Mikropreparátumok festése flagellára, kapszulákra, spórákra és szemcsék szemcsésére
Mikro-készítmények festése a flagella kimutatására,
kapszulák, spórák és szemcsei
A flagella azonosítása
A baktériumok flagellája nagyon vékony és könnyen leválasztható. Ezért csak speciális festéssel vagy elektronmikroszkóppal detektálhatók.
A baktériumok jelölése a hagyományos festési eljárásokkal anilin festékekkel történő festés alkalmazásával lehetetlen.
A flagellum általában akkor válik láthatóvá, ha előkészítjük a készítményt mordantal, majd festjük. A kivágott gyógyszer könnyebben észleli a színt, de ami a legfontosabb: a flagella, amikor letétbe helyezik őket, a mordánsok megnövekednek és láthatóvá válnak mikroszkopikusan.
A flagella színezésének különböző módjai vannak, de minden egyes esetben a mikrobák egyedi tulajdonságaitól függően egyik vagy másik módszert kell választani.
A flagella sikeres színezéséhez a következő feltételeket kell figyelembe venni:
1. A tárgyak és a fedőüvegek tisztaságának ideálisnak kell lennie.
2. A készítményt friss agar szuszpenzióból kell előállítani, amely nem olyan idősebb, mint a napi, és bizonyos fajok (vibrio, szénbacillus) legfeljebb 12 órán át. A vetőmagsorból (közelebb a kondenzvízhez) vett anyag egy része, ahol több nedvességet viszünk át egy kémcsőbe 1-2 ml steril csapvízzel. A csöveket szobahőmérsékleten 30-60 percig inkubáljuk, majd a bakteriális szuszpenziót átvisszük egy csepp steril csapvízbe vagy sóoldatra a fedőlapra. Amikor az anyagot a fedőlapra terítik, ügyelni kell arra, hogy ne mechanikusan megrongálják a zászlórudat, vagy távolítsák el őket a baktériumok testétől.
A kenetnek vékonynak kell lennie, hogy az egyének elkülöníthetők egymástól.
Az üvegen lévő vizet vékony rétegben kell eloszlatni, hogy felgyorsítsa a gyógyszer szárítását és csökkentse a zászlóveszteséget.
Leggyakrabban Leffler (Loffler) módszerét alkalmazzuk a flagella festésére. Festési módszer:
1. Szárított és rögzített keneten öntsük át a mordant olyan mennyiségben, hogy lefedje a fedő üveg teljes felületét, és szobahőmérsékleten 3-5 percig álljon.
2. Ezt követően a készítményt gondosan és alaposan mossuk folyó vízzel.
3. A fchsin oldatot (1 rész telített alkoholt tartalmazó foszszin 10 rész vízre vonatkoztatva) felvisszük a készítményre, és a készítményt felmelegítjük a lángon a gőz megjelenéséig.
4. A készítményt vízzel mossuk és mikroszkóposan mossuk.
A baktériumok flagellájának kimutatására szolgáló mordant előkészítése:
12 g tannint feloldunk 48 ml vízben történő melegítéssel, és ehhez az oldathoz hozzáadunk 30 ml 95% etil-alkoholt tartalmazó telített fuchsin-oldatot. Az oldatot szűrjük és üvegedényben tároljuk. A mordant néhány nappal a főzés után készen áll a használatra, és több hónapig is fennállhat.
A flagellák kimutatására protozoonként a készítmények egyszerűen festhetők, metilkék, Lugol oldat vagy Romanovsky-Giemsa kifinomult módszere segítségével.
A kapszulák kimutatása a baktériumokban
A kapszuláknak nincs kimutatható affinitásuk az alapszínek számára, ezért a mikropreparátumok előkészítésére és színezésére szolgáló különböző módszereket alkalmazzák a kapszulák kimutatására, figyelembe véve a különböző típusú baktériumok kapszulák képződésének és megőrzésének jellemzőit.
A kapszula felismeréséhez színekkel kell rendelkeznie a kapszula hátterén és egy színes külső háttéren.
A belső hátteret a kapszula belső foltos mikrobasejtje képviseli. A kapszula körüli külső háttér természetes vagy mesterséges lehet.
Ha a mikroba állandóan megtartja a kapszulát, azaz nem csak belül a mikroorganizmus, de egy táptalajban (Klebsiella), a készítmény kimutatására kapszulák állíthatók elő tenyészetet in vitro tápközegben. És ebben az esetben a külső háttér mesterségesen jön létre.
Ha csíra formák és megtartja a kapszulát a mikroorganizmus (lépfene, a pestis, a pneumococcus), ilyen esetben ez kenet - lenyomata az érintett szerv elölt mikroorganizmus (máj, lép, nyirokcsomók) vagy köpet, tartalom bubo vér. A kapszula külső hátterét szöveti sejtek képviselik.
A Klebsiella kultúrából származó mikrokészítmény a kapszula kimutatására a Burri-Hins módszerrel megfesthető:
1. Egy kis csepp fekete hasított testet és egy csepp napi agar tenyészet kapszuláris baktériumok szuszpenzióját adjuk a tiszta üveglapra. Az elegyet enyhén kevertetjük egy hurokkal. akkor egy másik kenetet teszünk egy kenetnek, mint egy vér kenet.
2. Levegőn történő szárítás és az égő lángjában történő rögzítés után a készítmény 2-3 percig festett karosszolos foszsin Tsilyával, 1: 1 desztillált vízzel hígítva.
3. A készítés után a készítményt hideg vízsugárral alaposan átöblítik, szárítják és mikroszkóposítják. Sötét tushev háttéren látható színezett kapszulával körülvett színezett mikroorganizmusok. Kapszulának hiányában, egy fchsin színű cellához, a fekete háttér közeledik.
