedig rózsaszínű. A fő különbség közöttük az, hogy a gram-negatív baktériumok a komplexabb héjszerkezet miatt a festéket rosszabbnak érzékelik. Különösen a sejtfal tetején egy további membrán van, amely megakadályozza a felesleges anyagok bejutását. Ebben az esetben a peptidoglikán réteg vékonyabb, mint gram-pozitív baktériumoknál. Ezek a tulajdonságok lehetővé teszik számukra a patogenitás kinyilvánítását. Az orvosi mikrobiológiában a gram-pozitív baktériumokat alig tanulmányozzák, mivel nagyon kevesen képesek betegséget okozni.
Károsodása az üveg kenet levegőn szárítjuk, vagy magasan az égő lángja, hogy megakadályozzák forráspontú fehérjedenaturációja, majd rögzíteni egy láng ben végzett rövid idő alatt. Ily módon a mikroorganizmusok elpusztulnak és megbízhatóan tapadnak az üveghez.
Most jön a festék alkalmazásának ideje. Először is a szín gentianviolet. Ez a trifenil-metán-sorozat fő festéke: penta- és hexametil-parazanilinek kis mennyisége, dextrin és fuchsin keveréke. A gyógyszert nemcsak festékként, hanem antiszeptikus anyagként is alkalmazzák. Az antimikrobiális tulajdonságok a bakteriális burkolatokon keresztüli nagy permeabilitással és az oxidációs redukciós folyamatoknak való kitettséggel magyarázhatók.
A színezés 1-2 percet vesz igénybe, majd a gentianviolet lecsapódik és a mintákat Lugol oldatával tölti. Szerintem ez az anyag mindenki számára jól ismert - a torkát anginával kezelik. A Lugol oldata a jód és a kálium-jodid kombinációja, ami jó vízoldékonyságot biztosít. A baktériumok sejtfalain áthatolt gentianviolet-darabokkal a jód erős kék-ibolyaszínű színt alkot. A reakció is 1-2 percet vesz igénybe.
Most ideje differenciálás, azaz, az elválasztás a Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumok. Erre üveg kenetet többször merítettük tartály 96% etil-alkoholt, amíg csurom egyenlő színű egy alkohollal egy pohár. Ebben az eljárásban, a kék-ibolya komplex mossuk ki a falak a Gram-negatív baktériumok, fennmaradó csak a falak, Gram-pozitív.
A negatív baktériumok nem jelennek elszíneződött, a kenetet vízzel mossuk, és további vizes fukszin festettük ugyanazzal a mágikus 1-2 perc. Mivel a fal a Gram-pozitív baktériumok már egy festéket bíbor nem színezett. A Gram-negatív baktériumok rózsaszín színt kapnak. A kenet végül vízzel mossuk, szárítjuk, és a készítmény mikroszkópiára kész.
Gram-negatív baktériumok (x1600):
