a sterilizációs eljárásokat eszközök és táptalajok
A megkülönböztető jegye a biotechnológia elve aszeptikus (steril), a következő feladatokat látja el:
1) megszüntetése idegen mikroflóra oldatból bevezetése előtt ott a magvak;
2) fenntartása tisztaságát kultúrában az egész növekvő folyamat;
3) sterilizálás a tápközeg, adalék komponensek, titrants, habzásgátlók;
4) Sterilizáló szállított levegő.
Alapvető a sterilizációs eljárásokat alkalmazott biotechnológiai termelési mutatja be az 1. táblázat.
A legfontosabb olyan technikák termikus sterilizálására berendezések és a média és szűrés - eltávolítani a mikroorganizmusokat a bevezetett levegő a bioreaktorba vagy más gázt. Jellemzően, a sterilizálás a média, használt berendezés nedves hőkezelés segítségével gőz és víz. Ez a kezelés sokkal hatékonyabb, mint száraz melegítés a bioreaktorba. A legtöbb általánosan használt sterilizáló túlhevített gőz nyomás alatt bevezetett közvetlenül a készülék vagy generált a bioreaktorban. Ha a közeg tartalmaz fehérjéket, a reaktor ebben az esetben külön sterilizáljuk, hogy elkerüljék ragasztás a közegben anyagok elektromos melegítő.
sterilizálási módszerek használják az ipari biotechnológiai
Meg kell találni az optimális hőmérsékletet, amelynél a sterilizálás érhető el, és a magas megbízhatóság egyidejűleg a lehető legkisebbre csökkenteni energiafogyasztás és károsodását az anyag. Fűtés okozhat kémiai változásokat táptalaj komponensek. 100 ° C-on és a magasabb cukor karbonil csoportok reagálnak ammónium-ionokkal vagy amincsoportok az aminosavak és fehérjék. Ez olyan termékeket, amelyek gátolják a sejtek növekedését. Ennek elkerülése érdekében meg kell külön sterilizálja a táptalaj komponensek.
Bomlása több anyag, mint a monoszacharidok és a vitaminok, kénytelenek korlátozni az idő és a hőmérséklet hővel történő sterilizálás, és néha teljesen elhagyni. Ezért, kémiai fertőtlenítőszerek vagy szűrése folyadékok. A szűrők, azonban hamar eltömődnek a mikroorganizmusok sejtjeinek és egyéb szuszpendált részecskéket.
A nagy léptékű gyártási tétel sterilizált tápanyag szubsztrátok és folyamatos eljárással. A szakaszos módszerrel, a sterilizáció végrehajtása fermentorban. A közeget melegítjük sterilizálási hőmérsékletre (128-135ºS), ezen a hőmérsékleten tartjuk 20-30 percig, majd lehűtjük fermentáció hőmérséklete. Gazdaságosabb folyamatos eljárás sterilizálás. A közeg felmelegedését végezzük oszlopok, gőz kidobó, hőcserélők. A inkubálás időtartama környezet biztosítania kell a inaktiválása vegetatív sejtek és spórák.
In vitro módszerek a termikus sterilizálására berendezések és táptalajok: autoklávozás, forró, pasztőrözés, kalcinálás.
Kiégetik. flashbirovaniem vagy sterilizált közvetlenül felhasználás előtt bakteriológiai hurkok és tűk, kések, kis fémtárgyak (olló, csipesz), és az üveg rudak, figyelemmel. fedőlemezekre.
Sterilizálás száraz hővel feldolgozására használatos száraz anyagok és eszközök, mint például kréta, keményítő. A melegítést végezzük 2 órán át 170 ° C-on egy hő elektromosan vagy szekrények. A hőmérséklet 170 ° C felett nem ajánlott: pamut és a papír elakadását elkezdi lebontani. Az adagolás befejezése után a sterilizálás szekrény kinyitják csak azután esik szobahőmérsékletre, vagy hatása alatt a hideg levegő az üveg eltörhet.
Áramló gőzsterilizálási (100 ° C) oldatához alanyok romlandó száraz hővel, és néhány táptalajon, nem tudnak ellenállni a magasabb hőmérsékletek (közepes szénhidrátokkal, tej). Ezt nevezik a frakcionált sterilizálás és termel három napig (30 perc naponta) Koch a kazánban vagy egy vízfürdőben. Az egyszeri fűtési hőmérsékleten 100 ° C-on 30 percig megölte a vegetatív sejteket, spórákat mikroorganizmusok életképesek maradnak. Miután fűtőközeg helyeztük 24 órán át termosztátban 28-30ºS. A spórák, amelyek túlélték az első melegítési időre, hogy csírázni be vegetatív formák, hogy megöltük az ezt követő hevítés. A műveletet háromszor megismételjük.