Abban az esetben, ha a mikropreparátumot a vizsgálati anyagból készítik, a kenet az Aniline festékkel festhető Gramm módszer szerint, a Romanovsko-Giemsa módszer szerint. A festett szövetszövetek hátterének színezésére szolgáló három módszer mindegyikében megfigyelhető a festett mikrobás sejteket körülvevő színtelen kapszula. Spórák észlelése.
Héja vastagsága és a tartalom sűrűsége miatt a spórák festetlenek maradnak, ha a készítményt egyszerű módszerrel kezelik anilin festékekkel vagy Gram-mal bonyolítják.
Gram vagy Leffler által történő festés esetén a mikrobás sejtek festett citoplazmájában belüli vita olyan, mint egy kerek vagy ovális granulátum, amely erősen refrakti a fényt.
Számos módszer festésére spórák (Ziehl - Neelsen át Ganzen át Orzeszkowa et al.) Annak lehetővé tétele, hogy elérjék egy elütő színű spórák a citoplazmában.
A mikropreparáció festésének módszere:
1) Egy rögzített készítményt egymásra egy szűrőpapírcsíkra (hogy megvédje a hatóanyag kicsapódjon festéket kristályok) öntöttünk rá, és Ziehl-féle oldat. A készítményt alaposan felmelegítjük 3-4 percig az égő lángja felett. Ahogy a folyadék elpárolog, a színezék hozzáadásra kerül.
2) A szűrőpapírt eltávolítjuk, és felvisszük egy kenet 2 - 3 csepp 5% -os ecetsav (kénsav, sósav, salétromsav vagy ecetsav) 30 másodpercig.
3) A készítményt alaposan mossuk hideg vízsugárral és megszárítjuk.
4) Metilén kék Leffler oldattal 1-2 percig festjük.
5) A készítményt vízárammal mossuk, szárítjuk és mikroszkóposan átmossuk. A citoplazma kék hátterén lila-vörös spóra látható.
Ez a módszer lehetővé teszi a spórák kimutatását nemcsak a sejten belüli képződés folyamatában, hanem a képződő spórának a károsított mikrobakészülékből történő kiszivárgása után is.
A karbolikus fuzin előkészítése Tsilya:
10 ml. A foszszin telített alkoholos oldatát feloldjuk 100 ml 5% -os karbonsavoldatban.
Volute szemek kimutatása
A volute (polifoszfát jellegű tartalék anyagok) gabonafélék számos mikroorganizmus sejtjeiben találhatók.
A baktériumokban és az aktinomicetákban a volui granulátumok a citoplazmában, élesztőben és gombákban találhatók a vacuolákban. Rendszerint a volute nagyobb a fiatal sejtekben.
A festetlen állapotban az öntvény durva szemcséit a plazma többi részéből nagyobb tűzállóság jellemzi. Azonban jobb, ha a színezett készítményekben a szemes szemek jelen vannak. Az öntvény szemcséinek kimutatására a metil Ligner kék színét alkalmazzuk. Az öntvény gabonája tehát kék-ibolyával és protoplazmával van színezve kéken.
Az illatos szemek differenciál színezése különböző színezési módszerekkel, például a Neisser módszerrel érhető el. Neisser kifejlesztette és javasolta a volutein szemek azonosítását a diftéria baktériumok sejtjeiben.
A Neisser módszer szerint történő festésnél a vörös szemek kék vagy sötétbarna színűek, a protoplazma pedig világosbarna.
A volute gabona az Omelyansky módszerének megfelelően színezhető. Ehhez egy fix kenethez öntsük a carb-fuzin Tsil-t 30 másodpercig. Ezután a festéket leöblítjük, a készítményt vízzel mossuk és 30-40 másodpercig elszíneződünk 1% -os kénsavoldattal. Ezután a savat lecsapjuk, a készítményt vízzel mossuk és metil-kékkel színezzük 1:40 hígítás mellett 30 másodpercig. Vízzel való mosás után a készítményt megszárítjuk és mikroszkóposan elkülönítjük.
Az ezzel a színeződési móddal rendelkező vörös szemek lila vörösek és jól láthatóak a kék citoplazma hátterében.
Amikor festettük az előállítás módjától Gram gabona volutin a tónus és a szín intenzitása nem differenciálódott a citoplazmában, így Gram festéshez kimutatására szemes volutin felhasznált nincs értelme.
Bizonyos mikroorganizmusokban a tartalékanyagok szénhidrát jellegű granulátumok formájában halmozódnak fel. Ezek kimutathatók, ha a sejteket Lugol oldatával kezelik. A keményítőszerű anyagok granulátuma kék színű, és a glikogénszerű poliszacharidok granulátuma vörösesbarna színű.
A mikropreparátumok festése a vizsgálati anyagból
A vér mikrokészítményeit Romanovsky - Giemsa, fuchsin, metilkék vagy más anilin színezék festik.
Megfigyelni a vegetatív szakaszában bél protozoa paraziták intravitális festés Lugol-oldat, a gyenge megoldások alapvető színezékek (eozin, metil-kéket, stb) hígításban 1: 1000, és még 1: 10000 részletes tanulmányt paraziták folyékony készítmények rögzített bilincsek (folyékony Schaudinn metil- vagy etil-alkohol), és megfestettük hematoxilinnal, metil-kéket, fukszin, festeni Romanovsky.
A vizelet, az agyvérnyomás, a köpet, a gramm, a Romanovsky-Giemsa, a metil-kék által festett köpet-rögzített készítmények mikroszkópos vizsgálata
Rögzített lemezeket gennyes tartalom fekélyek punctates lágyéki nyirokcsomók, a nyirokcsomók, attól függően, hogy a tervezett kórokozó Gram szerint festett Storm Romanovsky - Giemsa, ezüstös által Morozov.