Az embriók tárolása - hazai és mezőgazdasági állatok embrióinak átültetése
Az életképesség értékelését követően az embriókat Dulbecco foszfátpufferében kétszer mossák, miközben antibiotikumokat adnak be a minipayetbe, kis mennyiségű tápközeggel együtt. Az átültetéshez a donor nemi szervének kivonását követő első 2-4 órában.
Az embriók életképességének hosszabb ideig történő megőrzésének szükségessége a következő esetekben merül fel: megfelelő számú megfelelő címzett hiánya; a mosott embriók kétes minősége; embrió-bank létrehozása hosszú távú tenyésztési programok megvalósításához; a génállomány országok és kontinensek közötti kereskedelmi cseréje. Az embriók tárolásának számos módja van: rövid távon a szervezetből, rövid távon a szervezetben, hosszú távon a cseppfolyósított gázokban. Az embrióknak a szervezeten kívüli rövid távú tárolási módjának kifejlesztésénél a szövet- és sejttenyészetek tapasztalatait használták fel. A legmegfelelőbb táptalaj a TCM 199, amely 20% embrionális szérummal volt kiegészítve. Az embriókat szén-dioxiddal dúsított atmoszférában, 37 ° C állandó hőmérsékleten tárolják. Ilyen körülmények között életképesek maradnak 24-48 órán keresztül, és vannak olyan jelentések, hogy a hőmérséklet 10 fokos csökkenése lehetővé teszi életképességük meghosszabbítását 5-6 napig.
3-4 nap alatt embriókat lehet tárolni a nyulak tojásaiban, a túlélési arány 73% -os átlag. Jelenleg ez a módszer nem érvényes.
A mai napig 2 módja van az embriók mélyfagyasztásának: programozható üzemmódban (fokozatos fagyasztás); egylépcsős (vitrifikálás).
Amikor fagyasztás az első kiválasztott módszernek embriók (kiváló és a jó minőségű) egymás után hajtjuk végre keresztül krioprotektera oldatok (glicerin vagy dimetil-szulfoxid) növekvő koncentrációjú készítünk foszfáttal pufferolt sóoldatban, Dulbecco kiegészítve 20% magzati szérumot. Ezt követően az embriókat átvezetik tesztcsövekbe vagy ampullákba (1-4 egyenként), 0,3 és 0,4 ml közeggel együtt, krioprotektánssal. Lezártuk a tartályokat embriókat (kémcsövek lezárt fóliával lezárt ampullákban), és a hűtőszekrénybe helyezzük kamrába, ahol hűtjük, -7 fok üzemmódban 1 fokos percenként. E hőmérséklet elérése után a közeg kristályosodik. Ehhez folyékony nitrogénben a kémcső falai (ampullák) megérintik a csipeszeket a középső oszlop felső szélének zónájában. A további hűtést (-28 fok vagy -35 ° C-ig) 0,5 perc / perc sebességgel végezzük, majd a sebességet 0,1 perc / perc sebességre csökkentjük; 10 perc elteltével a végső hőmérsékletre a folyékony nitrogénbe merítéssel végeztük.
Egyidejű fagyasztás (vitrifikálás) - a táptalaj rendkívül magas viszkozitású kikeményítése, ami üveges szerkezetek kialakulásához vezet. Ez nagy koncentrációjú krioprotektáns és gyors hűtés esetén lehetséges.
A szarvasmarha-embriók transzplantációjának hatékonyságát nagymértékben a zigóták tárolási körülményei határozzák meg. Az embriók megőrzésének leghatékonyabb és legígéretesebb módja a mélyfagyasztás (krioprezerváció) a folyékony nitrogénben, -196 fokos hőmérsékleten. A krioprezervált embriók hosszú távú tárolására szolgáló módszer kifejlesztése jelentősen növeli a transzplantáció lehetőségeit. Csak ebben az esetben megbízható biotechnológiai alap lehet a kiválasztási program számára.
A mélyfagyasztott embriók hosszú távú tárolása számos előnnyel jár. Így nincs szükség a fenntartásához nagy állományok vagy az átvevők, mint transzplantáció lehet végezni bármikor, függetlenül az időzítés a rögzítés származó embriók donorok, ami jelentősen növeli a jövedelmezőséget transzplantáció. Ezen túlmenően, az embrió mélyhűtésének lehetővé teszi, hogy embriobanki genetikailag értékes állatok, valamint, hogy a génállomány ritka és veszélyeztetett fajok és szállítására embriók bármely országban a világon. A szakértők szerint az embriók krioprezervációja gazdaságilag indokolt, kizárja a genetikai sodródást, azaz a véletlen okok okozta változás a gének gyakoriságában. Figyelemmel a megfelelő biotechnológiai embriók túlélését 90%, és a terhesség recipiens tehenek után nonsurgical transzplantáció tartományban 50-55%. Azonban gyakran a termelési körülmények között, amikor a fagyás-felolvasztás technológiát nem tartják be, az embriók túlélése csökken, ami jelentősen csökkenti a krioprezerváció jövedelmezőségét. Bebizonyosodott, hogy a használata mélyhűtött embriók termelési környezetben egy költséghatékony, ha az embrió túlélési felolvasztás után nem kevesebb, mint 80%, és a százalékos terhesség tehenek címzett lesz 55-60%.
Az Oroszországban elfogadott technológia szerint az embriók be vannak fagyva olyan automatikus készülékek használatával, amelyek bizonyos üzemmódokban biztosítják a hűtési sebesség szabályozását. Lezárása után a tartályt embriók ampullákba vagy fiolákba töltjük jelölve, majd lehűtjük -6 20 fok 1 fok per perc, a kristályosítást végezzük, levezetéssel 0,3 fok per perc, és folyékony nitrogénbe merítjük. Egy másik mód is alkalmazható: -7 és -35 fok közötti hűtés 0,3 ° / perc sebességgel; -35 és -38 fok között percenként 0,1 ° C-os sebességgel és folyékony nitrogénbe merítéssel. Az embriók megolvasztását 25-37 ° C hőmérsékletű vízfürdőben végezzük 10-12 másodpercig. A fagyasztott embriók tárolására és szállítására különféle típusú Dewar hajókat használnak.
Az a gyakorlat, mélyhűtés szarvasmarha embriók arra utal, hogy az embrió túlélése jelentősen befolyásolja nemcsak a technológia a mély fagyasztás és felolvasztás, hanem a minőség és a fejlődési szakaszban. A sikeres krioprezervációhoz a morfológiai rendellenességek nélküli embriókat kell kiválasztani a késői morula vagy a korai blastociszták szakaszában.
Az embriók kiválasztásának szükségességét az is jelzi, hogy 10% -uk rosszul formált fejlődést mutat, és a krioprezerváció a blastociszta sejtek átlagosan 25% -át károsítja. Az ilyen embriók nagymértékben csökkentik az érintetlen blasztomereket, aminek következtében a tapasztalat és a fagyás és felolvasztás utáni fejlõdés lényegesen megszûnik.
Ha hibát észlel a szövegben, válassza ki a szót, és nyomja meg a Shift + Enter billentyűt