Sterilizálás telített gőzzel nyomás alatt - a leggyorsabb és legmegbízhatóbb módon, hogy a meleg sterilizálás elpusztítására legellenállóbb spórákat. Így a legtöbb sterilizált táptalaj. Ez a módszer azon alapul felmelegedés a szubsztrátum telített gőzzel nyomás alatt. Telített gőz kezelést úgy végezzük, egy vastag falú lezárt kazán - autoklávba. Az autoklávot egy fém kettős falú egység (2), a belső része, amely arra szolgál, mint egy sterilizációs kamra (1), ahol a sterilizálható anyagot helyezünk.
2. ábra. Reakcióvázlat autoklávban. 1 - sterilizációs kamra; 2 - szelep a levegő kivezető; 3 - nyomásmérő; 4 - biztonsági szelep; 5 - vodoparovaya kamrában; 6 - adagoló tölcsérrel az autoklávot vízzel; 7 - furat fogja tenni a betétek gőz a sterilizációs kamra; 8 - egy fedelet az autokláv; 9 - állni sterilizálható anyagból.
A sterilizációs kamra el van látva egy daruval (2) a levegőkimenet, egy nyomásmérővel (3) meghatározására gőznyomás és a biztonsági szelep (4) a gőz nyomása túl megnő, ami szükséges. Víz kamra (5) keresztül egy tölcsért (6) van töltve, hogy a jelig desztillált vízzel, hogy a víz-adagoló cső. A nyomásmérő jelzi, hogy mennyi a gőznyomás a kazán belsejében atmoszferikus feletti. Indikátorok a fizikai bar túlnyomáson megfelel egy bizonyos hőmérsékletet. Minden szervezet létesítő optimális hőmérséklet. Spórák több termotoleráns mikroorganizmusok, és jelentése a korlátozó tényező meghatározására közepes hőmérsékletű sterilizálás módban.
A növekedés összetevői média különbözőképpen reagálnak a termikus hatás. Annak érdekében, hogy elkerüljük nemkívánatos ártalmas változásokat alkalmazni lehet lágyabb módok sterilizálás vagy a sterilizálás különálló komponenst.
Pasztörizálás hiányos, vagy részleges, sterilizálás, ami azt jelenti, melegítés 65-80ºS 30 percig, majd gyors hűtés, hogy 10-11ºS.
Sterilizálás szűréssel át finom pórusú szűrők alkalmazása feldolgozására használt a média, a komponensei, amelyek könnyen ra melegítve elbomlik. Keresztül finom pórusokat, a szűrő át csak kis mikroorganizmusok (vírusok, bakteriofágok).
A leggyakrabban használt szűrők kaolin képviselő tselindry üreges, egyik végén zárt. Ahhoz, hogy a folyadékot egy szűrőn bocsátjuk át, szükséges, hogy hozzon létre egy nyomáskülönbség mindkét oldalán a henger. Ez úgy érhető el negnetaniem vagy kiürítésére útján olaj szivattyú. A szűrő van csatlakoztatva a vevő számára a folyadék - Bunsen lombikba. Húzott végére a lombikokat vattával lezárjuk,. Szűrő sterilizáltunk egy vevőt. A táptalajt a sterilizálandó az edénybe, amelyet került egy szűrő lombikba, és Bunsen pamut-géz dugó be van dugva a szivattyú és a levegő szivattyúzzák. A nyomás alatt álló folyadék áthalad a szűrőn, a vevőben. Baktériumok maradnak a külső oldalán a szűrőt. A módszer hátránya abban rejlik, hogy a lassú szűrhetőség és a szükség gyakori szűrőtisztítás.
Munkarend
1.Prigotovit pamut-géz dugóval sterilizálására üvegbe vagy üvegekbe.
2.Podgotovit sterilizálás (csomagolva nehéz papír) 4 Petri-csésze. Zaprobkovat és papírba csomagolt szalag pipettával.
3.Prigotovit egy előre meghatározott eljárás Tutor szilárd növekedési tápközegen.
4.Prosterilizovat előállított táptalaj vízfürdőben frakcionált módszerrel.
5.Prigotovit steril 0,89% nátrium-klorid-oldatban (sóoldatban).
4. Felszerelés és reagensek esetében elvégzendő laboratóriumi munka: